Штамм гриба реniсilliuм vеrмiсulатuм для получения препарата против белой и серой гнилей подсолнечника
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения биологического препарата против болезней растений, а именно с белой н се рой гнилями подсолнечника. Целью изобретения является получение более активного штамма гриба в борьбе с мицелиальной и споровой формами белой и серой гнилей подсолнечника. Штамм Penicillium vermiculatum выделен из склероциев белой гнили, собранных с пораженных растений подсолнечника , присвоен № РК-1. Штамм депонирован в коллекции ВИЗРа под № 3, Обработка растений препаратом, полученным с использованием указанного выше штамма, предохраняет от поражения белой гнилые 90% корзинок подсола нечника, а от поражения серой - 60%. S 7 табл.
I и9>Я 3<в 1
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
flQ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГИНТ СССР (46) 23.03,92. Бюл. Р 11, (21) 4230454/13 (22) 10.03,87 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт масличных культур им, В.С,Пустовойта (72) О.И,.Тихонов и Л.В.Маслиенко (53) 576.8 (088.8) (56) "Canada Agriculture", 1979, 24, р. 12-14, Авторское свидетельство СССР
11(f 369026, кл. А 01 N 63/04, 1984. (54) ШТАММ ГРИБА PENICIIË.IUM UERHICUЬАП1М ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ БЕЛОЙ И СЕРОЙ ГНИЛЕИ ПОДСОЛНЕЧНИКА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения. био1
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может использоваться для получения биологического препарата в борьбе с болезнями растений, а именно с белой и серой гниЛями подсолнечника.
Целью изобретения является получение более активного штамма гриба
Penicillium vermicu1atum в борьбе с мицелиальной и споровой формами белой и серой гнилей подсолнечника.
Штамм гриба Penicillium vermiculatum выделен из склероциев белой гнили, собранных. с пораженных растений подсолнечника, ему присвоен N РК-1.
Штамм гриба Penicillium vermicula
turn РК-1 депонирован в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного (51)5 С 12 К 1/14, А 01 N 63/00// (С 12 N 1/(4, С 12 R (г80) логического препарата против болез-, ней растений, а именно с белой и се- . рой гнилями подсолнечника. Целью изобретения является получение болев активного штамма гриба в борьбе с мицелиальной и споровой формами белой и серой гнилей подсолнечника, И1тамм Penicillium vermiculatum выделен из склероциев белой гнили, собранных с пораженных растений подсолнечника, присвоен P- PK""1, Штамм депонироваи в коллекции ВИЗРа под У 3, Обработка растений препаратом, полученным с использованием указанного выше штамма, предохраняет от поражения белой гнилью 903 корзинок подсолнечника, а от поражения серой - 607. @
7 табл.
2 института защиты растений и ему . 1ьа присвоен коллекционный номер 3.: j>g
Морфологические признаки.
Мнцелий бесцветнь й, с возрастом темнеющий. Конпдиеносцы бесцветные, септированные, прямостоящие, отходят от субстратнаго мицелия, 24- 250 х х 1,5-3 мкы. Кисточки двухъярусные, симметрические. Метули 10-15 х 1,7-2,4 мкм по 2-3 в мутовке, Фиалиды . ланцетовицные, 8- 12 х 1,7-2,5 мкм по 2-7 в мутовке. Конидии полуокруглые до эллиптических, 2,2-3,5 х 2,0-2,5 мкм, гладкие, в масле кс ричневато-зеленые, Гриб имеет сумчатую ста" дию. Плодовые тела круглые, 200500 мкм в диаметре, желтые. Перидий. состоит из желтых переплетенных ин.крустированных гиф до i 2 мкм толщи1476891 ны, Сумки круглые до широкоэллиптическ х, 8"12 х 7,5-10 мкм. Сумкоспоры п лрйкоэллиптические, 3,5-5 х 2,53,5, толстостенные, шиповатые, желтые, иногда с возрастом становятся
5 красноватыми..
Культуральные признаки.
Культуральные признаки штамма изучались на: трех видах агаризирован- 10 ных питательных сред при t 15-35 0.
На агаризированной среде из вытяжки семянок подсолнечника (вытяжка) колонки с лицевой стороны, оливкового цвета, порошистые, мелкие, не слива! ются в единую колонию. Конидий обра- зуется много (в массоном. количестве), плодовых тел на этой питательной среде нет. С обратной стороны среда окрашена в оливковый цвет.
На.агаризированной среде Чапека колонии сливаются и образуют единую колонию (за исключением при t 35 С), порошистые,. с лицевой стороны окрашены в оливково-желто-бежевый той.
С обра.ной стороны среда окрашена от светло-зеленого до темно-зеленого тона„ Плодовые тела образуются при всех испытанных температурах, в массовом количестве прн t 25-30 С.
На картофельно-сахарозном агаре о колонии порошистые при t 15 С срао стаются в единую колонию, при 20 С не сливаются, прн 25 С растут радиальными кругами. С лицевой стороны колонии окрашены в темно-оливковый тон, с обратной — розово-кремовый.
Плодовые тела в массовом количестве. образуются при t 25-30 С, Иорфолого-культуральные признаки штамма на разных средах и при различных температурах приведены в табл, 1, Физиопогические признаки.
Аэроб, Температурйый оптимум роста 25-30 С, Оптимальный рН в преде-. лах от 5 до 8 (табл.2) Оптимальный рост гриба отмечен на средах, где в качестве источников углерода использовали caxaposy н крахмал (табл.3), в качестве источников азота - хлорйс. тый аммоний, азотнокислый висмут, азотнокислый аммоний (табл.4) ° На этих средах гриб образует интенсивное спороношенне, Тиомочевина и мо- 55 чевина как источник азота грибом не используются.
Условия хранения, Чистую культуру штамма Penicillium vermiculatum РК-1 сохраняют в биологических пробирках на косой питательной среде (картофельно-сахарозный arap), Для поддержания патогенности гриба в пробирки с чистой культурой гриба помещают нскусственно выращенные склероции белой гнили, предварительно простерилизованные поверхностно. Температура при хранении 4-5ОС.
Пример получения препарата для борьбы с белой и серой гнилями подсолнечника °
Для получения препарата 30-дневную культуру гриба, выращенную на стерилизованной питательной среде, состоящей из семянок и лузги подсолнечника в соотношении 113, подсушивают и размалывают на мельнице до мелкодисперсного состояния, Затем определяют титр препарата.
Примеры применения препарата.
Пример 1. Опыты прозодили в тепличных условиях.
Здоровые корзинки подсолнечника в фазе зеленой спелости опрыскивали суспензией 30-дневной чистой культуры гриба Penicillium vermiculatum
РК"1. Расход суспенэии 15-20 мл на одну корзинку.
Другие здоровые корзинки подсолнечника в фазе зеленой спелости опудривали порошком, изготовленным на основе. гриба Penicillium чегшасо1atum
PR-1, выращенного на стерилизованных семянках,подсолнечника. Расход порошка 1 г иа одну корзинку подсолнечника. Титр спор порошка 1,7 млрд./г.
После обработки грибом-антагонистом корзинки заражали белой и серой гнилями путем накладывания на них семянок подсолнечника, зараженных возбудителями гнилей (10-дневная чистая культура грибов белой и серой гнилей, выращенная на стерилизованных семянках подсолнечника).
Для развития и размножения грибаантагониста, а также для внедрения и развития возбудителей гнилей в тканях корзинок подсолнечника в теплице создавали условия высокой относительной влажности (90 ) и температуры воздуха (18-23 С). Опрыскивание суспензией гриба защитило 90Х корзинок от поражения белой и серой гнилью и б0% корзинок - от серой гнили, Опудривание порошком гриба
Формула изобретения
Штамм гриба Репiс 11хиш vermicula"
turn ВИЗГ Р 3 для получения препара-. та против белой .и серой гнилей подсолнечника.
5 14/689 защитило i00X корзинок от белой гнили и 73,47. — от серой гнили (табл.5}.
Применение суспензий и порошков известных грибов-антагонистов белой гнили Coniothyrium minitans, Glio«
cladium catenulatum, Trichocderma
viridal положительных результатов в целях защиты корзинок подсолнечника от поражения белой и серой гнилями не дало.
Пример 2. Опыт проводили в тепличных условиях, в растильнях с почвой, на фоне искусственного заражения, созданного внесением в почву мицелия белой гнили, выращенного на стерилизованных семенах подсолнечника. Перед посевом семена подсолнечника опудривали порошком гриба Penicillum vermiculatum. Испытывали два способа применения гриба-антагониста:
20 сухое опудривание и опудривание с увлажнением, Норма расхода препарата в первом варианте 10 г порошка гриба на 1 кг семян; во втором 10 г по- 25 рошка .гриба и 200 мл воды íà 1 кг семян. Титр спор порошка 1,7 млрд./r.
Контролем служили растильни с внесением в почву инфекции белой гнили без применения гриба-антагониста и растильни с посевом подсолнеч30 ника только чистыми семянами. Эталон— опудривание семян порошком гриба
Coniothyrium minitans, титр 2,5млрд./r, Растильни помещали в бокс с температурой 20-23 С; почву ежедневно 35 увлажняли.
Установлена высокая эффективность опудривания семян подсолнечника грибом Ретисх11ium vermicul.stum РК-1 с
1 6 увлажнением. Всхожесть семян в этом варианте составляет 91,77. при всхо" жести в контроле с внесением инфекции 4,2 (табл,6).
Пример 3. Опыт проводили в полевых условиях, на делянках площадью 50 м, в четырех повторностях °
11 11
Сорт подсолнечника Передовик
Исследования проводили на искусственном инфекционном фоне, созданной путем внесения склероциев белой гнили в гнезда при посеве, Семена подсолнечника перед посевом обрабатывали порошком гриба Penicillium vermiculatum РК-1. Норма расхода препарата
10 r порошка гриба и 200 мл воды на
I ! кг семян, Титр спор 1 7 млрд. у г.
Контролем служили делянки с внесением склероциев без гриба-антагониста и посев подсолнечника только чистыми семенами. Эталон - обработка семян
1 гриба Coniothvrium minitans (молдавс" кий штамм) с той же нормой расхода препарата, Титр спор 2,5 млрд ° /г. (табл. 7).
При опудривании семян порошком на основе гриба Penicillium vermiculatum
РК-1 снижается изреженность всходов по сравнению с контролем на 13,2Е и снижается поражение растений прикорневой формой белой гнили: в варианте составляет 0,5Х; в контроле - 11,8Х.
) 7{7689!
I и х о
X {»
Э «
f" О ф
) ttJ U и э и! в о о ы
t
G .! о х э о
Н х с э а х о х
И Э Э Й
N о
Ц о
5 о
kf о о о о
Э
3i
p о и о у, 5
9g
2" о л
1»
g x о э
Ы l л ф
Е
4{i Э
Р о э
Х f»
Х
> х о
)х
Э х
Ц
C) Ф х х о
{ о л л
С 4
Х
< 1 { л
СЧ
М о л ь
<4\
Я
СЧ
И
Ch а ь
М л
"{ и
3
{ 4» !
I х х
{:(Р Ъ со л ь м
СО
« ь б а
CV
Х
<4{
Я
К
Ch ь
С4) л
Х
Ф { а
G о о
1 о
5 5 о ж
О Я
1 х Р3 д о о z
Щ Э о а
Р4 И
М о
3
OЩ о х
fQ д о х
3 Э
Э а э
М я х о
Х и х
I
О
И х! 1 о к о
1 о м э х р{ о
o z
И Э
G а
С4 М
5 Q
Я
F4 4
Э х о
gg6 х а о о о ц х
Е
Е. х 3 о щ
3 хЭ
%3
Q 93 о
Ц о
ГМ
Я
f" М и )
1Г
{
° i-I (J
М
Э
Г4 х
Й
Щ
М х о х а !
» и
Щ
6 и
Ц
Э х
s0
Ц
I о о
{ о в а о
{ х
44 х! ) l я o gl I4 О! о
o! f-l o
1 И
2 I 0 Ф
u о
Э ю
Х I {" Э
j Й а !
QJ !
{ I
Х а I! х
Э и х с и х а х о х л Э
Ц о э о
Х (»
1 о й
Х î л
2 3 63
f». Я
Q cQ {J а4 Р!
1 m! О О оха
bdi O х
О
О
3 х
) о а
I о о
{:{ х ю х х и х х и fQ о3 «о о v
oculo ах о йЛ,„а
62
) о m
1 я!
i-о о о х р, е{{
A g-И
Л Я» {J х!
5 о
М I о о
5 х о
„", U { и
<ф Я
Е {{I
М
g Х х g э и )- | а о е о х ц
4 4 М я {» л хэи {о5Ни5 о у Я
1 о у л
2
Я b
Ц р о
1" 5
З о
Ц о л
БФ х х о а
Ф с4
Оъ
Ю х !
C) (Э
М
Х
СО е
C) х (1 л
СЧ
64 х
ID а
М
Ъь х
Ю х и
1 а Й
И э 0
m Я
1 о
Я
o m
1! л Я
<б д
m x о е
0) Д Я
I о о х е х я л!
-iо m
1 ф а Ф и \«
Х й
П о о
Р о о
Х И! о
Е
<У
m о
1 о х
Ф (-
I и х о ц 3
o m
М Я ! х и
owe х х 3 о хн ю о о !
% 5 а о
v а
1 о о о о ха
1 и я ц R х а2 .CD
g g
1 о о
ОХР, ы9 йх о
5 (p о 0
1 И и П
Ц и ы 476891
5
5! и K и х
m o о Х
О Р.
Р4 К
I о
И с m
О 11 И о нх о х о д И
0) v м
1 m! о о оха
Ф а g м и х
Ц 0l л - 3 х ф Р ооох х ц о ххоо
5ех5 хх в g с 9 о х о и 3 и и х ихîvgo
- х х х
% ;ЯР2
3 1- х 4 1- о
Таблица 2
Влияние рИ среды на развитие штамма
PelIicillium vPrmicu1atum Рк-1, т. 23 с рН Рост мицелия и образование плодо- Вес сухого мицевых тел лия, мг
30,S
30 8
3 Обильный, плодовых тел малО
4 Обильный, плодовьп< тел мало
5 Обильный„ плодон?х тел массовое количес гно
6 О биль! I?>Ô, пл О ДО ?J ? I т е?? M Я с с 0 н О е количество
7 Обильный, плодовых тел массовое
КОЛИЧЕСТЛО
8, Обильный плодовых тел МВссоВое кох?ичестно
9 Средний, плодовых тел кассовое
КОЛИЧЕСТВО
> > СреДНИ>. плОДО??ых тел нет
31,0
30,7
30,6
Таблица 3
Влияние источников углерода на развитие
Ре??дс 1 (> 1??Я(Q(> ?III 1cuj,QttJIII РК= t 2 1
-.к: с : .. ° . тОчники . Рост мнпелия углерода довых тел (ПЮКОЗЯ.>О?щьнцй .- ?>лодовых TPJI мЯ(.". совое количество
СЛ86blA(, плоцовых тел мало
32,6
309 l
Та блица 4
Влияние источ??и?<ов Язота НЯ развитие штамма
Реп ?c1l1 1UUI 1> ег(»1cukBtutl> l К- (. >:. 22".2>? С
РОст мицелин и Обр>азование
Вес сухого
HH?JeJlHßу МГ
ИСТОЧНИКИ азота плодовых тел
Средний ?tлодовых TPJ? массо-. вое количество
Слабый, плодоных тел мало
Обильь?ь?й. плодовых тел мас-" совое количество
Обильный,, плодовых тел маСсоное количество
Грабь?й„ плодовых тел иет
Слабь и ппОДОвых тел нет
32 8
30,6 "
28,0
Азотнокислый аммоний
Азотнокисль.й натрий
Азотнокисль?й висмут
Хлористь?й аммончй
Тиомочевикя
ИОЧЕНИНЯ и образование пло- Вес сухого мицелия, мг (",,пабый плопонь?>? I ел;(Яло
Об>ильпый плодовых тел массоГОЕ КОЛИЧЕСТНО
l476891!
Таблица 5
Защитное действие гриба Penicillium vermiculatum PK- 1 от поражения белой и серой гнилями при нанесении его на корзинки
Процент тгоражения
Варианты опыта
Общее количество опыт ных растений белой серой гнилью
Опрыскивание суспензией гриба
Опудривание порошком гриба
Контроль (опрыскивание водой) 40
26,6
100
100
Общее количеВсхожесть, Ж
Варианты опыта ство растений
Penicillium vermiculaCum PK-1
a) сухое опудривание б) с увлажнением
Эталон: Coniothyrium minitems. (молдавский штамм) а) сухое опудриваиие б) с увлажнением
Контроль с внесением инфекции без применения гриба-антагониста
Контроль без внесения инфекции
41„7
91,7
48
25,0
66,7
48
4,2
100
48
Таблица 7
Влияние опудривания семян подсолнечника порошком на основе гриба Penicillium
vermicu1atum PK-1 на поражение белой гнилью
Поражено белой гнилью, прикорневой формой, Ж
Варианты опыта
Всхожесть, Ю Ю «»
Penicillium vermiculatum РК-1 78,3
Canicthyrium minitans (молдавский штамм) . 76,8
Контроль без внесения инфекции 82,5
Контроль с внесением инфекции 65,1
< ФЛ и Ы
0,5
0,9
1,9
11 8
Таблица б
Влияние опудривания семян подсолнечника порошком на основе гриба Penicillium vermiculatum
РК"1 на поражение белой гнилью
