Способ выявления нейронов

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления иннервации органов и тканей организма, что важно для топической диагностики заболеваний центральной нервной системы и физиологии центральной нервной системы. Способ заключается в том, что у наркотизированного животного выделяют нервные стволы, которые погружают в хлорвиниловые капсулы, заполненные суспензией уранилацетата в дистиллированной воде (концентрация выше 30%) или производят инъекции в исследуемый орган. После соответствующей экспозиции, длительность которой зависит от расстояния аксоеального транспорта, животное перфузируют холодным (4°С) раствором Рингера с добавлением сосудорасширяющих средств, а затем холодным (4°С) фиксирующим раствором (5%-ный параформальдегид на фосфатном буфере (0,1 М

рН-7,2) с 5%-ный сахарозой). Изъятые кусочки мозга дофиксируют в течение 10-12 ч в 10-30%-ном растворе сахарозы. После чего в криостате изготавливают срезы толщиной 15-30 мкм, которые заключают в нелюминесцирующие среды (вазелиновое масло, Эпон-812). Наблюдение меченных уранилацетатом нейронов производят на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ-3 в темном поле и свете люминесценции. Обнаруживают яркие желто-зеленые светящиеся гранулы в цитоплазме нейронов.

ф

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 С 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4237681/28-14 (22) 22,04.87 (46) 07. 1 1 .89. Бюл. К - 41 (71) Кубанский государственный медицинский институт им. Красной Армии (72) А.Х..Каде, A.A. Евглевский, М.Г.(друбич и В. Y..Ïîêðoâcêèé (53) 615.475 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 104376, (54) СПОСОБ BbIRRREHHS- HFPPOHOH (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления иннервации органов и тканей организма, что важно для топической диагностики заболеваний центральной нервной системы и физиологии центральной нервной системы. Способ заключается в том, что у наркотизированного животного выделяют нервные стволы, которые погружают в хлорвиниловые капсулы, заполненные суспензией уранилацетата в дистиллироИзобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной неврологии.

Цель изобретения — улучшение и упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

У наркотизированного животного выделяют нервный ствол, который погружают в хлорвиниловую капсулу, заполненную суспензией уранилацетата в дистиллированной воде (концентрация

30%). После соответствующей экспози152ОЗ85 И

2 ванной воде (концентрация выше ЗОБ) или производят инъекции в исследуемый орган..После соответствующей экспозиции, длительность которой зависит от расстояния аксонального транспорта, животное перфузпруют холодным (4 С) раствором Рингера с добавлением сосудорасгп ряющих средств, о а затем холодным (4 С) фиксирующим раствором (5Х-ный) параформальдегид на фосфатном буфере (О, 1 М; рН 7, 2) с 57. †н (сахарозой). Изъятие кусочки мозга дофиксируют в течение 10-12 ч в 10-303-ном растворе сахарозы, после чего в криостате изготавливают срезы толщиной 15-30 мкм, которые заключают в нелюминесцирующие средь.* (вазелиновое масло, эпон-812), Наблюдение меченых уранилацетатом нейронов производят на люминесцентом микроскопе

ЛЮМАМ-3 в темном поле и свете люминесценции. Обнаруживают яркие желто-зеленые светящиеся гранулы в цитоплазме нейронов. ции, длительность которой определяется скоростью аксонального транспорта и расстоянием до исследуемой структуры, животное перфузируют холодным

I (4 С) раствором Рингера с добавлением сосудорасширяющих средств, а затем холодным (4 С) фиксатором (5Х-ный параформальдегид, 5Х-ная сахароза, растворенные в фосфатном буфере (рн 7,2). Изъятые кусочки мозга дефиксируют в течение с 10-12 ч в

10-ЗОХ-ном растворе сахарозы, после чего на криостате изготавливают срез

15? 0385

Формула и з о б р е т ения

Составитель А.Чирков

Редактор Н.Лазаренко Техред Л.Сердюкова Корректор Н.Король

Заказ б748/43 Тираж 789 Подписное

BflKKH Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 толщиной 15-30 мкм, который заключают в нелюминесцирующие среды — вазелиновое масло, эпом-812.

Пример. У наркотизированной кошки выделяют грудной отдел блуждающего нерва на уровне первого ребра, порожают и центральный конец погружают в хлорвиниловую капсулу, заполненную 307.-ной суспензией уранилf0 ацетата. Капсулу фиксируют смесью воска с вазелиновым маслом. Через

48 ч животное перфузируют холодным раствором Рингера (4 С) с добавлением феноламина, а затем холодным (4 С) фиксирующим раствором. Изъятые кусочки продолговатого мозга дофиксируют в течение 10-12 ч. После этого в криостате изготовляют срезы толщиной

30 мкм, которые заключают в йелюминеспирующие вазелиновое масло. Выявление меченных уранилацетатом — нейронов проводят на полилюминесцентном микроскопе JHOMAN-3 в темном поле и свете люминесценции. Выявлены яркие желтозеленые светящиеся гранулы в цитоплаэме нейронов в области дорсального ядра блуждающего нерва.

Способ выявления нейронов, включающий введение Алюохрома, инкубацию, фиксацию и приготовление гистологических препаратов, о т л и ч а юшийся тем, что, с Целью упрощения способа, и качестве флюохрома используют ЗОБ-ную водную суспензию упанклацетата.