Способ определения 4-оксикумарина

 

Изобретение относится к области аналитической и фармацевтической химии, конкретно к способам определения 4-оксикумарина. Цель - повышение достоверности и улучшение воспроизводимости количественного определения. Анализируемую пробу в среде метилового спирта обрабатывают последовательно 0,3-0,5 %-ным водным раствором перйодата калия, концентрированной соляной кислотой и 20-25%-ным раствором гидроксида аммония с последующим измерением интенсивности флуоресцении полученного раствора. 7 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„3497527 А1 (51) 4 G 01 N 21/64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ ченному раствору 1 мл 0,5% — ного водного раствора перйодата калия, 0,5 мл концентрированной соляной кислоты, 1,5 мл 25%-ного раствора гидроксида аммония и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора на флуориметре "Квант-5" или "ЭФ3

ИА" по отношению к стандартному раствору с известным содержани— ем 4-оксикумарина. Расчет содержания 4-оксикумарина в анализируемой пробе проводят по калибровочному графику.

Чувствительность способа состав ляет 0,01 мкг/мп, что в 1О раз выше ранее известного.

Способ имеет достаточно высокую селективность, так как подобной реакции не дают кумарин, синкумар, ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4372755/31-25 (22) 10.12.87 (46) 30.07.89. Бюл. 9 28 (71) .Kypский государственный медицинский институт (72) О.А. Григорьев и А,А. Хабаров (53) 543, 423 (088. 8) (56) Георгиевский В. П. и др. физико-химические методы анализа оптически активных соединений растительного происхождения. Ашхабад, Ылым, 1976, с. 45.

Авторское свидетельство СССР

Р 1182348, кл. С 01 11 21/64, 1984.

Изобретение относится к фармацевтической и аналитической химии, а именно к способам определения 4-ок-. сикумарина, и может быть применено для качественного и количественного определения этого соединения как в чистом виде, так и в виде примеси в различном материале при фармацевтических, токсикологических и санитарных исследованиях.

Целью изобретения является повышение достоверности и улучшение воспроизводимости при количественном определении 4-оксикумарина в диапазоне концентраций 0,01 — 10 мкг/мл.

Способ осуществляют следующим образом.

Исследуемую пробу растворяют в метиловом спирте и добавляют к полу(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 4-ОКСИКУ1"АРИНА (57) Изобретение относится к области аналитической и фармацевтической химии, конкретно к способам определения 4-оксикумарина. Цель — повышение достоверности и улучшение воспроизводимости количественного определения, Анализируемую пробу в среде ме-. тилового спирта обрабатывают последовательно 0,3-0,5% — ным водным раство ром перйодата калия, концентрированной соляной кислотой и 20-25%-ным — . раствором гидроксида аммония с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора. р

7 табл.

1497527 неодикумарин, фепромарон, нитрофарин, фурокумарины и ряд других близких по структуре соединений, что проверено на достоверных образцах данных ве5 ществ. Сведения о флуоресценции 4оксикумарина и "родственных" соединений при определении по предлагаемому способу приведены в табл.1, Найдены оптимальные значения концентрации реагентов (см.табл.2).

В качестве оптимальных по величине максимальной интенсивности флуоресценции и растворимости реагентов выбраны следующие их концентрации: 0,3. — 15

0,5 -ный водный раствор перйодата калия, концентрирования (35-387.) соляная кислота и 20-257-ный раствор гидроксида аммония. В качестве растворителя выбран метиловый спирт (табл.3). 20

Определены оптимальные условия количественного анализа 4-оксикумарина. В табл.4 представлена зависимость интенсивности флуоресценции

4-оксикумарина от количества 0,57- 25 ного водного раствора перйодата калия. В табл,5 и 6 представлена ана— логичная зависимость от количества концентрированной соляной кислоты и

257. †но раствора гидроксида аммо- 30 ния соответственно. Количества реактивов выбраны исходя из максимального значения интенсивности флуоресценции. При использовании запредель— ных значений количества реактивов желаемый результат не достигается, Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и концентрацией 4 — оксикумарина сохраняется в области 0,01 — 10 мкг/мл (табл.7). 40

Спектр возбуждения фпуоресценции 4-оксикумарина с выбранными реактивами находится в области 270400 нм с максимумом 346 нм, спектр излучения 375-515 нм с максимумом 45

418 нм. Величина Стоксового смещения для продукта реакции 4-оксикумарина составляет 72 нм.

Способ применен для количественного определения примеси 4-оксику50 марина в лекарственных средствах группы антикоагулянтов непрямого типа действия и зоокумарине, а также для анализа 4-оксикумарина в чистом виде.

II р и M e р ). Количественное определение 4-оксикумарина в субстан" ции. 0,01 г порошка 4-оксикумарина (точная навеска) помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в 8090 мл метилового спирта, доводят объем раствора до метки метанолом, К 0,5 мл полученного раствора добавляют 6,5 мп метилового спирта, 1 мп

0,57.-ного водного раствора перйодата калия, 0,5 мл концентрированной со-, ляной кислоты (35-387) и через 1 мин

1,5 мл 257-ного раствора гидроксида аммония, перемешивая раствор после добавления каждого реактива ° Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному, содержащему

4-оксикумарин в концентрации 5 мкг/мл.

Содержание 4-оксикумарина в пробе рассчитывают по калибровочному графику е

Пример 2. Количественное определение 4-оксикумарина в лекарственных средствах и зоокумарине.

0,1 г (точная навеска) порошка измельченных таблеток или субстанции зоокумарина помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в 80-90 мп метилового спирта, доводят объем. раствора до метки метанолом. К 0,5 мп полученного раствора добавляют метанол и реактивы в том же количестве и последовательности, как в примере

Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному с содержанием 4-оксикумарина 0,5 мкг/мл.

Расчет содержания примеси 4-оксикумарина в пробах проводят по калибровочному графику, В результате проведенных исследований нами обнаружено, что в таблет.ках неодикумарина, фепромарона и нитрофаоина содержится в качестве примеси 0,31% 4-оксикумарина, в

"Синкумаре" — 0,187. Зоокумарин содержит в среднем 0,9657 примеси 4оксикумарина.

Таким обпазом, предлагаемый способ по сравнению с ранее известным является более чувствительным (чувствительность способа 0,01 мкг/мл) и позволяет проводить количественное определение 4-оксикумарина.

Предлагаемый способ найдет применение в фармацевтических и контрольно-аналитических лабораториях для количественного определения 4-оксикумарина в субстанции и примеси его в лекарственных средствах антикоагулянтного действия, производных этого соединения (согласно требованиям технической документации), в централь1497527

Продолжение табл.1 ных заводских лабораториях для контроля качества и производства данных препаратов, в сельском хозяйстве и агрохимии для определения 4-оксику5 марина в родентицидных приманках (зоокумарине и др.), а также в санитарно-гигиенических исследованиях для определения остаточных количеств

4 — оксикумарина н воздухе производст- 10 венных помещений, сельскохозяйственных продуктах, воде, пбчве и тканях отравленных животных.

Обладая высокой достоверностью (чувстнительностью и избиратель- 15 ностью), способ позволит улучшить воспроизводимость (точность) анализа 4-оксикумарина.

Зоокумарин

Фепромарон

Нитрофарин

Синкумар

Псорален

Бергаптен

Ксантотоксин

Виснадин арбокромен

Таблиц а2

Относит ел ьная интенсивОбъем, мл

Реактив онцентация,7

Формул а из обретения 20 ность флуоресценции, 7.

Способ определения 4-оксикумарина, включающий растворение пробы в спиртовой среде, последовательную обработку химическими реактивами, 25 возбуждение и регистрацию флуоресценции, полученного раствора, по которой проводят определение, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения достоверности и улучшения 30 воспроизводимости при количественном определении 4-оксикумарина в диапазоне концентраций 0,01-10 мкг/мл пробу растворяют в метиловом спирте и обрабатывают 0,57.-ным водным раст вором перйодата калия, концентрированной 35-387 †н соляной кислотой и 25K.-HbIM раствором гидроксида аммония при их объемном соотношении

1:0,5:1,5, возбуждение проводят при 40 длине волны 346 нм, а регистрируют фпуоресценцию при 418 нм, по величине которой определяют концентрацию.

41

63

71

Раствор 1,0 перйодата 1,0 калия в 1,0 воде 1,0

0,1

0,2

0,3

0,5

Соляная О, 2 кислота О, 2

0,2

0,2

27

46

74

8

Концентриронанная (35-38) 54

73

84

5

Pаствор гидроксида аммония

1,0

1,0

),о

1,0

Таблица3

Таблица1

50

Яркая фиолетовая

Спирты

4-Оксикумарин

Яркая фиолетоМетанол

Этанол вая

Слабая фиолетовая

Кумарин

6-Иетилкумарин

Дикумарин

Неодикумарин

Нет н-Пропанол

Нет н-Бутанол

1497527

Продолжение табл.3

92

0,9

5 1,0

Амиловый спирт

Эфиры

Этилацетат

Кетоны

Ацетон

Метилэтилкетон

Азот содержащие соединения

Диметилформамид

Ацетонитрил

Форамид

Нет

Прочие растворители

Диоксан

Диметилсульфоксид

Вода

Таблица4 интенсивность флуоресценции,X раствора перйодата калия, мл

0,3

0,5

35 07

0,9

l,1

1,3

1,5

1,9

2,1

2,3 2

Концентрация, мкг/

О,1

0,2

0,01

0,02

4

0,3

0,4

0,5

0,6

0,03

0,04

0,05

0,06

Количество

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

О,7

0,8

Фиол ет ов ая

Относительная

36

43

57

64

71

78

Количество соляной кислоты мл 0,1

15 0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

20 0,7

0,8

0,9

1,0

Количество раствора

30 гидроксида аммония, !

Т аблица7

10 10

20 20

30 30

40 40

50 50

60 60

Продолжение табл.4

Таблица5

Относительная интенсивность

Алуоресценции,X

66

74

82

98

93

88

83

78

Т а блиц аб

Относительная инт енсивность флуоресценции,7

О

96

84

)497527

Продолжение табл.7

Составитель О. Бадтиева

Редактор Ю. Середа Техред Л.Олийнык Корректор Л. Патай

Заказ 4437/45 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

0,07 0,7 7

0,08 0,8 8

0,09 0,9 9

0,10 1,0 10

100

70 70

80 80

90 90

100 )00