Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам fusаriuм sамвuсinuм fuск

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции картофеля на устойчивость к болезням. Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудозатрат. Для оценки устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 M NACL. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутствии. По способности солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибировать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили. Показатель активности в среднем 40 мкг/г воздушно-сухого вещества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг/г - о восприимчивости к указанному заболеванию. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4302169/31-13 (22) 31.08.87 (46) 07.01.89. Бюл. № 13 (71) Институт экспериментальной ботаники им. В. Ф. Купревича (72) Н. А. Дорожкин, В. И. Домаш, С. И. Бельская и Л. М. Новикова (53) 631.52 (088.8) (56) Дорожкин Н. А., Михальчук В. Т. Методы оценки устойчивости к фузариозной гнили.— Селекция и семеноводство, 1979, 3, с. 19 — 20. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ

КАРТОФЕЛЯ К МИКРОМИЦЕТАМ FUSARIUM SAMBUCINUM FUCK (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции картофеля на устойчивость к болезням. Цель изобретения — ускорение оцен1

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в селекции картофеля на устойчивость к болезням.

Цель изобретения — ускорение оценки и снижение трудозатрат.

IСпособ осуществляется следующим образом.

Навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 М NaC1. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки.

Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутствии. По способноти солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибировать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили.

Пример. Клубень картофеля пробуравливают сверлом по вертикальной и горизон„„SU„„1470271 А1 дВ 4 А Ol Н 1/04 ки и снижение трудозатрат. Для оценки устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили навеску муки из клубня картофеля экстрагируют 0,2 М NaCI. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определяют протеолитическую активность фермента, выделенного нз фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофеля, без добавления экстракта белков и в их присутсгвии. По способности солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофеля ингибировать активность ферментного препарата судят об устойчивости картофеля к сухой фузариозной гнили. Показатель активности в среднем 40 мкг/г воздушноcyvoro вещества свидетельствуе — об устойчивости, 20 мкг/г -- о восприимчивости к указанному заоолеванию. 1 табл.

2 тальной осям. Выссчку вь1суц . вают на воздухе, смалывают и среднюю навеску муки в 50 мг экстрагируют 20 мл 0,2 М NaC1.

Экстракт центрифугируют при 8000 об/мин в течение 15 мин и получают таким образом надосадочную жидкость (НЪ,), содержащую солерастворимые белки.

Ферментный препарат. i:еобходимый для анализа, получают из культуральной ки.",кости гриба возбудителя сухой фузариозной гнили путем осаждения белка сульфатом аммония до 80% насыщения, ра: творения осадка в дистиллированной воде и пропусканием через колонку с акрилсксом Р— -100.

Активную ферментную фракцию лиофилнзируют и используют для работы. Из одного

1 л культуральной жидкости получают около

250 мг лиофилизированного фермента возбудителя болезни. Для анализа используют концентрацию 140 мкг/мл 0,2 М МаС1.

Для осуществления способа берут l мл ферментного препарата, 1 мл 0,06 М фосфатного буфера рХ 7,6. 1 мл 10 казеина в

1470271

Д,„ — экстинкция пробы со смесью фермент-надосадочная жидкость за вычетом контроля;

v — объем экстракта;

m — навеска материала;

140 — содержание фермента в мкг/мл.

На основе экспериментальных данных выявлено, что существует тесная корреляционная зависимость между активностью солерастворимого белка по отношению к фер10 менту фитопатогенного гриба и устойчивостью сортообразцов картофеля к инфекции.

Показатель активности в среднем 40 мкг на 1 r воздушно-сухого вещества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг — о восприимчивости, 26 мкг — о средней восприимчивости (таблица) .

Способ позволяет оценить большое количество образцов за короткий промежуток времени (30 образцов в трехкратной повторности за 7-часовой рабочий день). Для

20 определения требуется незначительное количество материала (50 мг). Способ прост в исполнении, не требует дефицитных, а также вредных для здоровья реактивов.

Формула изобретения

Индекс тп.. устойИнгибито-,ная активность белка, мкг, на воз ушносухое вещество, г

Сортообразцы чино< тн поракения

3,7

3,9 с

- >

3,5

3,6

2,2

7+0,72

6+0,92

5 О,80

8+0,6 .

Ь+О, 86

9+0,35

1 0,71

3+0,43

8+0,65

2 0,43

6+0,70

5+0,55

3+0,46

7+0,86

4+0,62

-+0,90

8+0,75

5+0 92 !

+0,77

1+0,80

Устойчивые

34, 45

43, 38, 42, 34, Б среднем 40, 29, 30, гз, 19, 28, 25, Б среднем 26, 21, 20, 17, 20, 18, 22

Б среднем 20, 46-8237

82763-13

101481-1

868254

4969-8 дошицкий

Устой н.ные

5,2

6,7

5,0

5 5

5,0

6,9. Среднсвосприимчивые

S2-768-17

42-82-2

7-80-101

428?-28

4781-2

Темп о

15-3420

78573-35

785е3- 6

4900-24

82716-2 . 1ивосный

11,2

15,8

14,9

11,8

11,9

Босприимчио

Составитель Л.Марченкова

Редактор Л. Гратилло Техред И. Верес Корректор M. Максимишинец

Заказ 137414 Тираж 618 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Рау шская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, IOI

0,06 М фосфатном буфере, рН 7,6 и инкубируют реакционную смесь в термостате при

37 С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Одновременно ставят контрольную пробу на реактивы. Для этого смешивают 1 мл фосфатного буфера, 3 мл 50 -ной ТХУ, 1 мл казеина и

1 мл фермента. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Таким образом получают активность ферментного препарата (Д,.).

Далее определяют активность фермента в присутствии солерастворимых белков. Для этого берут 1 мл ферментного препарата, 1 мл НЖ, 1 мл казеина и инкубируют реакциюнную смесь при 37 С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл

5ох х-ной ТХУ. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию при 280 нм. Контрольная проба состоит из 1 мл НЖ, 3 мл 50уо-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл ферментного препарата. Смесь фильтруют и измеряют экстинкцию. Получают Д, .

Ингибиторную активность солерастворимых белков из картофеля выражают в микрограммах угнетенного фермента на грамм воздушно-сухой массы и определяют по формуле

140 (Д вЂ” Дои)v

Д, ° m где ИŠ— — ингибиторная единица;

Др — экстинкция пробы с ферментом за вычетом контроля;

Способ оценки устойчивости картофеля к микромицетам Fusarium sambucinum Fuck путем определения биохимическго показателя, отличающийся тем, что, с целью ускорения оценки и снижения трудозатрат, в качестве биохимического показателя используют активность протеолитических ферментов возбудителя в присутствии солерастворимых белков картофеля, по величине которой оценивают устойчивость картофеля.