Способ индикации простагландина е @ в биологических объектах

 

Изобретение относится к гистохимии . Цель изобретения - повышение точности способа. Препарат помещают под люминесцентный микроскоп и измеряют интенсивность флюоресценции с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 нм. После антигенного воздействия уровень простагландина Ej во внутрифолликулярных клетках селезенки повышается. 2 табл. (/ С м

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1 дп 4 G 01 N 33/52

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3870311/28-14 (22) 04. 02, 85 (46) 07. 10.87. Бюл. У 37 (71) Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова (72) Д.С. Гордон и В.А. Бочкарев (53) 612.015(088 ° 8) (56) Берштейн Л.М., Успехи физиологических наук, т. 6, 1975, В 2, с. 111 †1. (54) СПОСОБ ИНДИКАЦИИ ПРОСТАГЛАНДИНА

Е В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ (57) Изобретение относится к гистохимии, Цель изобретения — повышение точности способа. Препарат помещают под люминесцентный микроскоп и измеряют интенсивность флюоресценции с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 нм, После антигенного воздействия уровень простагландина Е во внутрифолликулярных клетках селезенки повышается. 2 табл.

1343359 шенные срезы толщиной 20 мкм иэ нефиксированной ткани селезенки помещали на столик люминесцентного микроскопа К1-2 с микрофлюориметрической приставкой ФМЭЛ-1А. С помощью светофильтров микроскопа СС-1, ВС, СЗС и запирающего — ЖС-18 возбуждали люминесценцию исследуемого объек ð та. Из люминесценции внутрифолликулярных клеток, которые ставились в просвет зонда, с помощью интерференционного светофильтра 4 приставки

ФМЭЛ-1А выделяли световой поток с длиной волны 450 нм, Его интенсивность замеряли в условных единицах . шкалы усилителя прибора (значение

I») . Затем измеряли интенсивность светового потока с фильтра 5 пристав ки (460 нм) и получали значение I2 в той же точке, Далее рассчитывали

1 значение отношения — . При наличии

I»

ПГЕ значения отношения больше единицы, при отсутствии ПГŠ— равны 1 или меньше 1: В клетках интактных и

1 а б л н ц а ) Подопытные крысы

Интактные крысы

I» Фильтр 4 2 фильтр 12 7 »

0,21

0,63 3

0,64 1,93

0,48 1,5

0,84

0,96

1,14

0,70

1,04

0,33

0,73

1,02

0,56

0,32

0,73 фермент простагландинсинтетазу .и уменьшать, вплоть до исчезновения, уровень ПГЕ2 в клетках, которые его вырабатывают. Были взяты 2 группы крыс по 5 крыс в каждой группе. I группа — всех крыс забивали беэ воздействия, интактные. II группа—

55 каждая крыса получала подкожную инъекцию метиндола в дозе 0,4 мг на

1 крысу и через 20 мин животных забивали. Способ забоя в I u II группах — передозировка эфира. У крыс I

Изобретение относится к области гистохимии и может быть использовано для определения простагландина Е2 (ПГЕ2) в тканевых .структурах.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Препарат, исследуемый на наличие

ПГЕ2, помещают под люминесцентный микроскоп, измеряют интенсивность флюоресценции с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и

450 нм, и при соотношении показателей интенсивности более 1 определяют наличие ПГЕ2 в пробе ° Способ позволяет определить в относительных единицах наличие ПГЕ2 в микроскопируемой клетке, выявить в относительных единицах уменьшение или увеличение уровня исследуемого простагландина в ходе заболевания, лечения или экспериментального воздействия, констатировать полное исчезновение простагландина в объекте.

П р и и е р 1 ° Способ был применен для выявления ПГЕ во внутрифолликулярных люминесцирующих клетках селезенки интактных крыс, а также у крыс после введения антигена. ВысуИэ табл. 1 видно, что через 4 сут после введения антигена в большинстве клеток значение I> уменьшилось, при

I этом значения отношения — возрас.

I» тали, что свидетельствует о повышении уровня ПГЕ2 ВО Внутрифолликулярных клетках селезенки после антигенного воздействия на организм.

Пример 2. Лекарственное вещество метиндол (индаметации) известно своим свойством блокировать подопытных животных встречались разные варианты значений, что вызвало необходимость вычисления среднеарифметических значений. Результаты пред" ставлены в табл. 1.

I» Фильтр I2 Фильтр I2/Т, 4 5

1343359

Т а б л и ц а 2

Группа крыс

0,67

1,8

0,35

0,95

0,76

0,8

Ю

Составитель Н ° Гуляева

Техред А.Кравчук

Корректор М. Демчик

Редактор В. Данко

Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Заказ 4819/47

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. 11роектвая, 4 и II групп извлекали вилочковую железу (тимус), резали ее на криостате, монтировали и сушили срезы на предметных стеклах, микроскопировали.

Микроскопическое исследование проводили на люминесцентном микроскопе

Люмам-4 с микроспектрофлюориметрической насадкой ФМЭЛ-1А. Объектом исследования явились аутолюминесциру- 10 ющие премедуллярные клетки тимусных долек.

Каждую клетку сначала подводят к зонду (затемненный кружок) в центре поля зрения. Затем от нее последовательно проводят замеры светового потока с интерференционными светофильтрами, сначала фильтром 4, потом фильтром 5. Показания в условных единицах снимают с усилителя прибора У-5-6. Интактные и подопытиые животные забиты в один день, замеры проведены на одном приборе при полной идентичности всех параметров.

Вычисляют средние арифметические значения для Iq u Iz, затем подсчитывают среднее значение для отношения

I 22

I у интактных крыс и крыс котоУ рым вводили метиндол (группа II), У животных с блокированной простагландинсинтетазой (группа II) отноI шение — в среднем оказалось меньше

Ig

1. В группе I — у интактных животIð 35 ных — — больше 1 (табл. 2).

Таким образом, искусственное снижение уровня ПГЕ снижает и числовое значение отношений I /I .

Изобретение позволяет повысить точность определения ПГЕ за счет объективизации способа.

Формула и з обре т е и и я

Способ индикации простагландина

Е в биологических объектах путем облучения объекта светом в коротковолновой области с последующей регистрацией люминесценции, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследование проводят под люминесцентным микроскопом, измеряют интенсивность флюоресценции,с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и

450 нм, и при соотношении показателей интенсивности более 1.определяют наличие простагландина F в пробе.