Способ определения контаминации производственных бактериальных культур

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для определения чистоты бактериальных культур, выращиваемых в промышленных условиях. Цель изобретения - упрощение способа. Сущность способа сводится к тому, что в отобранной пробе определяют исходную величину EH, затем к пробе добавляют одно из веществ, изменяющих внутриклеточный PH - пропионат или ацетат натрия. N,NЪ - дициклогексилкарбодиимид или карбонилцианид-м-хлорфенилгидразон и повторно регистрируют величину EH. Если величина EH не изменяется, делают вывод о наличии посторонней микрофлоры. При резком уменьшении величины EH по сравнению с исходной делают вывод об отсутствии загрязненности культуры. 1 з.п.ф.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК др 4 С 12 Ц, 1/04

ВСЕ : -" !!" Я

llATERT!ia- .,., . ;;;„Щ

Бй Ь /11!!..::!

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4263135/28-13 (22) 15.06.87 (46) 15.04.89. Бюл. У 14 (71) Институт экологии растений и животных Уральского отделения

АН СССР (72) Г.В.Смирнова и О.Н.Октябрьский (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Методы общей бактериологии,.

М,: Мир, 1983, т. 1, с. 54-89, 277-355.

Патент CllIA ¹ 4467032, кл. С 12 Q 1/04, 1984. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНТАМИНАЦИИ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ БАКТЕРИАЛЪНЫХ

КУЛЪТУР (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для определения чистоты бактериальных культур, выращиваемых в производственных условиях, Цель изобретения — упрощение способа, Пример 1. 20 мл культуры производственного штамма Escherichia

coli M-17, выращенного .на синтетической среде M-9 с рН 7,3 и ниже,. помещают в ячейку для измерения Eh.

Через 10-15 мин в ячейку вводят ацетат натрия до конечной концентрации

15 мМ/л. В чистой культуре наблюдают скачкообразное падение Eh в сторо ну отрицательных значений. В том слу„„SU„,, 1472507 А1 быть использовано для опре еления чистоты бактериальных культур, выращиваемых в промышленных условиях.

Цель изобретения — упрощение способа. Сущность способа сводится к тому, что в отобранной пробе опрецеляют исходную величину Fh, затем к пробе добавляют одно из веществ, изменяющих внутриклеточный рН вЂ” про./ пионат или ацетат натрия, N N -дициклогексилкарбодиимид или карбонилцианид-м-хлорфенилгидразон и повторно регистрируют величину Eh. Если величина Eh не изменяется, делают вывод о наличии посторонней микрофлоры. При резком уменьшении величины

Eh no сравнению с исходной делают вывод об отсутствии загрязненности культуры. 1 з.п.ф.

2 чае, если культура E. coli загрязнена посторонней микрофлорой, напр мер, Serratia marcescens, наблюдают отсутствие изменения Eh при добавлении Ацетата натрия на ранних стади- Ql ях и возможно повышение Eh на более () поздних стадиях загрязнения. Чувствительность способа 100:1 — 1000:1 (т.е. в 100-1000 частях основной культуры выявляют присутствие 1 части посторонней микрофлоры).

3>

Пример 2. 20 мл культуры

3acillus subtilis ВКМ 428, выращенной на синтетической среде М-9 с рН 7, 2 и ниже, помещают в ячейку для измерения Eh. В качестве реагента, вызывающего изменения внутриклеточного рН, в ячейку вводят спир1472507 изменяющих внутриклеточный рН, слабых проникающих кислот типа ацетата, метод может быть применен непосредственно в ферментере в ходе культивирования бактерий.

Формула и з обретения с

Использование способа упрощает контроль за чистотой культуры в лабораторных и промышленных условиях, сокращает время испытаний, повышает чувствительность и не требует дорогостоящего оборудования. В слуЧае использования в качестве реагентов, Составитель Г, Смирнова

Техред JI.Ñåðäþêoâà Корректор В. Романенко

Редактор И.:Сегляник

Заказ 1674/28 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Ф

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 товый раствор карбонилцианид-м-хлорфенилгидраэона (2,5-10 M/ë). По отсутствию скачка Eh в область отрицательных значений обнаруживают наличие посторонней микрофлоры в культуре.

Пример 3. Условия проведения определения аналогичны описанным в примерах 1-2, за исключением того, что к отобранной из ферментера культуре добавляют 20 мМ/л ЭДТА и в качестве агента, вызывающего изменение внутриклеточного рН, используют спиртовый раствор N N -дициклогексилкарбодиимида, добавляя

Ф его в измерительную ячейку до конечной концентрации 10 М/л. По отсутствию скачка Eh в область отрицательных значений обнаруживают наличие посторонней микрофлоры в культуре.

10 1. Способ определения контаминации производственных бактериальных культур путем регистрации изменения физического параметра в пробах культур, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в исследуемой пробе измеряют исходную величину Eh затем добавляют вещество, изменяющее внутриклеточный рН, повторно измеряют величину Eh и при уменьшении ее по сравнению с исходной определяют чистоту культуры, а при отсутствии изменения величины Eh определяют наличие контаминации.

2. Способ по и. 1, б т л и ч а

25 ю щ и й, с я тем, что в качестве вещества, изменяющего внутриклеточный рН, используют ацетат натрия, I пропионат натрия, N,N -дициклогексилкарбодиимид или карбонилцианид-м-хлорфенилгидразон.