Способ подготовки костного мозга к трансплантации

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для низкотемпературного консервирования кроветворных клеток костного мозга с целью их последующей трансплантации. Целью изобретения является повышение эффективности способа за счет повышения пролиферативной активности кроветворных клеток костного мозга. Для этого костный мозг замораживают с криопротектором вначале от 0 до - 20°С, затем от - 20 до - 196°С, выдерживают в парах азота и размораживают в водяной бане при 28-32°С до полного оттаивания суспензии, которую разводят до концентрации 1<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">5</SP> кл/мл и культивируют.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51) 5 А 01 N 1/02 с

ГОсудАРстВенный номитет

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4285067/28-14 (22) 13. 07., 87 (46) 07.01,90. Бюл. Р 1 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) А.Н. Гольцев, А.А. Цуцаена и Т.Г. Дубрава (53) 615.475 (088.8) (56) Криоконс ер виро на ние кл ет очных суспензий./Под редакцией Цуцаевг А.А.

Киев, Наукова думка, 1983, с. 126. (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ КОСТНОГО МОЗГА

К ТРАНСПЛАНТА»ЯИ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для низИзобретение относится к медицине и может быть использовано для низкотемпературного консервирования кроветворных клеток костного мозга с целью их последующей трансплантации.

Целью изооретения является повышение эффективности способа за счет повышен»»я пролиферативной активности кроветворных клеток костного мозга.

Пример 1. Костный мозг замораживали с криопротектором 157.-ным

ПЭО-400 по двухэтапной программе: от о о

0 до — 20 С со скоростью 1 С/мин и от

-20 С до — 196 С со скоростью о

300 С/»д»н. Затем ампулы с костным мозгом извлекали из жидкого азота и помещали в пары азота, где экспонировали в течение различного времени

5-40 мин. После этого ампулы опускали в водяную баню с температурой о

30 С и отогревали в течение 50-60 с, „„SU„„1533629 А 1 котемпературного консервирования кронетнорных клеток костного мозга с целью их последующей трансплантации. Целью изобретения является повышение эффективности способа за счет поныщения пролиферативной активности кроветворных клеток костного мозга., Для этого костнь»й мозг замораживают с криопротектором вначале от 0 до

-20 С, затем от — 20 до -196 С, вы— держинают в парах азота и размораживают и водяной бане при 28-32 С до полного оттаивания суспензии, которую разводят до концентра»п»и 1 ° 10 кл/мл и культиви»>уют. т. е. до полного оттаивания суспен— зии. Суспензию затем разводили до концентрации 1 10 кл. /мп и культивировали, Учет формируемых структур (кластеров и колоний) в агаре определяли на седьмь»е и 14 сутки культивирования. Контролем служит нативный костный мозг, культинируемьп» в дозе

1 10 кл. /мл.

Формирование максимального количества структур в агаре не на седьмь»е, а на 14 сут снидетелbcòâóåт об ингибиции пролифератинной активности кроветворных клеток, максимальное количество структур в агаре формируется именно на 7-е сутки.

Пример 2, Костный мозг замораживали как в примере 1, экспонировали в парах азота 20 мин, а затем помещали в водяную баню с различной температурой и отогревали при пос>и. е;Iтi в с криакангер E>IðoçàHHb>I мие:-а;. ра>->с<>ла>1> а> О> .

ГЕМ„Ч "О, > Ц-"ЛЬ>С, ПОВ>Ш;ЕНИЯ

ЗЛфЕК i 1(ВН,3> "11 C 1 IOCQOc . За O>!eÒ ПОВЫ>< С i»Oe:=,. I O» (i P OIÃÈ Реда.ктор H. Гунько 3аказ 1 П;>дпи.".1;-=ВНИИП1>1 Госудааственно; <> 1<ам>.." ет;.:. !io I: Обрат:-.<Иям н .. > к>з>>т>(ям лвн Г1(Н . ССС

11 303 > !1ос ., Ж-3,,.".-у>>ская наб., ц. 4> 5

Произво>,<:TI>åII>Iî-иэ(а<-..ы кч> комб> 1-; .-. е . i у.: op j;»р:; -;;-.-:1на,>1 тая яном перемешивании.,>иць ..I !ñ;Hе ма>гипуляции прсводили alii>Ho.. Il÷ I с прн— меру 1„Контролем служи- >>ативвый хо"тньп1 мозг.

Пролиферативная «кти>.-нос гь 1>.>етак повышалась при 20-2. > ми к вь,(>,е>з>»иваыя в парах азота и при ра iiiopа;::>II>(н>»> водяной бане при 28-32 С.

При подготовке кзст><1>г<> моз> c к трансплантации предлагае . ым спасобсм максимальное число трук(ур J ..1 аре формируется на седьмые сутки,:. при известном =пособе — на i - с ут Ä I>p>> зтом сохранность клеток 1>е цадз ет,.

Снижение (>Или по.>ное с >зсутс вие, - ° ° ° ингибиции >тролифера гявно" г1<ти насти крс ветворных клеток каст(ога 1>с з G обеспечивает возможность своз>.,; ОменНОГО ВОсcтанозления ге>Ф I.аi-з:,, > 15!О р и у л:>-1 н з О б р е т е н н я

3 ",асаб п<.дго". Овки кос-наго моз;-а к "p 31I«>U а >- > а ции путем поз тапного зс>1 >оражив(1н1.>> еI 0 с pH<>HDoòек ГО1> Ом

:>«>>и.зтиленоксидсм-400 13io HQA концентрации внач>з>е >ар(- температуре

> <>

О до -20 С с<. скорас ь>о 1 С/мин ...,а, . o

=lc3 . м oт . 20 (, дo - 196 С со скос>, >з:>ать>в 300> (:./ >и>-: с 1":ос>>едудши1> разА » .>»жАВЯН>.(Е> (, О 7:Л .:Е Ч Я 10 Ц И й

«Ге»ия п>за:1и(зе1зативь1он акти>зности Кро

":»=òâoðHIiI>< K. ;åòo><, кастK."é мозг перец

oëз>О>зажи ва>(и «и зь(це>»><ива><>т в парах а з О.:.а в т -. ч:.:н>ie 20-2."1 мн>=: „a размора;>с-:ванне и зов<: (я - HDI-- /. " 2