Штамм claviceps purpurea вкм- f-2642 д-продуцент эргокриптиновых алкалоидов

 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению алкалоидов. Целью изобретения является новый штамм CLAVICEPS PURPUREA. При выращивании штамма на среде из разваренного зерна ржи на 6-7-й день появляется воздушный мицелий, постепенно разрастающийся по всей поверхности зерен. При культивировании на среде агаризованное пивное сусло штамм образует ватообразный, белого или сероватого цвета мицелий с большим количеством конидиоспор. При выращивании штамма на искусственной среде Т<SB POS="POST">2</SB> на 5-6-е сутки роста появляется мицелий, выделяющий фиолетовый или темно-фиолетовый пигмент, окрашивающий питательную среду. Размеры конидиоспор при выращивании штамма на указанных средах одинаковые и составляют (4,4-8,8)<SP POS="POST">.</SP>(2,54-5,28) мк. Штамм CLAVICEPS PURPUREA ВКМ F=2642D является строгим аэробом, оптимальная температура роста (24±1)°С. Штамм CLAVICEPS PURPUREA ВКМ F-2642D обеспечивает повышение урожайности рожков спорыньи в среднем более, чем в 2,5 раза, и увеличение эргокриптиновых алкалоидов соответственно на 10.3%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК..SU„„1551731 (51)5 С 12 N 1/14

Е !

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению алкалоидов.

Целью изобретения является новый штамм Clavi ceps purpurea, обеспечивающий повышение вьмода эргокриптиновьм алкалоидов.

Культурально-морфологические признаки.

При сапрофитном выращивании штамма

ВКМ F-2642Д на среде из разваренного зерна ржи на 6-7-й день появляется белый мицелий гриба, постепенно разрастающийся по всей поверхности зеГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4023172 /23-63 (22) 12. 02. 86 (46) 23.03.90. Бюл. Р 11 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных растений (72) С.С. Шаин, P.A. Волошина, Л.И. Колесникова, В.С. Фонин, Ю.А. Руссков, Г.К. Кузнецова, Е.Ф.Павлова, Т.П.Беляевская, Г.И. Климахин, Т.Е. Монахова, В.В. Ануфриева и В.В. Вандышев (53) 547.945.1(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 232467, кл. С 12 N 11//1144, 1968. (5 4) ШТАММ CLAV I CEPS PURPUREË BKM-Г

2642 Д-ПРОДУЦЕНТ ЗРГОКРИПТИНОВЫЕ АЛКАЛОИДОВ (57) Изобретение относится к микробиологии, в частности.к получению алкалоидов. Целью изобретения является новый штамм Claviceps purpurea.

При выращивании штамма на среде из разваренного зерна ржи на 6-7-й день

2 появляется воздушный мицелий, постепенно разрастающийся по всей поверхности зерен. При культивировании на среде агаризованное пивное сусло штамм образует ватообразньп, белого или сероватого цвета мицелий с большим количеством конидиоспор. При выращивании штамма на искусственной среде

Т на 5-6-е сутки роста появляется мицелий, выделяющий фиолетовый или темно-фиолетовый пигмент, окрашивающий питательную среду. Размеры конидиоспор при выращивании штамма на укаэанных средах одинаковые и составляют (4, 4-8, 8) . (2,54-5,28) мкм. Штамм

Claviceps puryurea HKM F-2642Д является строгим аэробом, оптимальная температура роста (24+1) С. Штамм

Claviceps purpurea ВКМ F-2642Д обеспечивает повышение урожайности рожков спорыньи в среднем более, чем в 2,5 раза, и увеличение эргокриптиновых алкалоидов соответственно на 10,37.. рен. Через 15-20 дней начинает происходить образование конидиоспор, и мицелий приобретает сероватое окрашивание.

При культивировании штамма на среде агаризованное пивное сусло рост мицелия становится заметным через

7-10 дней- после посева. На поверхности среды образуется белый или сероватый ватообразный мицелий, трудно отделяющийся от среды. Через 18-23 дня наблюдается образование конидий, и мицелий приобретает сероватый оттенок, 1551731

При выращивании гриба на среде Т, следующего состава г/л: сахароза 100; аспарагин 10; дрожжевой экстракт 0,1;

КС1 0,12; t18SO+ 7Н20 0,25 РеБ047нао 5

0,02; Еп50+7Н 0 0,015; Ca(NO))à 1,0;

KH Р04 0,25, агар-агар 15; дистиллированная вода 1000 мл, мицелий появляется на 5-6 сут роста и сопровождается образованием фиолетового и темно-фиолетового пигмента, окрашивающего питательную среду. В дальнейшем мицелий также приобретает грязно-фиолетовый цвет. Размеры конидиоспор штамма (3 4 8 8)х (2 54-5 28) мкм.15

Предлагаемый штамм на изученных средах дает обильное конидиальное спороношение .

Физиологические признаки.

Штамм Cl aviceps purpurea ВКМ 20

F-2642P, является строгим аз робом, оптимальная температура роста спорообразования — 24 1 С. Как известно, в природе рожь:заражается аскоспо-. рами спорыньи во время цветения. По- 25 этому необходимо искусственное инфицирование растений ржи в фазу выколашивания путем одновременного накалывания колосьев и опрыскивания заранее приготовленной водной суспензией конидиоспор Claviсeps purpurea ВКМ

F-2642Д, полученных при выращивании штамма на среде Н3 разваренного зерна ржи или агаризованной среде из пивного сусла.

Через 8-14 сут на сформировавшихся гифах образуются конидиоспоры,которые выделяются на поверхность колосьев с так называемой "медвяной росо!;

В том случае, если цвет ни» Ржи сов- 40 падает во времени с появлением "медвяной росы", то при наличии насекомых и благоприятной погоды происходит вторичное заражение растений ржи конидиальными спорами. Через 40-45 дней с . 45 момента заражения цветков на растениях ржи созревают склероции, содержащие алкалоиды. Склероции нового эргокриптинового штамма буроватофиолетовые, гладкие, менее изогнутые, средней длины 35,5 мм, средним диаметром 3,0 мм.

Новым штаммом ВКМ F-2642П инокулируют в асептических условиях стерильную среду Иэ разваренного зерна ржи

55 в колбах-матрацах емкостью 1,5-2,0 л.

Посевы гриба термостатируют при

24+1 С в течение 30 дней. После термостатирования колбы переносят s cyхпе темное помещение с температурой

7 2 С, где и хранят до заражения ржи, ! но не более 2 мес. Рожь заражают в период начала выколашивания. Инфекционный материал (суспенэию конидиоспор) готовят путем смыва конидиоспор водопроводной водой с мицелия гриба на среде из разваренных зерен ржи.

Водную суспензию конидиоспор фильтруют через марлю. Концентрация конидиоспор в суспензии составляет не менее

5 тыс.в 1 мм . Из одной колбы-матраца получают около 6 л инфекционной жидкости для заражения.

Инфекционную жидкость используют не позднее, чем через 2-3 ч после ее приготовления. Заражение озимой ржи сорта HT-12 осуществляют на опытных изолированных делянках (каящая площадью 10 и ) в четырехкратной повторности вручную с помощью игольчатых планшетов, смоченных суспензией кони- диоспор гриба. На заражение одной делянки используют в среднем по две колбы.

В течение вегетационного периода проводят наблюдение за развитием спорыньи на ржи (сроки появления "медвяной росы" и цветения ржи) и учитывают интенсивность заражения. После созревания рожков спорыньи (череэ 7 недель со дня заражения ржи) их убирают вручную. Полученные рожки подсушивают на воздухе в затененном помещении. Содержание эргоалкалоидов в рожках и их компонентный состав определяют известными методами.

Биологическая урожайность рожков спорыньи предлагаемого штамма в

1985 составила 245,2 кг/га при содержании суммы зргоалкалоидов 0,50 и эргокриптиноных 0 37 ..

Предлагаемый штамм Claviceps purpurea BKN F-2642Д по сравнению с известным эргокриптиновым штаммом обеспечивает повышение урожайности рожков спорыньи в среднем более, чем в 2,5 раза, имеет более высокое содержание суммы эргоалкалоидов в рожках (0,47K), содержит более высокое количество наиболее ценных эргокриптиновых алкалоидов (0,32 ).

Формулаизобретения

Штамм Claviceps purpurea ВКИ

F-2542@ (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов) — продуцент эргокриптиновых алкалоидов.