Способ дифференциальной диагностики стволового и полушарного ишемического инсульта при нарушении мозгового кровообращения

 

Изобретение относится к медицине , точнее к неврологии, предназначено для локализации очага поражения (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте. Цель изобретения - повьшение точности способа и сокращение времени исследования. Для этого из периферической крови пациента выделяют лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фикола-верографина (1,077 г/мл) в режиме центрифугирования 400 g, 45 мин при 20°С. После 2-кратного отмьшания забуференным физраствором готовят исходную концентрацию лимфоцитов 10-10 в 1 мл полной питательной среды, содержащей 12% эмбриональной телячьей сыворотки , глутамин (200 мм), гентамицин (40 мкг/мл). В качестве мишеней используют меченные Н -уризином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in vitro в указанной среде. Определяют цитотоксическую активность естественных киллеров радиометрически при отношении эффекторов и мишеней 100:1; 50:1; 25:1. Рассчитывают цитотоксический индекс и по его величине делают вывод о стволовом или полушарном ишемическом инсульте . 2 табл. (Л 4 сл СП со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.SU„„145531 др 4 G 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4077928/28-14 (22) 11.06.86 (46) 30.01.89. Бюл. У 4 (71) 2-й Московский медицинский институт им.Н.И.Пирогова (72) С.Б.Чекнев, В.В.Яковлев и Л.В.Ковальчук (53) 616.07 (088.8) (56) Невропатология и психиатрия, 1980, т. 80, вып. 9, с. 1281-1285. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ СТВОЛОВОГО И ПОЛУШАРНОГО ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА ПРИ НАРУШЕНИИ МОЗГОВОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к неврологии, предназначено для локализации очага поражения (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте. Цель изобретения— повьппение точности способа и сокращение времени исследования. Для этого из периферической крови пациента выИзобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано для локализации очага поражения (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте.

Цель изобретения — повьппение точности способа и сокращение времени исследования.

Способ осуществляется следующим образом.

Из периферической крови больного, взятой в количестве 10 мл, выделяют деляют лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фикола-верографина (1,077 г/мл) в режиме центрифугирования 400 g, 45 мин при 20 С.

После 2-кратного отмывания забуференным физраствором готовят исходную

6 концентрацию лимфоцитов 10 ° 10 в

1 мл полной питательной среды, содержащей 12% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамин (200 мм), гентамицин (40 мкг/мл). В качестве мтппеней используют меченные Н -уризином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in ч го в указанной среде. Определяют цитотоксическую активность естественных киллеров радиометрически при отношении эффекторов и мишеней 100:1; 50:1; 25:1. Рассчитывают цитотоксический индекс и по его величине делают вывод о стволовом или полушарном ишемическом инсульте. 2 табл. лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина (1,077 г/мл) в режиме центрифугирования 400 g, 45 мин, 20 С. После двукратного отмывания забуференным физиологическим раствором готовят исходную концентрацию лимфоцитов, составляющую 10 10 в 1 мл полной питательной среды на основе RPMI-1640, содержащей 12% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамин (200 мМ), гентамицин (40 мкг/мл) . В качестве мишеней з 145 ,используют меченные Н -уридином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in vitro в указанной среде. После отмывания от изотопа готовят исходную концентрацию мишеней 10 10" в 1 мл. К мишеням добавляют фермент — панкреатическую PHK-азу в дозе 5 мкг/мл, после чего лимфоци ты и мишени закапывают в ячейки 96луночных круглодоннъ х микропластин по 0,1 мл. Для более точной оценки активности естественных киллеров, (ЕКА) путем двукратных разведений

; суспензии лимфоцитов создают различ, ные соотношения эффекторов и мишеней в системе (Э:М), каждое соотношение

1 ! число импульсов в опытной лунке) 100 число импульсов в контроле

40 1803

ЦИ = (1 - — — — ) 100X = 62X

4764 при соотношении Э:М = 50:1 ЦИ = 57X, при соотношении Э:M = 25: 1 ЦИ = 38X.

Такие значения свидетельствовали о локализации очага поражения в вертебро-баэиллярной системе, т.е. о наличии стволового инсульта. Время исследования составило 24 ч. Дальней5О шая динамика и эффективность проведенной терапии подтвердили правильность диагноза.

Пример 2. Больная Ж., 56 лет, поступила с неврологическим диагно55 зом: артериальная гипертония, острое нарушение мозгового кровообращения в глубоких ветвях левой задней мозговой артерии. За 2 мес до поступления отметила ухудшение памяти на текущие

Контролем в лимфоцитотоксическом, тесте служат клетки †мише, инкубируемые в тех же условиях, но беэ эф фекторов. Время исследования 24 ч с момента забора крови у больного.

Существенное отличие отмечается при соотношениях 3:M от 100:1 до

25: t. Выявленные пределы определяют, ся тем, -что в более разреженной системе (соотношение 3:М меньше 25:1) регистрируется цйтотоксическая функ,ция отдельных клеток, а не популяция мононуклеаров в целом, увеличивается . разброс показателей ЦИ; при увеличении количества клеток в системе (соотношение Э:М больше 100:1) истощение среды большим числом клеточных элементов затрудняет учет результатов.

В оптимальном диапазоне соотношений Э:М при полушарном инсульте отмечается снижение показателей ЦИ, при стволовом они соответствуют норме.

П р и м- е р 1. Больная Ч., 62 лет, поступила с диагнозом: атеросклероз, артериальная гипертония, шейный остеохондроз, хроническая церебральная сосудистая недостаточность в стадии субкомпенсации. В анамнезе: в течение последних 2 лет приступы системного головокружения с тошнотой, рвотой, головные боли непостоянной ло- кализации, снижение слуха слева. Для выбора правильной тактики лечения требовалось локализовать очаг поражения н вертебро-базиллярной системе

5317

4 тестируют в 3 параллельных лунках микропластин.

Лимфоциты и мишени инкубируют в

5 о течение 14 ч при 37 С во влажной атмосфере, содержащей 5К СО, после чего содержимое лунок осаждают на стекловолоконные фильтры с диаметром пор

2,5 мкм 12-канальным собирателем биологических фракций. Фильтры высушивают, уровень остаточной радиоактивности определяется с помощью сцинтилляционного счетчика, счет каждой пробы осуществляется в течение 2 мин.

В качестве меры ЕКА применяется цитотоксический индекс (ЦИ), вычисляемый по формуле: (стволовой инсульт). Взята кровь для

25 исследования.

Расчет ЦИ проводился следующим образом.

Средние значения остаточной радиоактивности на фильтрах после совместЗО ной инкубации лимфоцитов с мишенями составили, имп/мин:

Э:M = 100: 1 1803

3:И = 50:1 2041

Э:М = 25: 1 2949

Средняя радиоактивность для 6 конЗ5 трольных лунок равнялась 4764 имп/мин.

Подставляя полученные значения в формулу для расчета ЦИ, при соотношении

Э:И = 100: 1 получили

Таблица 1

Показатели ЕКА в группе здоровых доноров

50:1

6:1

100: 1

12:1

Соотношения Э:М

25:1

Цитотоксический индекс, 57,9+2,0 57,1+2,1 49+2,7 38,7+2,7 30,1+2,6

5 14 и прошлые события. Для контроля правильности проводимой терапии необходимо было установить отсутствие повреждения в вертебро-базиллярной системе. Взята кровь для исследования.

Показатели ЦИ при соотношениях Э:M =

100:1; 50:1 и 25:1 составили соответственно 25, 24 и 21 . На основании этих данных диагностирован полушарный инсульт без повреждения стволовых структур. Время исследования

24 ч. Результаты исследования подтверждены эффективностью проведенной терапии и дальнейшей динамикой про-. цесса.

Пример 3. Больная С., 48 лет, поступила с неврологическим диагнозом: артериальная гипертония, повторное нарушение мозгового кровообращения в корковых ветвях левой задней мозговой артерии. В анамнезе: год назад острое нарушение мозгового кровообращения с парезом в правой руке.

Новое ухудшение состояния наступило остро, в течение 3 дней, сопровождалось речевыми нарушениями. Взята. кровь для исследования. Показатели

ЦИ при соотношениях Э:М 12:1 и 6:1 составили соответственно 35 и 32, что свидетельствовало о наличии стволового инсульта. Однако эффективность .проведенной терапии и динамика процесса подтвердили правильность диаг. ноза при поступлении.

Таким образом определение ЦИ при соотношениях Э:M меньше 25: 1 неинформативно при данной диагностике.

Подобным образом обследована группа больных (26 человек) с ишемическими инсультами: 16 человек со стволовым инсультом, t0 — с полушарным.

55317 6

Данные исследования подтверждались клиническими наблюдениями, динамикой процесса и эффективностью терапии. В качестве контрольной обследована груп5 па здоровых (без иммунологических нарушений) доноров в количестве 35 человек.

Данные приведены в табл. 1 и 2.

Таким образом, способ позволяет локализовать очаг поражения (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте в течение 24 ч с момента забора крови. Способ отличается высокой точностью, воспроизводимостью результатов (n = 26, р а 0,01), быстротой постановки теста, объективностью оценки. Эффективен при использовании боль-, 0 ших соотношений эффекторов и мишеней в системе (100: 1 — 25: 1), Формула изобретения

25 Способ дифференциальной диагностики стволового и полушарного ишемического инсульта при нарушении мозгового кровообращения путем клинического и параклинического исследования больного, отличающийся тем,что, с целью повышения точности способа и сокращения времени исследования, дополнительно определяют цитотоксическую активность естественных киллеров радиометрическим методом при отношении эффекторов и мишеней 100: 1, 50:1,25:1,рассчитывают по полученным показателям цитотоксический индекс и при значении 44% и более диагностируют стволовык ишемический инсульт, а при значении 43 и менее — полушарный.

1455317

Таблица 2

Показатели ЯКА у больных с ишемическим инсультом

6:1

100:1 50:1 25:1 . 12:1

Соотношения Э:М

Полушарный инсулвт

Составитель Л.Шилина

Редактор Л.Пчолинская Техред М.Дидык Корректор С.Шекмар

Заказ 7452/53 Тирам 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Умгород, ул. Проектная, 4

Цитотоксический индекс, Х

Стволовой инсульт

54,5+4,4 51,7+4, 1 48,8+4, 4 41,8+3,9 32, 1+3,9

40,1+5,1 37,4+3,3 25,6+3,9 30,8g5,8 24,8+4,5