Способ определения активности жирорастворимых антиокислителей

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается способов определения . Целью изобретения является повьшение точности определения и уменьшение трудоемкости способа. Это достигается тем, что жирорастворимые антиокислители растворяют в субстрате, содержащем производные высших жирных кислот, окисляют : субстрат с исследуемым веществом и без него барботированием воздухом с отводом последнего, измеряют содержание продуктов окисления, строят кинетическую кривую, находят по ней период индукции и устанавливают по значению последнего активности антиоксиданта, причем измерение содержания продуктов окисления проводят в отводимом воздухе, а в качестве продуктов окисления исследуют углеводородный газ, причем, если образуется несколько газов,определяют тот, содержание которого вьше. 1 з.п, ф-лы, 1 табл. о (О W с:

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК уд4 G01 М 7/18

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTGPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

I (21) 4047321/31-13 (22) 31.03.86 (46) 07.08.88, Бюл. N 29 (71) Институт физиологии растений

АН УССР (72) Е.Ю.Мордерер и И.Ш.Кофман(53) 664.3 (088.8) (56) Биофизика, 1967, Р 12, с. 735737. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ЖИРОРАСТВОРИМЫХ АНТИОКИСЛИТЕЛЕИ (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается способов определения. Целью изобретения является повышение точности определения и уменьшение трудоемкости способа.

Это достигается тем, что жирораствоÄÄSUÄÄ 1415153 А1 римые антиокислители растворяют в субстрате, содержащем производные высших жирных кислот, окисляют субстрат с исследуемым веществом и без него барботированием воздухом с отводом последнего, измеряют содержание продуктов окисления, строят кинетическую кривую, находят по ней период индукции и устанавлйвают по значению последнего активности антиоксиданта, причем измерение содержания продуктов окисления проводят в отводимом воздухе, а в качестве продуктов окисления исследуют углеводородный газ, причем, .если образуется несколько газов, определяют тот, содержание которого вышее. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1415 I 53

Изобретение относится к бнотехно логии н касается способов определения.

Цель изобретения — повышение точ5 ,ности определения и уменьшение трудоемкости способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Раствор исследуемого вещества в субстрате и чистый субстрат, служащий контролем, помещают в герметичные камеры, сделанные из тефлона или другого инертного материала. Камеры подключают к обогатительному устрой ствуу. Обогатительное устройство вклю чаетт в себя коммутирующие вентили и, обогатительные колонки. Коммутирующие. вентили имеют два положнения: "Сорбция" и "Десорбция" ° Воздух от компрессора поступает в камеры, бар, ботирует образцы и поступает на соответствующее коммутирующее устрой ство. В положении коммутирующего . устройства "Сорбция" воздух попада-, 25 ет в обогатительную колонку, а в положении "Десорбция" через соответ-! ствующий ротаметр выходит в атмосферу. В положении "Десорбция" соответствующего коммутирующего устройст- 30

; ва через обогатительную колонку будет проходить азот, являющийся газомносителем газового хроматографа.

Для определения содержания углеводородных газов в воздухе, прошедшем через камеру, соответствующее коммутирующее устройство переводят в положение "Сорбция", одновременно соответствующую обогатительную колонку погружают в сосуд с жидким азотом. g0

При этом углеводородные газы, содержащиеся в воздухе, барботирующем окисляемые образцы, будут сорбироваться в соответствующей обогатительной колонке. Сорбция углеводород- 5 ных газов в обогатительных колонках, погруженных в жидкий азот, происходит вследствие того, что температура кипения углеводородных газов значи-, тельно выше температуры кипения азо50 та, следовательно, углеводородные газы должны конденсироваться в обогатительной колонке. Продолжительность периода сорбции углеводородных газов выбирают произвольно в пределах 5-30 мин. Нижний предел

55 длительности периода сорбции обусловлен временем, необходимым для установления равномерного тока воздуха в обогатительной колонке после ее погружения в жидкий азот. По окончании периода сорбции соответствующую обогатительную колонку вынимают из сосуда с жидким азотом и переносят в специальную печку, придаваемую к обогатительному устройству. Одновременно, соответствующий коммутирующий вентиль переводят в положение "Десорбция". При нагреве обогатительных колонок углеводородные газы десорбируются и с током азота увлекаются в газовый хроматограф. Полученная при этом хроматограмма фиксируется на самописце, на ленте самописца отмечают время проведения сорбции и десорбции. По высоте пиков углеводородных газон можно судить о их содержании в воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, в течение периода сорбции. Для упрощения построения кинетической кривой окисления длительность периода сорбции выбирают одну и ту же для всех образцов и используют в течение всего анализа. Для построения кинетической кривой окисления данного образца по оси ординат откладывают высоту пика углеводородного газа, а по оси абсцисс — время, соответствующее се=. редине периода сорбции, для которой была получена соответствующая хроматограмма. Определение периода ин1 дукции окисления и расчет значения активности антиокислителя проводят аналогично известному.

Пример. Для проверки адекватности предлагаемого способа определения АОА жирорастворимого вещества проводят параллельное измерение

АОА синтетического антиоксиданта ноно. ла по предлагаемого способу и по известному. В качестве субстрата используют линетол, температура субстрата

80 С. Скорость тока воздуха, барботирующегоокисляемые образцы, 100 мл/мин.

Определение AOA проводят для трех концентраций раствора ионола в линетоле: 5 10 И, 10 М и 2 ° 10 N. В образцах, где определение АОА прово-. дят по известному способу, начальный объем раствора составляет 5 мл, пробы для определения содержания гидроперекисей в субстрате отбирают два раза в час по 0,2 мл. В образцах, анализируемых по предлагаемому способу, объем раствора составляет l мл, продсагаительность периода сорб1415153 ции 5 мин, частота проведения измерений один раз в 10 мин. Строят кинетические кривые окисления, полученные обоими способами. Кинетические кривые окисления, полученные для растворов ионола различной концентрации по предлагаемому способу практически совпадают с кривыми, полученньпп по известному. Совпадение кинетических кривых окисления свидетельствует об адекватности предлагаемого способа определения АОА.

Значения периодов индукции для растворов ионола в различной концентрации и расчетные значение АОА ионола приведены в таблице.

Как видно из таблицы значения

АОА ионола, полученные обоими способами, практически совпадают. При этом средняя квадратичная ошибка определена АОА по предлагаемому способу меньше, а следовательно, точность определения больше. Большая точность 25 достигается тем, что по предлагаемому способу при построении кинетической кривой окисления используется большее число точек. В данном приме-. ре частота определения продуктов 30 окисления при измерении АОА по предлагаемому способу в три раза выше, чем по известному способу. За счет увеличения частоты определения продуктов окисления уменьшается систе35 матическая ошибка определения периода индукции, а следовательно, и ошибка определения АОА. Помимо этого, при определении продуктов окисления по содержанию углеводородных газов в воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, происходит автоматическое усреднение результата определения. Это усреднение достигается за счет того, что измеренное содержание углеводородных газов соответствует целому периоду сорбции.

Кроме того, при определении АОА жирорастворимого вещества по предлагаемому способу уменьшен, по сравнению с известным, объем образца, Сле,довательно, при равной концентрации исследуемого вещества в субстрате предлагаемый способ позволяет уменьшить количество необходимого для определения, вещества. Это особенно важно при определении АОА липидов, так как позволяет уменьшить объем биологического материала, из которого экстрагируются липиды. Очевидно, что уменьшение объема при определении АОА по предлагаемому способу достигается за счет того, что при определении содержания продуктов окисления по содержанию углеводородных газов в воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, отпадает необходимость отбора проб из образца.

Постоянный объем образца при определении AOA по предлагаемому способу уменьшает вероятность ошибки, возникающей при определении АОА по известному, за счет изменения парциального давления кислорода в уменьшенном, по сравнении с начальным, объеме образца.

Кроме того, предлагаемый способ определения ЛОА менее трудоемок, так как несмотря на необходимость большого числа измерений, сами процедуры по измерению содержания углеводородных газов в воздухе, прошедшем через окисляемые образцы, очень просты и сводятся к переключению коммутирующих вентилей. При описленни субстрата может выделяться или одни. или несколько углеводородных газов.

В предлагаемом способе определение содержания углеводородов проводят с помощью газовoão хроматографа, поэтому по хроматограмме можно сразу определить, каке газы выделяются при окислении используемого субстрата, В приведенном примере в качестве субстрата использовали линетол (смесь этиловых эфиров жирных кислот). При окислении линетола выделялись этан и этилен, причем содержание этана значительно превышало содержание этилена, поэтому о содержании продуктов окисления в субстрате судили по содержанию этана..При использовании другого субстрата могут выделяться другие газы, причем при выделении нескольких газов определяют тот„ содержание которого вьие.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения в 45 раз и исключить операции многократного отбора алнквот, титрования гидроперекисей.

Формула изобретения

1. Способ определения активности жирорастворимьл антиокислителей, включающий растворение их в субст1415153

Способ определения А0А из в ест ный

Концентрация ионола еМ г/мл

P 10 предлагаемый

AOA ° 10

А0А 10

40-0,6

37-1, 8

0 0,00

5 10 0 11

84-0,8 400,0-5, 1

81-1,6 400,0-18,2

128-1,4 413,6-12,4

129-0, 6 404, 5-4, 4

0,22

218-0,6 404,5-2, 1

2 .10 0,44

216-1,4 406,8-8,2

Составитель Е.Буданцева eõÐeÀ И.Верее Корректор А.Обручар,Редактор Л.Зайцева

Заказ 3869/41 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 рате, содержащем производные высших жирных кислот, окисление субстрата с исследуемым веществом и без него барботированием воздухом с отводом последнего, измерение содержания продуктов окисления, построение кинетической кривой окисления, нахождение по ней периода индукции окисления и установление по значению последнего активности антиокснданта, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения и уменьшения трудоемкости способа„" измерение содержания продуктов окисления проводят в отводимом воздухе, а в качестве продуктов окисления исследуют углеводородный газ.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что при образовании в процессе окисления нескольких углеводородных газов определяют тот, содержание которого вышее.