Способ количественного определения флавонол-3-гликозидов

 

Изобретение касается аналитической химии, в частности количественного анализа фланоно -3- гликозидов в лекарственных формах. Цель - повышение точности и избирательности способа, который ведут обработкой раствора пробы в органическом растворителе - 35-40%-ном водном растворе диметилформамида ацетатом меди в присутствии CH<SB POS="POST">3</SB>C(O)OH и гексаметилентетраамина с последующим фотометрированием окрашенного раствора. В качестве контроля используют раствор анализируемой пробы, подкисленной CH<SB POS="POST">3</SB>C(O)OH. Эти условия обеспечивают увеличение избирательности в 10 раз и точности в 6-10 раз. Так, способ позволяет определять целевой продукт при содержании примесей агликонов в смеси с гликозидами до 10% против 1% в известном случае при точности анализа 2,2% против 13-23% в случае содержания 10% примеси агликонов. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (И) (5D4G 0l N 21 78

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ния — повышение точности и избиратель-. ности способа, который ведут обработкой раствора пробы в. органическом растворителе — 35-407-ном водном растворе диметилформамида ацетатом меди в присутствии СН С(0)ОН и гексаметилентетрамина с последуяцим фотометрированием окрашенного раствора.

В качестве контроля используют раствор анализируемой пробы, подкисленной

СН C(0)OH. Зти условия обеспечивают увеличение избирательности в 10 раз и точности в,6-10 раз. Так, способ позволяет определять целевой продукт при содержании примесей агликонов в смеси с гликозидами до 10% против 1% в известном случае при точности-анализа 2,27 против 13-23% в случае ,содержания 10Х примеси агликонов.

3 табл.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4247382/23-04 (22) 18.05.87 (46) 30.05.89. Бюп. 1(20 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт химии и технологии лекарственных средств (72) В.В. Беликов и Н.Т. Колесник (53) 543.42.062(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

1l>,1051413, кл. С 01 N 21/78, 1983.

Коренман И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений. N.: Химия, 1970, с. 255. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОЛ-3-ГЛИКОЗИДОВ (57) Изобретение касается аналитической химии, в частности количественного анализа фпавонол-3-гликозидов в лекарственных формах. Цель изобретеИзобретение относится к способу количественного определения флавонол3-гликозидов и может найти применение при контроле содержания флавонол-3гликозидов в лекарственных пренаратах.

Цель изобретения — повьппение точности и избирательности способа.

Способ осуществляют, следующим образом.

Пример 1. 0,01-0,03 r (точная масса) авикулярина, гиперозида, кверцитрина, рутина или фларонина растворяют в 10 мп диметрилформамида в мерной колбе емкостью 25 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

В две мерные колбы емкостью 25 мп помещают по 1 мл испытываемого раствора, в одну колбу прибавляют 2 мл

17.-ного раствора ацетата меди (0,02 г)

i в 407-ном диметилформамиде с 6Х-ной уксусной кислотой (0,-1 2 г)„затем добавляют 3,5 мл 15%-ного раствора генсаметнлентетрамнна (0,525 г) в

40%-ном диметилформамиде,- а в другую колбу прибавляют О, 1 мл 30%-ной уксусной кислоты и доводят объем растворов в колбах до метки 40%-ным водным раствором диметилформамида, Через 151483339

60 мин измеряют оптическую плотность раствора флавонол-3-гликозида с реал гентами на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны

405 нм для фларонина и 415 нм для авикулярина, гиперозида, кверцитрина и рутина, применяя в качестве контроля раствор соответствующего флаво- нол-3- гликозида, подкисленного уксус- 10 ной кислотой. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность растворов стандарФных образцов рутина, фпаронина и гиперозида, прит готовленных таким же способом. 15

Содержание флавонол-3-гликозида в процентах (Х) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле

К Д С, 100

Д, С 20 где Д вЂ” оптическая плотность испытываемой пробы;

Д вЂ” оптическая плотность стандартного образца, С вЂ” количество стандартного об- 25 разца в пробе для спектрофотометрирования в пересчете на сухое вещество, мг;

С вЂ” количество .испытываемого фла" вонол-3-гликозида в пробе для спектрофотометрирования

B пересчете на сухое вещеcT вор мго

В связи с отсутствием стандартов авикулярина и кверцитрина проводят ,пересчет гиперозида на авикулярин, с этой целью в числитель укаэанной формулы вводят коэффициент 1, 07, а для пересчета на кверцитрин применяют коэффициент 1, 035. Указанные коэффи- 40 циенты получены из отношения молекулярной массы гиперозида к молекулярной массе авикулярина или кверцитри-. на.

Для приготовления 1%-ного раствора 45 уксусно-кислой меди 1 r растертого в мелкий порошок ацетата меди растворяют в мерной колбе емкостью 100 мп в 20 мп воды, подкисленной 5 мл

30%-ной уксуснои KHcnoTst, затем при бавляют 15 мп 30%-ной уксусной кислоты, 35-40 r диметилформамида, перемешивают.и доводят объем раствора водой до метки.

Пример 2. В две мерные колбы емкостью 25 мл помещают по 1 мп испытываемого раствора любого из опре.деляемых веществ (авикулярин, ги перозид, кверцитрин, рутин, фларонин, приготовленного, как в примере 1; в одну колбу прибавляют 2,3 мл

1%-ного раствора ацетата меди (0.,023 г) в 40Х-ном диметилформамиде с 6%-ной уксусной кислотой (О,!38 r), затем добавляют 3,7 мл 15%-ного раст-. вора гексаметилентетрамина (0,555 r) в 40%-ном диметилформамиде, а в другую колбу прибавляют 0,1 мл 30%-ной уксусной кислоты и доводят объем растворов в колбах до метки 40Х-ным водным раствором диметилформамида.

Через 15-60 мин измеряют оптическую плотность проб и проводят расчеты, как в примере 1.

Пример 3. В две мерные колбы емкостью 25 мл помещают по 1 мп испытываемого раствора любого из определяемых веществ, приготовленного как в примере 1; в одну колбу прибавляют

2,5 мл 1% †но раствора ацетата меди (0„025 г) в 35%-ном диметилформамиде с 6%-ной уксусной кислотой (0,150 г), затем добавпя1от 4 мп 15%-ного раствора гексаметилентетрамина (0,600 r) в

35Х-ном диметилформамиде, а в другую колбу прибавляют 0,1 мл ЗОХ-ной ук-. сусной кислоты и доводят объем растворов в колбах до метки 35%-ныи водным раствором диметилформамида, Через 15-60 мин измеряют оптическую плотность проб и проводят расчеты, как в примере 1.

Пример 4. Количественное определение рутина в таблетках по 0,02 и фларонина в таблетках по 0,03.

0,05-0,1 г (точная масса) порошка растертых таблеток фларонина или 0,150,3 r таблеток рутина взбалтывают с 15 мп диметилформамида в течение

15 мин.и раствор фильтруют в мерную колбу емкостью 50 мл, остаток порошка в колбе и на фильтре промывают

5 мл диметилформамида, к фильтрату прибавляют 20 мл воды, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки.

В две мерные колбы емкостью 25 мл помещают по 2 мп полученного извлечения, затем прибавляют реактивы и проводят определение по методике, описанной в примере 1.

Содержание рутина или фпаронина в одной таблетке в граммах вычисляют по формуле

Д С .50 а

Д б-2

5 1483339 6 где Д вЂ” оптическая плотность испыты- В табл. 2 приведены сравнительные . ваемой пробы, характеристики известного и предлаД вЂ” оптическая плотность пробы raeMoro способов определения флаво;стандартного образца рутина нол-3-гликозидов. или фпароиина; В табл. 3 приведены результаты

С вЂ” количество рутина-стандарта количественного определения флавонолили фларонина стандарта в 3-гликозидов в искусственных смесях снектрофотометрируемой про- с агликонами предлагаемым способом. бе, г; Таким образом, избирательность

0 — средняя масса таблетки, г; предлагаемого способа повышена в б — масса порошка таблеток, г. .10 раз, а точность определения — в

В табл. 1 приведены результаты 6-10 раз. определения рутина и фларонина в модельных .смесях и таблетках. 15 Формула изобретения

Та блиц а 1

Найдено фпавонол-3-гликозида

Норма содержания по НТД

Объект

Навеска, r исследования

Модельная - 0,0151 смесь

98,5 99,1

101,2

0,0212 состава таблеток

0,0311

0,1515

0,2103

0,3011

0,0154 рутина

Таблетки

0,0190

0,0196

0,0194

0,018-0,022 рутина по 0,02

Модельная смесь состава таблеток флар онина

101,3

99,4

0,0231

0,0313

98,3 ..

Изобретение раапиряет область применения спектрофотометрического метода для анализа флавонол-3-гликозидов .s меeс ях,, с о д еaр ж аaщH1иHх 0©,1-107 ..сопутствуицих им агликонов, с точностью спектрофотометрического определения и позволяет получать достоверные ре-. зультаты анализа в случае разложения фпавонол-З-гликоэидов, что дает возможность использовать предлагаемый способ для изучения сроков хранения исходных субстанций в лекарственных формах (например, таблетках). Предлагаемый способ обеспечивает сокраще» ние времени процесса, включает применение общедоступных недорогостоящих реактивов и исключает исполЬзование спиртов, обычно применяемых при анализе флавоноидов.

Способ количественного определения фпавонол-3-гликозидов путем обработки раствора анализируемой пробы в органическом растворителе химическим реагентом с последующим фотометрированием полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения избирательности и

25 точности способа, в качестве органического растворителя используют

35-40%-ный водный диметилформамида, в качестве химического реагента— ацетат меди, обработку ведут в при30 сутствии уксусной кислоты и гексаметилентетрамина и фотометрирование ведут с использованием в качестве контрольного раствора раствора анализируемой пробы, подкисленной уксусной

35 кислотой, 1483339

Продолжение табл.! е

Найдено флавонол-3-гликозида

Навеска, г

ОбЪект исследо вания

Таблетки 0,0511 0,0271 фларонина 0,0724 0,0278 по 0,03 0,1053 0,0274

П р и м е ч а н и е. Результаты анализа модельных смесей выражены в % от взятой навески флавонол-3-гликозида., что показывает точность анализа.

Результаты анализа таблеток выражены в граммах в I таблетке в соответствии с нормами по НТД.:

Таблиц а 2

Извест-. Предлагаеный спо- мый способ соб

Показ ат ель

Из бир ательно сть способа (допустимый %. примеси агликонов в смеси с гликозидами)

Точность анализа при 10% примеси агликонов

1,0%

10%

13-23%

2,2%

Таблиц а 3

Найдено флавоноп-3-гликозндов, %

Содержание агли конов ,в смеси) %

Авнкуля". Гнперо- Кверцит- Рутин Фларо" рин знд pHH нин

° 99,699 7 . 99,9

160,2, 102,1

105 3

99)7 99 ° 4

99,8 99,6

100, 1 .1 00,3

100,3 !00,5

l0I 5 101 3

104,6 . 105,4

99,8

99,9 ! 00,1"

100) 3

100 9

106,3

99,5

99,7

99,8

100 I

101 6

117) l

100,3 100,28; 100,22: 100) 2 100) 14 .1,065 0,4379 0 ° 4616 О, 19 . 0,5704

0,4617" . 0 ° 296 0)3040 0 ° 195 0)3374

2)86 1)83 1)88 . !)21. 2)1

Опыты получены вне оптимальных условий и поэтому

s расчеты не включены) 02

I I

3i3

5)6

11,2 . 16,6

Метр алогиче с" кие характеристики:

Х

8а

8т6

Норма содержа" ния но НТД

0,027-0,033