Способ определения фагоцитарной активности лейкоцитов

 

Для ускорения и повышения точности способа определяют рН гепаринизированной венозной крови, количество полиморфно-ядерных лейкоцитов в 1 мл крови и количество бактерий в 1 мл взвеси суточной культуры стафилококка . рН бактериальной взвеси доводят до исходного значения рН исследуемой крови. Смесь полиморфноядерных лейкоцитов с дозированной бактериальной нагрузкой термостатируют при температуре, соответствующей температуре тела обследуемого больного. По истечении 30, 120 мин готовят мазки для подсчета фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа , а также количества живых и мертвых бактерий в 100 фагоцитах. 1 табл. S (Л СлЭ ел СП СО 00 ю

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5И 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4023409/28-14 (22) 17.02.86 (46) 30. 11.87. Бюл. Р 44 (71) 1-й Московский медицинский институт им. И.M. Сеченова (72) В.Н. Галанкин, Э.Юнусходжаев, А.M. Токмаков и Л.А.О.Мамедов (53) 616.153.922(088.8) (56):Кудрявицкий А.И. Оценка киллерной бактерицидности нейтрофилов периферической крови здоровых доноров и больных в прямым визуальном методе. — Лабораторное дело, 1985, У 1, с. 45-47. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ

АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ

„„SU„„1355932 А 1 (57) Для ускорения и повышения точности способа определяют рН гепаринизнрованной веноэной крови, количество полиморфно-ядерных лейкоцитов в 1 мл крови и количество бактерий в 1 мл взвеси суточной культуры стафилококка. рН бактериальной взвеси доводят до исходного значения рН исследуемой крови. Смесь полиморфноядерных лейкоцитов с дозированной бактериальной нагрузкой термостатируют при температуре, соответствующей температуре тела обследуемого больного. По истечении 30, 120 мин готовят мазки для подсчета фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа, а также количества живых и мертвых бактерий в 100 фагоцитах. табл.

1 135

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано в гнойной хирургии для определения реэистентности организма больных в клинических условиях.

Целью изобретения является ускорение и повышение точности путем дополнительного доведения рН бактериальной взвеси до значения рН исследуемой крови и проведения инкубации при температуре, равной температуре тела пациента.

Способ осуществляют следующим образом, В пробирку с 20 ME/ìë гепарина добавляют 5 мл венозной крови, определяя при этом исходное значение рН, и проводят подсчет количества полиморфно-ядерных лейкоцитов в

1 мл крови и количество бактерий в

1 мл взвеси суточной культуры стафилококка. Определяют рН бактериальной взвеси, доводя его до исходного значения рН исследуемой крови добавлением соответствующего количества фосфатного буфера (фосфатный буфер готовится на 10 дней, только для коррекции рН бактериальной взвеси), Пробирку со смесью полиморфно-ядерных лейкоцитов с дозированной бактериальной нагрузкой термостатируют при температуре, равной температуре ,тела обследуемого бодьного. По истечении 30, 120 мин готовят мазки для подсчета фагоцитарного инцекса, фагоцитарного числа„ а также количества живых и мертвых бактерий в 100 фагоцитах.

Пример 1 Больная Т., 31 год. Поступила в клинику с диагнозом одонтогенная флегмона подчелюстной области и крылочелюстного пространства слева. Температура тела при поступлении 37,2 С. Общее количество лейкоцитов в 1 мл крови 9250000, из них 77% (или в абсолютных числах

7122500) полиморфно-ядерных.

В 5 мл гепаринизированной (20 МЕ/мл) венозной крови сразу после ее забора определяли значение рН, которое составило 7,36, Проводился подсчет полиморфно-ядерных лейкоцитов в 1 мл крови. Готовили бактериальную взвесь из расчета 1:10, т ° е, 7122500 5 10 = 3561?5000 стафилококков, или 0,36 10 микробных

9 тел/мл, рН бактериальной взвеси 6,12.

5932 2

?О

ЗО

Проводили коррекцию бактериальной взвеси (0,36 мл) добавлением 0,7 мл

0,1 н. фосфатного буфера (рН 7,36).

Время манипуляций до контакта бактерий с фагоцитами 20 мин. Смешанную с бактериальной взвесью кровь инкубировали B термостате при

37,2 С в течение 30 мини перемешивании каждые 10 мин, Через 30 мин делали мазок и остальную часть инкубировали еще 90 мин при 37,2 С. 3атем приготовили нужное количество мазков. Высушенные мазки на воздухе фиксировали в метаноле и окрашивали по методу Романовского-Гимза в течение 10 мин.

Результаты подсчета: фагоцитарный индекс через 30 мин 72% фагоцитарное число через 30 мин 3,2; фагоцитарный индекс через 120 мин

75%, фагоцитарное число через

120 мин 4,6 и индекс бактерицидности нейтрофилов 89%.

Индекс бактерицидности нейтрофилов (ИБН), %: 88, 86, 92 (в среднем

88), коэффициент вариации 0,0223 примерно в 10 раз меньше, чем в прототипе, что указывает на повышение точности исследования.

При исследовании bio прототипу время контакта бактерий с фагоцитами, включая отмывки лейкоцитов в ходе инкубации, составило 90 мин, а результаты поцсчета фагоцитарной активности полиморфно-ядерных лейкоцитов: фагоцитарный индекс через 30 мин

90%, фагоцитарное число через

30 мин 5,5; фагоцитарный индекс через

120 мин 88%, фагоцитарное число через 120 мин 4,8, ИБН, %: .89, 40, 73 (в среднем 67%, коэффициент вариации

0,2373).

Пример 2, Больной Ф., 25 лет. Поступил в клинику с диагнозом одонтогенная флегмона подчелюстной области и крылочелюстного пространства слева. Температура при поступлении 38,2 С. Количество лейкоцитов в 1 мл крови 12500000, из них

75% (или 9375000) полиморфно-ядерных.

При исследовании в момент взятия крови значение рН 7,,16. рН бактериальной взвеси 6,50. Проводили коррекцию рН бактериальной взвеси добавлением 0,36 мл 0„1 н. фосфатного буфера (рН 7,22). Время до контакта бактерий с фагоцитами 20 мин. Смешивали кровь и бактерии, инкубирова13559

Фагоцитарный индекс через

Фагоцитарное число через

СтатМетод показатели

ИБ Н

30 мин 120 мин

30 мин 120 мин

M 7

2,7

3,1

2,4

1,6

0,1.0,2

0,3

М(абс) 2257000 2294000 6094000 7111000

6826000

15,2

13,1

0,3

0,3

0,3

0,3

0 5

М(абс)

М, Е

М(асб)

М, 7

М(абс) 3626000 3533000 55296000 45929000

33987000

0,4

1017000

284000

+37000 т-Т

2,1

II-2

9367000

-111000

3 ли при 38,2 С в течение 30 мин, переворачивая пробирку каждые 10 мин, Через 30 мин приготовили мазок и остальную часть смеси продолжали инкубировать 90 мин при тех же услови5 ях. По окончании инкубации приготовили мазки, как в примере 1.

Результаты подсчета: фагоцитарный индекс через 30 мин 807, фагоцитарное число через 30 мин 3,9, фагоци- 10 тарный индекс через 120 мин 837, фагоцитарное число через 120 мин 4,1.

ИБН, 7: 98, 99, 99 (в среднем

99), коэфиициент вариации 0,0030 — примерно в 25 раз меньше, чем в прото- 15 типе, что доказывает повышение точности исследования.

Пример 3. Больной А., 54 года. Поступил в клинику с диагнозом подчелюстная флегмона справа. 20

Температура тела при поступлении

39,0 С ° Общее количество лейкоцитов в 1 мл крови 6500000, из них 86Х (или 5590000) полиморфно-ядерных.

Изучение фагоцитарной активности 25 о по предложенному способу проводилось, как в примерах 1 и 2.

Подготовительное время до контакта бактерий 20 мин.

Результаты подсчета фагоцитарной 30 активности: фагоцитарный индекс через 30 мин 80%, фагоцитарное число

32 4 через 30 мин 3,7; фагоцитарный индекс через 120 мин 827, фагоцитарное число через 120 мин — 4,5.

ИБН, 7: 82, 86, 85 (в среднем

84), коэффициент вариации 0,0166— примерно в 5 раз меньше, чем в прототипе, что доказывает повышение точности исследования.

Результаты исследований приведены в таблице.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет сократить подготовительное время до контакта с бактери4 ями более чем в 4 раза, а также повысить точность исследования.

Формула изобретения

Способ определения фагоцитарной активности лейкоцитов путем смешивания их с суточной культурой микроорганизмов, инкубирования смеси с последующим подсчетом фагоцитарного индекса и индекса бактерицидности нейтрофилов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, перед смешиванием дополнительно доводят рН бактериальной взвеси до значения рН исследуемой крови, а инкубацию проводят при температуре, равной температуре тела пациента.