Способ флуоресцентного определения жизнеспособности грибов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

)я)) а С 01 N 2!/64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (2)) 3988384/22-25 (22) 09.12.85 .(46) 23.0) 89.sþë. В 3 ,(71) Ленинградский институт авиационного приборостроения (72) А.Г.Варехов, Н.Ф.Екимова, С.Е.Ковалева и И.А.Курышев (53) 543.42:535.376 (088.8) (56) Манойлов В.Е. и др. Приборы контроля окружающей среды.- М.:

Атомиздат, 1980, с.144 †1.

Авторское свидетельство СССР

В 490821, кл, С 12 () 1/02, G 01 N 21/64, !965.,.SU„„3453269 A 1

l(54)(57) СПОСОБ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ГРИБОВ путем окрашивания суспенэии мицелня грибов флуоресцирующим красителем, регистрации флуоресценции на двух длинах волн и определения искомой величины по соотношению интенсивнос»:: ,ти люминесценции на этих длинах волн, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности определения, окрашивание производят

9-аминоакридином, а флуоресценцию регистрируют в спектральном диа,пазоне с длинами волн 430 и 687,5 им.

t 14532

Ф

Изобретение относится к микробиологическому анализу веществ и может быть использовано при исследованиях биокоррозии неметаллических материалов,- условий роста и развития мик". роорганизмов на этих материалах, атакже при санитарно-гигиенических обследованиях различных помещений, Цель изббретения — повышение се- fp лективности определения жизнеспособности грибов.

Сущность способа заключается в следующем.

Известно окрашивание клеточных f5 суспензий, 9-аминоакридином с целью определения и исследования некоторых клеточных физиологических характеристик, прежде всего, трансмембранного градиента рН. Водорастворимый кра- 20 ситель 9-аминоакридин хорошо Флуоресцирует в водном растворе, но его флуоресценция тушится при связывании. Максимум его флуоресценции лежит в области 500 нм. Однако длинно- 25 волновая флуоресценция S-аминоакриди. на на границе инфракрасной области (700 нм) нигде не описана. Такая длинноволновая флуоресценция была обнаружена авторами в экспериментах 30 с мицелием грибов. Предположительно она связана с образованием эксимерных комплексов красителя на поверхности мицелия,и, такйм образом,i должна зависеть от топологии этой по верхности. Поскольку сама эта топология всегда является важным систематическим признаком, то длинноволновая флуоресценция может быть использована для идентификации родовой, 40 видовой или штаммовой принадлежности грибов. Кроме того, использование флуоресценции около 700 нм существенно повышает селективность определе.ний, поскольку измерение флуоресцен- 45 ции ведется в области, находящейся.. достаточно далеко от флуоресценции водорастворимой формы 9-аминоакриди- на, от флуоресценции большинства при

69 месей и от диапазона видимого света.

Для оценки целесообразно использовать отношение интенсивностей длин". новолновой и флуоресценции в основном максимуме, так как увеличение связывания и, следовательно, интенсивности длинноволновой флуоресценции одновременно, уменьшает флуоресценцию s основном максимуме. Это расширяет динамический диапазон оценок. Основной максимум содержит несколько гауссовских составляющих

430, 461, 530,нм. Численный расчет показывает, что разрешение, т.е. раэ. деление отдельных штаммов, получается наилучшим при использовании максимума = 430 нм.

Дпя оценки спектра флуоресценции 9-аминоакридина в водном растворе используются максимум при 4

= 430 нм и полуширина нормированного спектра 9,1< .

Для оценки спектра флуоресценции

9-аминоакридина в суспейзии мицелия

Aspergillus niger, штамм В используется отношение интенсивностей . длинноволновой флуоресценции h

687,5 нм и основного максимума

430 нм.

Реализация предлагаемого способа выполняется следующим образом.

В оптически однородную гомогенизированную суспензию мицелия грибов в физиологическом растворе, тестированную по оптической плотности, до бавляют 9-аминоакридин до получения конечной концентрации 1-3 мкМ, после чего посредством Флуориметра определяют интенсивности флуоресценции при Ъ = 687,5 нм и "A = 430 нм. Оба значения Ъ должны быть выставлены с абсолютной погрешностью i 2,5 нм.

Далее составляется отношение обеих интенсивностей, которое используется для оценки жизнеспособности и воsможной идентификации грибов.

Составитель А,Разяпов

Редактор Л.Зайцева ТехредМ,Ходанич, Корректор М.Максимишинец

Ь °

Производственно-полиграфическое:предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 7276/39 . Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного коьятета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

tf3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5