Способ подготовки эритроцитов к электронно- микроскопическому исследованию
Изобретение относится к медицине, предназначено для диагностики патологии крови (напр, при иммунной несовместимости крови матери и плода). Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения стадий и дополнительное повышение точности исследования нарушений структуры эритроцитов . Для этого пробу крови 1 Ш1 из пупочной вены в сухой пробирке без добавления антикоагулянта оставляют при 2-4°С 30-40 мин до образования сгустка, кусочки которого фиксируют, обезвоживают и сушат в аппарате Kpjs- тической точки. Затем напыляют в вакууме и просматривают в сканирующем микроскопе. Способ позволяет нсклю-.ит чить взятие биопсийного материала для подготовки образца, а использование сгустка предотвращает механическое поврезкдение эритроцитов, так как в течение всей обработ1 и эритроцита заключены в сетку, образованную нитями фибрина. § (Л
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИ К
РЕСПУБЛИК
80 А1 (19) (11): (51) 4 С 01 М 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3874855/28-14 (22) 26.03. 85 (46) 30. 05. 88. Бюл. К 20 (71) Институт цитологии AH СССР и Объединенный специализированный ро- дильный дом У 1 (72) В.Ф. Машанский, В.И. Штильбанс и В.К. Лебский (53) 612. 015 (088. 8) (56):Крымский Л.Д., Нестайко Г.В. 9
Рыбалов А. Г. Растровая электронная микроскопия сосудов и крови. N.: Медицина, 1976, с. 168. (54)СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЭРИТРОЦИТОВ К
ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ (57) Изобретение относится к медицине, предназначено для диагностики патологии крови (напр. при иммунной несовместимости крови матери и плода).
Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения стадий и дополнительное повышение точности исследования нарушений структуры эритроцитов. Для этого пробу крови 1 мл из пупочной вены в сухой пробирке без добавления антикоагулянта оставляют при 2-4 С 30-40 мин до образования сгустка, кусочки которого фиксируют, обезвоживают и сушат в аппарате крн тической точки. Затем напыляют в ва» кууме и просматривают в сканируницем микроскопе..Способ позвол)1ет исклю-. ..n чить взятие биопсийного материала для подготовки образца, а использование сгустка предотвращает механическое о повреждение эритроцитов, так как в е течение всей обработки эритроциты заключены в сетку, образованную нитями фибрина.
1399680
Формула изобретения
Способ подготовки эритроцитов к электронно-микроскопическому исследованию, включающий фиксацию образца, сушку и напыление в вакууме парами металла, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет исключения стадий и дополнительного повышения точности исследования нарушений структуры эритроцитов, в качестве образца используют сгусток крови.
А. Агуреев авчук Корректор А. Обручар
Редактор N. Бандура
Заказ 2б62/4б
Тираж 847 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике патологии крови, например вызванной иммунной несовместимостью крови матери и плода. ,Целью изобретения является упрощение способа за счет сокращения стадий: и дополнительное повышение точности исследования нарушений структуры эритроцитов.
Цель достигается тем, что взятую в сухую пробирку кровь в количестве не более 1 мл без добавления антикоао гулянтов оставляют при +2 — 4 С в те- 15 чение 30-40 мин до образования сгуст- ка, кусочки которого затем фиксируют, обезвоживают, подвергают сушке в аппарате критической точки, напыляют в вакууме и просматривают в сканирующем 20 микроскопе.
Способ осуществляют следующим образом.
Взятую из пупочной вены в обычную сухую пробирку кровь в количестве 1 мл без добавления антикоагулянтов оставля: ют при 2 С до образования сгустка (примерно 30-40 мин) . Сгусток извлекают из пробирки, острым лезвием иссекают кусочки размером 1-2 мм, кото- 30 рые переносят в фиксирующий состав—
4Х-ный глютаровой альдегид. Фиксация о продолжается 3-4 ч при +4 С. Затем
1 производят обезвоживание в спиртах возрастающей крепости и изоаминоцитате, далее сушку в аппарате критичес-. кой точки (Hitachi Critical Point
Dryer. HCP-2 ). После этого материал монтируют на предметном столике и напыляют в вакууме парами металлов в катодном испарителе (фирмы Ied). Изучение препаратов производят в скани рующем электронном микроскопе ISN =.
= 200.
Эффективность оценки степени очистки крови новорожденных при иммунной патологии предлагаемым способом была подтверждена в процессе изучения эритроцитов при гемолитической болезни новорожденных по резус-фактору и пос50
Составитель
Техред А.Кр ле ее лечения гемосорбцией в Специализированном род. доме У- 1 r. Ленинграда. Наблюдалось 17 новорожденных.
Кровь больных исследовали до и после гемосорбции с углем АДБ-1 при перфузии,, равной 2 и 4 объемам циркулирующей крови (ОЦК), а в качестве контроля — 8 здоровых новорожденных. Все новорожденные доношенные, с оценкой по Апгар при рождении не ниже 7 баллов. У здоровых новорожденных эритроциты имеют размер 7-8 мкм, двояковогнутую или уплощенную форму и ров ную поверхность клеточной оболочки.
У больных детей размеры эритроцитов увеличены до 15 мкм, форма шаровидная или неправильная. Поверхность округлых эритроцитов отличается наличием мелких полусферических выступов, размер которых составляет около 0,03 мкм.
После гемосорбции некоторая часть эритроцитов деформируется (количество их увеличивается в случаях перфузии 4 ОЦК). Однако на поверхности эритроцитов существенно уменьшается количество мелких полусферических выступов размером до 0,03 мкм.
Упрощение способа достигается за счет исключения стадии взятия биопсийного материала для подготовки образца. Использование сгустка предот-, вращает механическое повреждение эритроцитов, так как в течение всей обработки эритроциты заключены в сетку, образованную нитями фибрина.
