Способ выделения иерсиний

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике иерсиний. Цель изобретения - повышение чувствительности способа, а также его ускорение. Исследуемый материал засевают в жидкую среду накопления - фосфатно - буферный раствор PH 7,2-7,4, содержащий 0,2% бентонита, при объемном соотношении исследуемого материала и полученной среды 1:1. Посевы выдерживают 18-20 ч при 25-29°С. Перед посевом на твердые питательные среды первичный посев встряхивают. Иерсинии растут на среде практически в чистой культуре. Изолированные культуры ижентифицируют по биохимическим и серологическим тестам. Способ позволяет ускорить время в 7,5-14,5 раз, чувствительность повышается в 3,7 раз. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБ ЛИК (51)5 С 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦ7ИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4432081/30-13 (22) 1 5.04.88 (46) 15.08.90. ? .юл. ¹ 30 (71) Владивостокский научно-исследовательский институт эпидемиологии и, мик р об иолог ии СО ANH СССР (72) З,В.Пручкина, Г.П.Сомов и Л.С..Бузолева (53) 57. б.8. 093. 1 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 1213070, кл. С 12 g 1/04, 1984.

Этнология, эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика иерсиниоза человека. Методические рекомендации, М. 1985. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЕРСИНИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике иерсиний. Цель изоб-

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к . диагностике иерсиний.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа, а также его ускорение.

Способ осуществляется следующим образом.

Для получения твердофеэной бентонитовой среды накопления 200 мг бентонита растирают в ступке с небольyaw количеством (10 мл) фосфатнобуферного раствора (рН 7,2 — 7,4), затем суспендируют в 90 мл этого же раствора. Полученную суспензию ство рилизуют в течение 1 ч при 120 С под давлением 1 — 1,5 атм. Исследуемый материал вносят в пробирки с

„„SU„„1585335 . А 1 ретения — повышение чувствительности способа, а также его ускорение.

Исследуемый материал засевают в жидкую среду накопления — фосфатнобуферный раствор рН 7,2-7,4, содержащий 0,27. бентонита, при объемном соотношении исследуемого материала и полученной среды 1;1. Посевы выдерживают 18-20 ч при 25-29 С, Перед посевом на твердые питательные среды первичный посев встряхивают . Иерсинии растут на среде практически в чистой культуре. Изолированные культуры идентифицируют по биохимическим и серологическим тестам. Способ позволяет ускорить время в 7,5-14,5 раз, чувствительность повышается в 3,7 раз. 1 з.п. ф-лы, 1 табл. приготовленной средой накопления в соотношении 1:1 (объеме 3 — - 5 мл), и помещают в термостат на 18 — 20 ч при 25 — 29 С. По истечении этого времени осадок в пробирках интенсивно взбалтывают. Бактериологической петлей забирают для исследования материал, содержащий взвешенные частицы бентонита. С целью подавления роста сопутствующей микрофлоры, ос-новываясь на относительной резистентности иерсиний к слабьи растворам щелочей, исследуемый материал обраба-тывают 0,5Х-ньи раствором КОН в лунках полистироловых пластин (в объемном соотношении 1:5) в течение 1

2 мин, затем производят посев штрихом с двумя-тремя отрывами петли на

l 585335 дифференциально-диагностическую среду Серова. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 25 - 29 С в течение 18 — 20 ч. Изоляция иерсиний с чашек упрощена благодаря тому, что растут они на среде практически в чистой культуре. Изолированные культуры иерсиний идентифицируют по биохимическим и серологическим тестам.

Пример ° . Исследуемый материал от человека (кал, моча, желчь и т.д.) или смывы с объектов внешней среды вносят в пробирки со средой в объемном соотношении I:1 и помещают в термостат при 25 — 29 С. Через о

18 — 20 ч инкубирования содержимое п ро б ирок инте нс ив но в с тря хив ают, бактериологической петлей забирают суспензию, содержащую взвешенные час- 20 тицы бентонита, переносят ее в лунки полис тироловых пластин, где обрабатывают 0,5%-ным раствором К0Н (в соотношении 1: 5) в течение 1 - 2 мин.

Затем производят посев штрихом с дву- 25 мя — тремя отрывами на дифференциально-диагностическую среду Серова. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 25 — 29 C в течение 18 — 20 ч.

Изолированные культуры иерсиний идентифицируют.общепринятьий биохимическими и серологическими тестами.

Среду накопления готовят предварительно следующим образом. 200 мл бентонита (оптимальная величина) растирают в ступке с небольшим количеством фосфатно-буферного раствора (рН 7,2—

- 7, 4), затем объем раствора доводят до

100 мл. Полученную суспензию стерилизуют в течение 1 ч при 120 С под даво лением 1 — 1,5 атм .

Среднее количество клеток иерсиний в 1 мл среды накопления после подращивания в течение 18 — 20 ч 530, по прототипу 16. Результаты испытаний способа представлены в таблице.

Результаты исследОвания показывают, что способ в 3,7 раза чувствительнее прототипа,, так как его использование позволяет выделить 146 штаммов иерсиний, в то время как по способу-прототипу изолировано только 39 штаммов в этом же материале.

Таким образом, эффективность предлагаемого способа в сравнении со способом-прототипом состоит в повышении его чувствительности в 3,7 раза и уменьшении. длительности исследования за счет сокращения времени накопления бактерий в 7-28 раз.

Формула изобретения

I. Способ выделения иерсиний путем первичного посева исследуемого материала в фосфатно-буферный раствор рН 7,.2-7,4, инкубирования посевов с последующим пересевом на плотные питательные среды и идентификацией выделенных культур, о т л ич ающийс я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, первичный посев осуществляют в фосфатно-буферный раствор, содержащий бентонит в количестве 0,2% на объем раствора, при объемном соотношении исследуемого материала и полученной. среды 1:1.

2. Способ по и. I, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, инкубирование посевов проводят при 25-29 С в течение 1820 ч.

1585335

Исследуемый материал

Выделено культур

В том числе способами

Всего предлагаемьм известпредлагаемьм и из» вестньм

Материал от людей (305) 46

37 абс, число

80,43

10,86

100

8,69

18 абс. число

81,82

) 00

13, 63

4,54

3) 91

130 абс. число

70,00

6,15

23,84

100

Всего (1738) 13

146

198 абс. число

73,14

6,57

19,69

100

Редактор Н. Киштулинец

Заказ 2304 Тираж 486 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по.изобретениям и,открытиям при ГКНТ СССР

1!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина,101

Материал от животных грызунов (78) Смывы с объектов окружающей среды (1355) Составитель А. Завадская

Техред J).Ñeðäþêîâà Корректор M. Шароши