Способ индикации вирусов

 

) Изобретение относится к вирусологии . Цепь изобретения - ускорение индикации вирусов. Стафилококк обрабатывают иммунной сывороткой. Готовят мазок, на который наносят исследуемый вирус, содержащий материал, обрабатывают его иммунной противовирусной сывороткой и видоспецифичес- KSIM иммуноглобулином, меченным флюоресцеинизотиоционатом. По специфическому свечению на поверхности стафилококка осуществляют индикацию вируса . Проведение способа сокращается до 3-4 ч.

СОЮЭ СОВЕТСНИХ

СО1 1ИАЛИСТИЧЕСИИХ

РЕСПУВЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ а

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТШИЙ И OTHPbITA1 (46) 23.06.91. Бюл. 9 23 (21) 41? 3722/14 (22) 26. 09. 86 (71) Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и, микробиологии (72) В. Г. Гудков, Л.В. Кулькова, П.Г. Рытик, В.А. Шкет и Н.В. ерновецкая (53) 615. 373 (088. 8) (56) Носков Ф. С. Люминисцирующие антитела. M. 1972, с. !04-129. (54) GIOCOB ИНДИКАЦИИ ВИРУСОВ (57) Иэобретение относится к вирусо„.80„„ИВЗОЩ А1 (51) 5 С 01 8 33/533 А 61 К 39/12 логии. Цепь иэобретения — ускорение индикации вирусов. Стафилококк обрабатывают иммунной сывороткой. Готовят иаэок, на который наносят исследуемый вирус, содержащий материал, обрабатывают его иммунной противови" русной сывороткой и вйдоспецифическим иммуноглобупином, меченным флюоресцеиниэотиоционатом. По специфическому свечению на поверхности стафилококка осуществляют индикацию вируса. Проведение способа сокращается до 3-4 ч.

И 1<3(г>е е>11>е oòíîållòñit к 13>ц1чсо логик, в члстности к дигностике вирусных ккфекций, напр>>мер ротлвируской. 7

I!e!lE изобретения является ускоpt !11lt индикации 13крусов методом ф>по— оресцирующкх антител.

Способ осуществляется следую>цим образом. Стлфилококк предварительно 10 обрабатывают им >унной сывороткой. На предметном стекле готовят мазок, на который наносят ксслг дуемый вируссодержащий материал, брлбатыг>ают иммунной противонируснс и сывороткой и видоспецифическим >гммуноглобулином, меченным фвюоресцеикизоткоционатом (113!ГЕЦ). Индиклцию вируса осуществляют по сне>;ифк 1 скому с>3ечению на поверхности стлфилокок>>а. 20

Пример 1. Стлфилококк сухой, содержа>.(ий белок Л, производства Лени>11 рлдского !!ИИЭГ1 им. Пастера, ре1-»дрлтируют в 2 мл дистиллированной воды. 0,17-ную взвесь стафилококка 25 смешивают с ра>>н>»м объемом Kpo!IH ;ней иммунной сыворотки к ротлвирусу, ir!.eя,:.н>т нл 30 мин н термостат при и .>7 . и (>ериод>>чески встряхивают.

".л тем сен t. ибилизиронанную антите- 30 ллмн взвесь ст; филококкл три3>(д(.1 от-. мывают в 2 мл физиологи (еского раствора !>лС1, отделял кажда>1" раз взвесь к>>еток о > раствора центрифугиронан»ем ЕрН 300(> об/ь>к>1 13 течение 10 MHH.

После этого доводят взвесь стафилок кка до 1>ервоначальной концентрации (О, 1X) тем же раствором !(лС1, тщатель но нстряхиваюг, петлей переносят на обезжиренное разграфленное предметное стекло, делают по 8 мазков на каждом иэ них подсушивают на воздухе, фикУ о скруют в ацетоне 15 мин при 4 С.

На фиксированные препараты наносят каплю 1Е-ного растно!>а бычьего 45

«ыиороточкого альбумина на дистиллирован >оН воде„ помещают ао влажную камеру при 37 С па 30 мин, затем 10 мин промывают B дистиллирог3аниой воде, лодсушинают на воздухе. Э ra манипуляция направлена на предотвращение не50 специфической сорбции вируса и антител поверхностью стафил E>toкка.

На пр>>готонленные так>н> обоаэом препараты наносят каплю исследуемомого материала, инкуб>ируют во влаж55 о ной камере при 37 С 30 мин, 1О мин

rip! мьп>ают ь .-,истиллкр(>ванной воде, подсу>пинаю - «а но зг(ухе . !(О том наносят

1 (>11>11 »(м((Унной сыв>>Ро T>ti> и 1Рской

«E3»nк11 Е< ротлвирусу и млнипуляц>п> с пре rl !!!n Tом (инкубацпя, промывка, сушка) повторяют. На E>a>cóøå»»»>e стекла наносят каплю меченного ФИТЦ иммуноглобул>>на против гюто>>улинон морской сг>инки в смеси с родамином, стекла помещают на 30 мин во влажную каО меру при 37 С с последующей отмывкой в течение 20 мнн и высушивают 1-2 мин на воздухе.

Индикацию вируса осуществляют в люминесцентном микроскопе типа Л(!МАМ или МЛ под 1>ыь>ерсионнь>м объективом (x90) при светофильтрах, определяемых харак-ером флюорсхромов н сс, -.àr(люминесцирующей сыноро гки. Время индикации вирусон не более 4 ч. !! р и м е р 2. Па препарат, содержащий комплекс — стафилококк-крали п,я иммунная сыворотка к ротанирусу, наносят известный ротавирус, нмму >»ую сыворотку морской свинки к ротлвнрycy к соответствующий антинидоной кммуноглобулин, меченный флюоресцеин>". отиоционат (ФИТЦ) и смеси с г1>д>ьмином (положительный контроль) .

Операции осуществляются как н примере 1, Бремя индикацк> ротавирусон не более 3 ч. !! р и м е. р 3. На препарат, содерж;.щий комплекс — стлфилококккрзличья им:>унная сь>норотка к ротанирусу, наносят среду 199, иммунную сыворотку морской свинки и сooTBpT стнующий лн>инидонлй иммуноглобулин, м>"ченный ФИТЦ, н смеси с родамином (отрицательный контроль). Операции осуществляют как в примере I. Время инди.акации не более 3 ч.

Положи-,ельными, т.е. содержащими вирус, считают препараты с зеленым свечением на поверхности отдельных или группы стафилококков. В пробах, не содержащих ротавирусный антиген, стафилококк окрашивается красноватооранжевым цветом.

В предлагаемом пособе поставленная цель — ускорение исследований по индикации вируса с помощью ИФА — дост>>гаетсл эа счет исключения стадии репродукции вируса в инфицированной культуре клеток, в>! что обычно затрачивается около 2 сут. Проводящиеся взамен этого операции со стафилококком занимают не более 3-4 ч. упро>1(нке ксследовани» достигается з.> счет исключ..ния работы с куль1393085

Составитель В. Литовченко

Редактор Л. Народная Техред М.Ходанич Корректор Л. Пилипенко

Заказ 2569

Тираж 428 Подписное

ВНИИПИ Государственного. комитета СССР по делам изобретений и открытий

1!303$, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 турой клеток, требующей специальных условий, в частности обеспечения стерильности, наличия оборудования, питательных сред, реактивов. Операции со стафилококком не требуют специаль5 ных условий, их можно проводить в любой латоратории и в полевых условиях.

К достоинствам способа относится возможность заготовки впрок и длительного хранения консервированного препарата стафилококка, чего нет при использовании культуры клеток. Использование коммерческого препарате повьппает, кром того, и стандартность исследований.

Формула и з о б р е т е н и я

Способ индикации вирусов, включающий нанесение на чувствительный субстрат вируссодержащего материала и меченного флюоресцеинизотиоционатом иммуноглобулина, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения индикации, в качестве чувствительного субстрата используют фиксированные клетки стафилококка штамм Ccwan I, обработанные иммунной сывороткой.