Способ определения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для определения выхода биомассы галофильной микроводоросли дуналиеллы, а также для ее обессоливания. Целью изобретения является повышение точности определения. Способ заключается в том, что биомассу микроводоросли дуналиеллы отделяют от культуральной среды, удаляют остаток солей промывкой биомассы раствором, содержащим 3,2-4,5 моль/л уксуснокислого аммония и 4,4-8,8 моль/л гидрооксида аммония, высушивают при 105±2°С до постоянной массы и взвешивают. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„„SU„„1507261

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ г б . >

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4321978/31 — 13 (22) 18.09.87 (46) 15. 09.89. Бюп. М - 34 (71) Кишиневский государственный университет им.В.И. Ленина и Кишиневский государственный медицинский институт (72) В.Ф. Рудик и В.С. Гудумак (53) 639.664 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1049431, кл. А 01 С 33/00, 1983.

Авторское свидетельство СССР и 1402940, кл. А 01 С 33/00, 1983. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АБСОЛЮТНО CVХОИ БИОИАССЪ| ДУНАЛИЕЛЛЫ

Изобретение относи ся к микробиологии и может быть использовано для определения выхода биомассы галофильной микроводоросли дуналиеллы, а также для ее обессоливанил.

Цель изобретения — повышение точности определения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы, Способ заключается в том, что биомассу микроводоросли дуналиеллы отделяют от культуральной среды фильтрованием или центрифугированием, удаляют остаток солей промывкой биомассы раствором, содержащим 3, 2-4, 5 моль/л уксусно-кислого аммония и 4,48,8 моль/л гидроксида аммония, высушивают при 105+2 С до постоянной массы и взвешивают.

В процессе высушивания биомассы при 105 2 С уксусно-кислый аммоний и (51) 4 А 01 С 33/00, С 01 N 25/56, С 12 N 1/12

2 (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для определения выкбда биомассы галофильной микроводоросли дуналиеллы, а также для ее обессоливания. Целью изобретения является повышение точности определения. Способ заключается в том, что биомассу микроводоросли дуналиеллы отделяют от культуральной среды, удаляют остаток солей промывкой биомассы раствором, содержащим

3,2-4,5 моль/л уксусно-кислого аммония и 4,4-8,8 моль/л гидрооксида аммония, высушивают при 105+2 C до постоянной массы и взвешивают. 4 табл. гидроксид аммония полностью разлагаются с образованием летучих продуктов, что дает возможность получить биомассу микроводорослей без примеси солей. В предлагаемом способе кроме известного свойства уксусно-кислого аммония и гидроксида аммония — разлагаться при нагревании с образованием летучих веществ, использовано их свойство при совместном присутствии в указанных концентрациях, создавать условия.,при которых в процессе промывки практически исключаются потери биомассы в результате диффузии ниэкомолекулярных веществ (глицерина и др.) из клеток микроводорослей, Способ осуществляют следующим образом.

Биомассу дуналиеллы (по 10 мп суспензии) отделяют от культуральной жид! 50726 кости на предварительно отмытых высушенных и взвешенных мембранных фильтрах У 10 в аппарате Зейтца. Затем биомассу промывают раствором, содержащим 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/л гидроксида аммония. Контроль полноты удаления хлористого натрия осуществляют качественной реакцией на ион хлора азотнокислым серебром. Фильтры с биомассой помещают в сушильный шкаф при 105 -2 С, высушивают в течение 1 ч до постоянной массы, охлаждают до комнатной температуры, взвешивают на аналити- 15 ческих весах. Содержание биомассы составило 0,0174 г. Затем определяют абсолютно сухую биомассу, делая соответствующий пересчет на 1 л суспенэии микроводорослей. 20

Результаты определения АСБ культуры дуналиеллы при промывке раствором с различными концентрациями уксусно-кислого аммония и гидроксида аммония представлены в табл. 1 и 2. 25

Данные табл. 1 и 2 свидетельствуют о том, что промывка биомассы дуналиеллы раствором, содержащим уксуснокислый аммоний и гидроксид аммония в концентрациях, выходящих за преде- 30 лы 3,2-4,5 моль/л и 4,4-8,8 моль/л, дает более низкие величины определения АСБ. Различия статистически достоверны (P с 0,05).

Таким образом, для достижения цели 35 необходимо использовать раствор, содержащий 3,2-4,5 моль/л уксусно-кислого аммония и 4,4-8,8 моль/л гидроксида аммония.

В табл. 3 приведены результаты оп- 40 ределения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы известным и предлагаемым способами.

Сравнение этих результатов свидетельствует о том, что известный способ дает заниженные результаты определения АСБ дуналиеллы и менее воспроизводим по сравнению с предлагаемым способом.

С целью изучения причин потери биомассы по известному способу были поставлены эксперименты, позволяющие выявить факт диффузии глицерина и флакцчи средних молекул" — веществ в основном олигопептидной природы с мо 1екулярной массой ниже 30 кД из клеток микроводорослей в промывочный раствор.

Результаты определения содержания глицерина и фракции "средних молекул" в промывочных растворах при определении АСБ дуналиеллы известным и предлагаемым способами приведены в табл. 4.

Как видно из данных табл. 4, минимальная диффузия глицерина и фракции "средних молекул" в промывочный раствор имеет место при использовании раствора, содержащего 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/л гидроксида аммония. (1рп использовании известного способа с промывкой биомассы раствором уксусно-кислого аммония диффузия низкомолекулярных веществ (глице; ина и фракции "средних молекул") иэ клеток дуналиеллы в промывочный раствор резко увеличивается, что приводит к потере биомассы и получению заниженных результатов определения ЛСБ микроводорослей.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает более точное определение веса сухой биомассы микроводоросли дуналиеллы за счет полного удаления примесей солей и предотвращения потери биомассы в результате диффузии низкомолекулярных веществ из клеток в промывочный раствор.

Формула изобретения

Способ определения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы, включающий отделение биомассы от культуральной жидкости, удаление остатка солей промывкой биомассы раствором уксуснокислого аммония, высушивание до абсолютно сухого веса и взвешивание, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения перед промывкой биомассы в раст1 вор уксусно-кислого аммония вводят

4,4-8,8 моль/л гидроксида аммония, а содержание уксусно-кислого аммония в растворе составляет 3,2-4,5 моль/л.

150 7261

Таблица!

4,5М

СНЗСООМН4+

+ 8,8М

МН ОН

419М

CH3COONH4+

+ 1О,ЗМ

МН4ОН

3,2М

СН3СООМН4+

+ 4,4М

МН ОН

3,9М

CH3COONH4

+ 5,9М

NH ОН

2,9M

СН COONH +

+ 2,9М

МН,ОН

Номер а н и е. Х вЂ” средняя арифметическая, S — среднее квадратическое отклонение, Ч, Х вЂ” коэффициент вариации; Pu — достоверность различий по сравнению с результатами, полученными при примене-, нии раствора, содержащего 3,9М СН СООМН4 и 5,9М

NH4OH (Критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).

При меч

Таблица 2

4,5М

СН 3СООМН 4+

+ .8,8М мн он

2,9М 3,2М

СНЗ СООМН + CH COONH 4+

+ 2,9М +4,4М

МН40Н МН40Н

3,9M

СНЗCOONH4+

+ 5,9М

NH @OH

4,9М

СН 3СООМН 4+

+ 10,3М

Номер а н и е. Х вЂ” средняя арифметическая; S — среднее квадратическое отклонение, Ч, Х вЂ” коэффициент вариации; Pu — достоверность различий по сравнению с результатами, полученными при применении раствора, содержащего

3,9M CH COONH 4 5,9M NH40H (Критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) .

П р имеч

2

4

6

8

Х

Ч, Х

Ри

2

4

6

8

10 Р л

S ч, z

Ри

0,74

0,83

0,86

0;74

0,77

0,80

0,79

0,70

0,85

0,83

0,79

«+О, 053

6,7

<0,05

1,62

1,75

1,63

1,60

1,78

1,80

1,61

1,63

1,79

1,66

1,69

<О 083

5,0

L0 05

0,87

0,89

0Ä81

0,85

0,86

0,88

0,83

0,82

0,89

0,88

0,85

+0,035

4,1

)О 05

1,71

1,80

1,75

1,74

1,68

1,84

1,79

1,66

1,73

1,85

1,76

+О, 064

3,7 0,05

0,84

0,88

0,89

0,80

0,83

0,87

0,81

0,80

0,90

-0,79

0,84

+0,041

4,9

1,66

1,70

1,83

1,75

1,80

1,82

1,76

1 es

1,»

1,78

1,7

+ 0,060

3,4

0,82

0,80

0,89

0,82

0,89

0,85

0,78

0,89

0,80

0,87

0,84

t 0,042

5,0 0,05

1,80

1,76

1,67

1,70

1,82

1,69

1,80

1,72

1,68

1,»

1,74

+ 0,062

3,6 0,05

0,80

0,74

0,86

0,73

0,78

0,70

0,83

0,78

0 68

0,82

0,77

a0,О58

7,5 (0,05

1,65

1,57

1,73

1,78

1,59

1,63

1,69

1,77

1,63

1,60

1,67

+0,075

4,5 (0,05

1507261

Таблица3

Биомасса, г/л

Коэффициент вариации, 7

Количество

Способ

Среднее Среднее повторностей квадратичное отклонение

0,78 0,072 9,2

1,25 0,046

3,7 а Таблица 4

Содержание глиСпособ церина в промывочном растворе, моль/л растворе ед..опт. плотнос» ти

1,28 0,99

0 035 0,025

Составитель P. Андреева

Техред М, Ходанич

Корректор T. Колб

Редактор М. Недолуженко

Заказ 5472/3 Тираж 621 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,!01

Известный — с промывкой биомассы

1,0 моль раствором уксусно-кислого аммония 10

Предлагаемый — с промывкой биомассы раствором, содержащим 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/л гидроксида аммония 10

Известный — с промывкой биомассы

1,0 М раствором уксусно-кислого аммония

Предлагаемый — с промывкой биомассы раствором, содержащим 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/л гидроксида аммония

Содержание фракции

"средних молекул" в промывочном