Вакцина против оспы овец

 

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и представляет лиофилизированную вирусвакцину из аттенуированного штамма вируса оспы овец. Целью изобретения является повышение иммуногенной активности и упрощение изготовления. Для этого вакцина содержит вирусный тканевый фильтрат штамма вируса оспы овец ВГНКИ 6 с биологической активностью вируса 4,0-6,5 lg ИД_50/0,2мл и стабилизатор в соотношении 40-60/40 - 60. Штамм вируса оспы овец ВГНКИ 6 адаптирован к подкожной клетчатке овец. В качестве стабилизатора используют обрат молока или желатиносахарозную среду. Вакцина безвредна для овец при накожном, внутрикожном, подкожном, внутримышечном, интраназальном и внутривенном введении, обладает высокой иммуногенной активностью. Продолжительность иммунитета 18 и более месяцев. 2 табл.

Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и представляет лиофилизированную вирусвакцину из аттенуированного штамма вируса оспы овец. Целью изобретения является повышение иммуногенной активности и упрощение изготовления. Для этого вакцина против оспы овец содержит вирусный материал аттенуированного штамма Sheep capripoxvirus ВГНКИ 6, репродукцированный в подкожной N клетчатке овец, с титром биологической активности 4,0-6,5 lg ИД _50/0,2мл и стабилизатор при следующем соотношении компонентов, %: Вирусный материал штамма вируса оспы овец с титром 4,0-6,51 lg ИД_50/0,2мл 40-60 Стабилизатор 40-60 В качестве стабилизатора используют обрат молока или смесь сахарозы 7,5%, желатина 1,5% и агара 0,2% в дистиллированной воде. Аттенуированный штамм Sheep capripoxvirus, используемый для изготовления вакцины против оспы овец, депонирован в коллекции вирусов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов, имеет регистрационный N 6 и обозначен С 113/86. Штамм вируса оспы овец ВГНКИ N 6 получен путем многократного пассирования в подкожной клетчатке овец исходного вирулентного штамма вируса, выделенного от больной оспой овцы. П р и м е р 1. Штамм вируса оспы овец ВГНКИ N 6 характеризуется следующими признаками и свойствами: хорошо размножается в коже и подкожной клетчатке овец; в культуре клеток не размножается. Безвреден для овец при подкожном, внутрикожном, внутримышечном и интраназальном введении, при контакте не передается от вакцинированных к чувствительным животным, обладает иммуногенными свойствами при указанных способах введения. Штамм не обладает патогенными свойствами для лабораторных животных (кроликов, морских свинок, белых мышей). Штамм ВГНКИ N 6 при внутрикожном и подкожном введении овцам вызывает образование небольшой пустулы в месте введения, при внутримышечном, интраназальном и внутривенном заражении клинических проявлений оспы у животных не вызывает. Штамм стерилен в отношении грибковой и микробной микрофлоры, имеет высокую инфекционную активность 10^6,5 ИД_50/0,2мл. Штамм ВГНКИ N 6 способен вызывать местную реакцию у овец в виде папул и пустул размером до 2 см при введении проколом ушной раковины у четырех из шести привитых, восприимчивых к оспе овец. При появлении кожной реакции на внутрикожное введение вируса иммунитет формируется у всех привитых овец. При внутримышечном введении иммунитет формируется у всех овец, привитых в дозах 1,5; 15 и 150 ИД₅₀. П р и м е р 2. Изготовление вакцины для профилактики оспы овец на основе штамма вируса оспы овец ВГНКИ N 6. Вирус выращивают в подкожной клетчатке высокочувствительных к оспе овец мериносовых пород 18-месячного возраста по методу Борреля. Для заражения овец используют матриксный штамм ВГНКИ N 6 вируса оспы овец, полученный в результате двукратного подкожного пассирования вируса предыдущего внутрикожного пассажа на овце, вирусный материал вводят подкожно в объеме 1 л. В подкожной клетчатке зараженных таким образом овец происходит размножение вируса, при этом температура животных постепенно повышается. На 7-10 сутки после заражения, в первый день начала снижения температуры, животных обескровливают и проводят съем отечной ткани вместе с экссудатом. От одной овцы получают в среднем 1 кг вируссодержащей ткани. Полученную вируссодержащую ткань гомогенизируют, разводят стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:1, фильтруют и используют для изготовления вакцины против оспы овец. Для этого фильтрат, содержащий вирус оспы овец, штамм ВГНКИ N 6 с титром вируса 4,0-6,5 lg ИД_50/0,2мл, смешивают со стабилизатором, в качестве которого применяют обрат молока или желатиносахарозный стабилизатор. Полученная вакцина против оспы имеет следующий компонентный состав, %: П р и м е р 3. Изучение эффективности вакцины против оспы овец из штамма ВГНКИ N 6. 24 овцы в возрасте 6 мес иммунизируют вакциной против оспы овец из штамма ВГНКИ N 6, содержащей 60% вирусного фильтрата штамма с титром 4,0 lg ИД _50/0,2мл и 40% обрата молока. Препарат вводят однократно в дозе 100 ИД_50/0,015мл внутрикожно в объеме 0,015 мл. Через 7 дней у всех животных в месте введения вакцины образовывается папула, переходящая к 10 дню в пустулу и к 15 дню - в корку. Через 24 дня в месте прививки наблюдают небольшой рубец. Эффективность вакцины оценивают по устойчивости вакцинированных животных к контрольному заражению. Для этого через 15 дней, 6, 8, 12 и 18 мес овец заражают вирулентным штаммом "Монгольский" вируса оспы овец. Через 15 дней и 6 мес вирус вводят в подхвостовую складку в дозе 10000 ИД_50/0,02мл, а через 8, 12 и 18 мес иммунизированных животных заражают дозами вируса 10^-1 - 10^-6 ИД_50/0,2мл. Наблюдения показывают, что во всех случаях вакцинированные овцы устойчивы к контрольному заражению вирусом в дозах, равных 200, 10000 и от 10^4,5 до 10^6,5 ИД₅₀. Контрольные овцы заболевают с проявлением характерной оспенной реакции. П р и м е р 4. Проведены испытания вакцины, содержащей, %: Вируссодержащий материал штамма вируса оспы овец ВГНКИ N 6 с
титром вируса 5,0 lg ИД_50/0,2мл 50
Желатиносахарозный стабилизатор 50
Вакцину вводят внутрикожно, однократно в дозе 100 ИД_{50/0,15 мл} десяти овцам. У всех вакцинированных животных в месте прививки формируется папула, переходящая в пустулу и корку. Все привитые овцы устойчивы к последующему контрольному заражению 10000 ИД_50/0,2мл вирулентного вируса оспы овец. П р и м е р 5. Проведены испытания вакцины против оспы овец, имеющей следующий компонентный состав, %:
Вируссодержащий
материал штамма
ВГНКИ N 6 с титром
инфекционной
активности 6,0 lg ИД_50/0,2мл 40
Сахарозо-желатиновый стабилизатор 60
Препарат вводят, однократно, внутрикожно в дозе 100 ИД _{50/0,015 мл} 10 овцам. У 100% вакцинированных животных в месте прививки формируется папула, переходящая в пустулу и корку. Все овцы устойчивы к контрольному заражению 10000 ИД_50/0,2мл внутривирулентного вируса. П р и м е р 6. Проведены испытания вакцины против оспы овец, имеющей следующий компонентный состав, %:
Вируссодержащий
материал штамма
ВГНКИ N 6 с титром
инфекционной
активности 6,5 lg ИД_50/0,2мл 40
Стабилизатор - обрат молока 60
Препарат вводят однократно внутрикожно в дозе 100 ИД_{50/0,015 мл} 10 овцам. У всех вакцинированных животных в месте прививки формируется папула, переходящая в пустулу и корку. Все овцы устойчивы к контрольному заражению 10000 ИД_{50/0,2 мл} вирулентного вируса. П р и м е р 7. Для проверки иммуногенности вакцины против оспы овец из штамма ВГНКИ N 6 изготовленный по примеру 3 препарат вводят животным внутримышечно в разных дозах. Через 15 дней после вакцинации подопытных овец заражают введением 1000 ИД_{50/0,2 мл} вирулентного штамма вируса оспы овец и еще раз через 10 дней определяют устойчивость животных к заражению. Данные приведены в табл. 1. Результаты проверки показывают, что овцы, вакцинированные внутримышечным введением вакцины в дозе 1,5-1500 ИД_50/мл, устойчивы к контрольному заражению вирулентным штаммом, что свидетельствует о высокой иммуногенной активности предложенной вакцины. Рассчитанная по методу Рида и Менча минимальная иммунизирующая доза вакцины составляет 3,1 ИД_{50/0,015 мл} при внутрикожной иммунизации овец и 1,5 ИД_50/мл при внутримышечной. П р и м е р 8. Для испытания вакцины против оспы овец из штамма ВГНКИ N 6 на безвредность опытным животным вводят препарат, изготовленный по примеру 3 внутрикожно, внутримышечно, интраназально, подкожно и внутривенно, после чего за ними проводят наблюдение в течение 27 дней. О результатах испытания судят по местной реакции на 10 день (пик оспенной реакции) введения вакцины и по способности ее вызывать генерализованную форму оспы в течение всего периода наблюдения. Данные приведены в табл. 2. При всех испытанных способах введения вакцина в тысячекратной прививной дозе не вызывает генерализованной формы оспенного процесса, а при внутривенном, интраназальном и внутримышечном введении не вызывает видимой оспенной реакции, но создает иммунитет, т.е. вакцина безвредна для овец.

Формула изобретения

ВАКЦИНА ПРОТИВ ОСПЫ ОВЕЦ, включающая вируссодержащий материал аттенуированного штамма вируса оспы и стабилизатор, отличающаяся тем, что, с целью повышения иммуногенной активности и упрощения изготовления, в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вирусный тканевой фильтрат штамма Sheep capripoxvirus ВГНКИ N 6 с биологической активностью lg 4,0 - 6,5 ИД_{50/0,2 мл} при следующем соотношении компонентов, об.%:
Вирусный тканевой фильтрат штамма Sheep capripoxvirus ВГНКИ N 6 с биологической активностью lg 4,0 - 6,5 ИД_{50/0,2 мл} - 40 - 60
Стабилизатор - 60 - 40

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 25.03.2004

Извещение опубликовано: 10.12.2004        БИ: 34/2004

---