Способ дифференциальной диагностики инфекционного гепатита с желтухами невирусной природы

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повышение точности, ускорение и упрощение способа . Берут различные серии агрегированного гамма-глобулина, смешивают с полизтиленгликолем и инкубируют . После центрифугирования осадок отмывают и к осадку добавляют едкий натрий. В пробах определяют содержание белка и снимают показания прибора для каждого разведения гамма-глобулина . Вычисляют содержание белка для каждого разведения. Данные циркулирующих иммунных комплексов у больных сравнивают с зтими же показателями у здоровых людей. Способ не требует дефицитных реактивов. с S (Л со ел ел о ю

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

13,",, ...,,l3

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

БК%ЛНОТЕКА

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2 1 ) 3 4 2 4 85 9 / 2 8- 1 4 (2 2 ) 2 2 . 02 . 82 (4 6 ) 3 0 . 1 1 . 8 7 . Бюл . У 4 4 (7 1 ) Каз ан ский государственный медйцинский институт им . С . В . Курашов а и Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиоло гии (7 2 ) Л . Ч . Саме рханова, Д . Ш . Е налеева, А . Н . Иаянс кий и Б . А . Молотило в (5 3 ) 6 1 5 . 3 7 3 (08 8 . 8 ) (5 6 ) Жилкин а И . К . Клинико-иммунологиче ские сопоставления при вирусном гепатите и механических желтухах различного происхождения . Канд . дис .

Запорожье, 1 9 7 9 .

„„SU„„1355927 А1 (51)4 G 01 N 33/48 33/49

ВСЕСОа? В..А Я (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОГО ГЕГфТИТА С

ЖЕЛТУХАМИ НЕВИРУСНОЙ ПРИРОДЫ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — повышение точности, ускорение и упрощение способа. Берут различные серии агрегированного гамма-глобулина, смешивают с полиэтиленгликолем и инкубируют. После центрифугирования осадок отмывают и к осадку добавляют едкий натрий. В пробах определяют содержание белка и снимают показания прибора для каждого разведения гамма-глобулина. Вычисляют содержание белка для каждого разведения. Данные цир- с кулирующих иммунных комплексов у больных сравнивают с этими же показателями у здоровых людей. Способ не требует дефицитных реактивов.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для дифференциальной диагностики инфекционного гепатита с надпеченочными и подпеченочными желтухами.

Целью изобретения является повышение точности, упрощение с.пособа и

его ускорение.

Способ осуществляется следующим образом.

Сыворотку разводят боратным буферным раствором (рН 8.4) в отношении

1:3 и разливают по 0,33 мл в два ряда пробирок: 1-й ряд содержит 3 мл буферного раствора и служит контролем, 2-й ряд 3 мл 4,166 -ного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) — опытная проба. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 1 ч, затем пробы замеряют на фотоэлектроколориметре в диапазоне синего цвета с длиной волны до 400 мкм для определения разницы оптической плотности контроля (сыворотка с буфером)1.и опыт (сыворотка с ПЭГ). При положительных результатах отмечается помутнение опытной пробы разной интенсивности. Сыворотку сохраняют в о холодильнике при 4 С не более 7 сут, что позволяет накапливать сыворотки от больных и по мере надобности ставить их одновременно. Определяют содержание агрегатированного гаммаглобулина.

Так как показания различных приборов могут иметь некоторые колебания, для стандартизации показаний приборов используют калибровочную кривую, построенную следующим образом.

Различные серии коммерческого гамма-глобулина разводят физиологическим раствором в отношении i:10 (1 мл гамма-глобулина + 9 мл физраствора) и агрегируют на водяной бане о при 61 С в течение 1 ч. От каждой серии агрегатированного гамма-глобулина берут по 0,33 мл и смешивают с 3 мл 4,166 -ного раствора ПЭГ. Ин-. кубируют в течение 1 ч при комнатной температуре, затем центрифугируют при 5000 об/мин. Полученный осадок дважды отмывают смесью 0,3 мл физраствора и 3 мл 4,166 -ного раствора ПЭГ. К осадку добавляют 2 мл

0„1 н,раствора NaOH и определяют в полученных пробах белок по методике

Лоури. Таким образом устанавливают

5927

2 содержание белка для исходного агрегатированного гамма-глобулина, вступившего в реакцию с ПЭГ. После этого для каждой серии агрегатиро5 ванного гамма-глобулина готовят на физрастворе следующие разведения:

1:2, 1:4, 1:8, 1: 16, 1:32 — по 1 мл.

С каждым из этих разведений ставят реакцию так же. как с сывороткой. С помощью ФЭК замеряют разницу между опытной и контрольной. пробами и снимают показания прибора для каждого разведения гамма-глобулина. Зная количество белка, вступившего в реакцию с ПЭГ, для исходного агрегатированного препарата, вычисляют белок каждого разведения. Далее строят калибровочную кривую, где по оси абсцисс откладывают количество агрегатированного гамма-глобулина, а по оси ординат — оптическую плотность в единицах ФЭКа.

Данные циркулирующих иммунных

25 комплексов (ЦИК) у больных острым инфекционным гепатитом и желтухами другого генеза сравнивают с показателями ЦИК у здоровых лиц, содержание

ЦИК у которых колеблется от 20 до

При значениях ЦИК более, 200 мкг/мл делают вывод о наличии инфекционного гепатита, а при содержании ЦИК от

20 до 200 мкг/мл и при наличии соответствующей клинической картины

35 делают вывод о желтухе невирусной природы.

Наблюдали 15 1 больного желтушной формой острого инфекционного гепати4 та легкого и среднетяжелого течения и 43 больных желтухами другого генеза.

Результаты показали, что у боль— ных острым инфекционным гепатитом с легким и среднетяжелым течением заболевания в разгаре желтухи содержание ЦИК повышено (85,43 больных) и достоверно отличается от показателей ЦИК у здоровых лиц. с

Для сравнения наблюдали больных желтухами невирусной этиологии: механическими желтухами (калькулезный холецистит, опухоли гепатобилиарной системы) 36 человек, надпеченочными

55 желтухами (гемолитические желтухи, пигментные гепатозы) 7 человек.

Содержание ЦИК у этих больных колеблется в пределах, наблюдаемых у здоровых лиц, и достоверно отлича=

3 1355927 ется от показателей ЦИК у больных инфекционным гепатитом.

Пример 1. Больная M 40 лет. Поступила в инфекционный стационар с подозрением на инфекционный гепатит. Жалобы на боли в животе, тошноту, рвоту, плохой аппетит, темо пература 38,5 С. Отмечалась болезненность при пальпации в правом подреберье, нарастала желтуха. Наряду с изменением функциональных проб пе чени: общий билирубин 10,56 мг . (в норме до 1 MIX), прямой билирубин

8,56 MrX (в норме 0 мг%), тимоловая проба 130 оп. ед. (в норме до 40 on. ед.), аланинаминотрансфераза в разведении 1:10 940 к.ед. (в норме до

100 к ° ед.) — имелась выраженная билирубинурия.

Параллельно с этими анализами проведено определение содержания ЦИК по предложенному методу. Оно оказалось повышенным 331 мкг/мл (в норме до 200 мкг/мл). На основании этих данных поставлен диагноз: острый инфекционный гепатит, желтушная форма, C среднетяжелое течение. Правильно поставленный диагноз способствовал адекватной терапии и скорейшему выздоровлению больной.

У остальных 150 больных диагноз острого инфекционного гепатита ставился аналогичным образом.

Пример 2. Больная Н.,60 лет.

Поступила в инфекционный стационар с подозрением на инфекционный гепатит с жалобами на слабость, тошноту, рвоту, боли в животе, температуру

"38,6 С . При обследовании выявлена выраженная желтушность кожи и склер, умеренная болезненность при пальпации в области правого подреберья, билирубинурия, изменение функциональных проб печени: общий билирубин 6,4 MrX, прямой билирубин 4 мг ., тимоловая проба 7 оп.ед., аланинаминотрансфераза в разведении i:10 250 к.ед. Проведено определение уровня ЦИК в сыворотке кро5 ви (54 мкг/мл). На основании этих данных исключена возможность инфекционного гепатита, предположительный диагноз — хронический калькулеэный холецистит, холедохолитиаз, механическая желтуха. Больная переведена в хирургическую клинику. Диаг-: ноз подтвердился.

У остальных 35 больных предположительный диагноз ставился аналогичным образом.

Таким образом, предложенный способ позволяет более точно диагностировать инфекционный гепатит и желтухи невирусной природы по содержанию

2p B cblBopoTKB KpoBH ЦИК прН этОм Нс пользуются и другие клинико-лабораторные данные.

Предложенный способ более точен за счет точного определения желтух

2б невирусной природы (12.5 ), в то же время он менее трудоемок и не требуо ет дефицитных реактивов, причем время на постановку реакции сокращается в два раза (вместо 4 ч по способу-прототипу 2 ч для исследования

30 сывороток), Формула и з о б р е т е н и я

ЗБ

Способ дифференциальной диагностики инфекционного гепатита с желтухами невирусной природы путем исследования крови, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения

40 тОчности, ускорения и упрОщения спо соба, в исследуемой крови определяют циркулирующие иммунные комплексы и при содержании их равном 200 мкг/мл и менее диагностируют желтуху неви

45 русной природы, а при содержании более 200 мкг/мл диагностируют инфекционный гепатит.

Составитель Г.Крюкова

Редактор Л.Веселовская Техред А.Кравчук Корректор С.Черни

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР.по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5789/40

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Пдректная, 4