Способ определения антиокислительной активности биологического материала

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„ЯО„„1422152

А1 ц!! 4 G 01 N 33/49

I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3897291/28-!4 (22) !4;05.85 (46) 07.09.88. Бюл. У 33 (71) Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт (72) Е.Г. Доброхотова, В.Г. Крунчак, П.П. Денисенко, А.Т. Бурбелло, М.С. Бурбелло и А.Е. Барсуков

{53) 612.015(088.8) (56) Куликов В.Ю., Молчанова Л.В.—

Лабораторное дело, 1980, У 7, с. 4!9. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЪНОИ АКТИВНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОГО

МАТЕРИАЛА (57) Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения антиокнслительной активности (АОА) биологического материала, предназначено для практической медицины, биологии, фармакологии. Цель изобретения — упрощение способа путем сокращения числа трудоемких операций. Для этого в электродную ячейку с электродами дозатором подают окислительно-восстановительную систему (0BC)-р-р ферроферрицианида калия, включают термостат, магнитную мешалку, измерительный и регистрирующий приборы для измерения и регистрации потенциала ОВС(Ео), Дозатором вводят исследуемую пробу и через фиксированное секундомером время измеряют и регистрируют значение потенциала ОВС (Е ). Вычиспяют значение потенциала ОВС Л fg = Eo — Ey и по градуировочной зависимости

f{A0A) находят соответствующее значение АОА. Построение градуировочной зависимости Л!! = f(AOA) проводят одновременным измерением

Л fg и АОА наиболее точным спосо-! бом. Происходит также корреляция изменения АОА биоматериала — крови, ее фракций, мочи, тканей, органов с изменением восстановительной емкости пробы. Время исследования сокращается с 3-7 ч до 5-10 мин.

1422152

Изобретение относится к биохимическим способам определения антиокислительной активности (AOA) биологического материала и может быть

S использовано в практической медици- . не, биологии, фармакологии.

Цель изобретения — упрощение спо соба за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляется следующим образом.

В электродную ячейку с электродамИ дозатдром подают окислительно— восстановительную систему (ОВС) раствор ферроферрицианида калия, включают термостат и магнитную мешалку, измерительный и регистрирующий приборы, которыми измеряют и регистрируют потенциал ОВС (Ео). Дозатором вводят исследуемую пробу, включают секундомер и через фиксированное время измеряют и регистрируют значение потенциала ОВС (Eg).

Вычисляют значение потенциала ОВС

8f 1 = K0 — К и по градуировочной зависимости дГ = f (AOA) находят соответствующее значение АОА, Построение градуировочной зависимости Д:Г = f {AOA) проводят одно- 30 временным измерением Д и АОА наи1 более точньм способом.

Новым свойством изобретения является корреляция изменения антиокислительной активности биологического материала †. крови, ее фракций, мочи, тканей, органов с изменением восстановительной емкости Пробы.

Пример 1. Взята кровь у тяжелого больного, отцентрифугирована 40 при 3000 об/мин в течение 20 мин, отобрана сыворотка. В качестве ОВС использовали раствор ферроферрици.анида калия при концентрации

K (Fe(CH)<1/K<(Fe(CH)<1 0,05/0,005 н. в 1 н.Na0H. В измерительную ячейку вводили 20 мл ОВС, измеряли потенциал системы (Б0 = 407 мВ) вводили

0,2 мл сыворотки и через 5 мин снима-. .ли значение Е, которое оказалось равным 377 мВ. df = 30 мВ. Также

Ф измеряли значение АОА по известному способу (АОА = 1200) в системе с линетолом и по количеству малонового диальдегида (ЬЩА) 0,24 мкмоль/мл.

Пример 2. Взято 3 мл крови

55 у того же больного в центрифужную пробирку с 0,3 мл 3,87-ного цитрата натрия, отцентрифугировали при

3000 об/мин, отделена плазма от эритроцитарной массы (измеряли последа нюю) . Остальное проведено по примеру 1, Е = 407 мВ, E> = 318мВ, Df> = 90 мВ, МДА = 0,95 мкмоль/мл эритроцитов.

П р .и м е р 3. Взята на исследование кровь 18-летнего практически здорового студента. Измерение проведено по примеру 1. Получены следующие результаты. сыворотка (E = — 407, E = ЗбЗ), df = 44 мВ, АОА =

1800, МДА = О,б8 мкмоль/мл сыворотки.

Пример 4. На исследование взята кровь 18- летнего практически здорового студента. Выделена лейкоцитарная фракция. В качестве ОВС использовали раствор ферроферрициани да калия К tFe(СН) ) /К tFe(CHg

1 10 /5 10 < г ° моль/л в 1 н.НаОН.

В ячейку вводили 20 мл ОВС, измеряли Е„, вводили 0,2 мл лейкоцитарной фракции и через 5 мин снимали значение F,g Qfg = 48 мВ. Измеряли также в этой же лейкоцитарной фракции ИДА, равное 0,78 мкмоль/мл лейкоцитов.

Пример . 5. Взято 5 мл крови у практически здорового 18-летнего студента в центрифужную пробирку с

0,5 мл 3,87-ного цитрата натрия.

Проведено первое центрифугирование при 1000 об/мин в течение 7 мин, выделена обогащенная тромбоцитами плазма. Затем проведено второе центрифугирование при 4000 об/мин в течение

20 мин. Плазму отделили и в пробирку с тромбоцитами ввели 1 мл 3,87.-ного цитрата натрия. Число тромбоцитов в этом растворе равно 7,5 тыс, В качестве ОВС использдвали раствор

K>(Fe(CH)gj 1K<(Fe(CH) ) 0,0025/

/0,00025 н. в 1 нЛаОН. В ячейку вводили 20 мл ОВС, измеряли Е>, вводили 0,4 мл тромбоцитарного раствора и через 5 мин снимали значение Е .

hfdf = 38 мВ. Измеряли также МДА (0,88 мкмоль/мл = 0,17 мкмоль/1 тыс. тромбоцитов).

Пример б. После декапитации у белой крысы выделили печень, взяли навеску ткани 100 мг, измельчили в гомогенизаторе. В качестве ОВС использовали раствор К (Fe (CH)6 ) /

/K„(Fe(СН) 1 0,05/0,0005 н. в 1 н. ИаОН.

Измеряли Е0, вводили 20 мл ОВС и этим раствором количественно переносили из

Изобретение позволяет сократить время исследования с 3-7 ч до 5 10 мин.

Составитель Н. Гуляева

Техред A.Êðàâ÷óê Корректор И. Муска

Редактор И, Шулла

Тираж 847 Подписное

ВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Н-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4425/45

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 з ) 4221 стакана и пестика гомогенизатора измельченную йавеску в измерительную, ячейку. Вводили в ячейку электроды и через 5 мин после соприкоснсвения ткани с ОВС измеряли Е df = 62 мВ.

Измеряли также МДА этой же печени (19,1 мкмоль/1 г влажной навески ткани), Пример 7. После декапитации у белой крысы выделено сердце, взята навеска 100 мл, измельчена в гомогенизаторе. Дальнейшее измерение проводили по примеру 6. Llf = 56 мВ, МДА = 13 мкмоль/1 r влажной ткани.

Пример 8. Исследование проведено по примерам 6 и 7. Взято

100 мг икроножной мьппцы. Hfdf — — 52 мВ, МДА = 9,0 мкмоль/ 1 г ткани. 20

Формула изобретения

Способ определения антиокислительной активности биологического материала путем исследования кинетики окисления пробы, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упроще" ния способа за счет сокращения трудоемких операций, к исследуемой пробе добавляют щелочной раствор ферроферрицианида калия, измеряют восстановительную емкость полученной смеси при скачке потенциала в пределах 30-90 МВ, а активность определяют по кривой описывающей зависимость активности от величины восстановительной емкости,