Способ моделирования опухоли легкого и устройство для его осуществления

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51)5 G 09 В 23/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ll0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4618836/14 (22) 12.12.88 (46) 15.02 ° 91, Бюл. 1" 6 (71) Казахский научно-исследоггательский институт онкологии и радиологии (72) А.А. Бейсебаев, В.К. Красиоштанов, С.Ю, Ножин и А.К. Едыгенова (53) 612.475(088,8) (56) Фонбрюн Il, Методы микроманипулирования. 1951, Степаньян JI,È. и Вахтин Ю,Б.

Отбор на аффини1ет к легочной ткани в популяции. экспериментальных опухолей. - Цитология, 1980, с. 198-204. (54 ) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОПУХ011И

ЛЕГКОГО И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

1 57) Изобретение относится к медицине и может быть применено при моделировании опухолей. Цель изобретения повышение избирательности и эг1гфективности образования метастатических опухолей, повышение производительности устройства и снижение понрежде.вв гя.я7ф А1

2 ний опухолевых клеток. Цель достигается инъг кцией животному внутривенно единичных опухолевых клеток в дозе

5 к.геток и более. В качестве транспортируемого материала используют клетки аффинитетного штамма, который благодаря своей тропности к легочной ткани с высокой ггероятностыо образу. т метггстазы чолько в ггег ком, а нс и каком-либо другом органе животного, Изоляция и инъекция опухолевых клеток осуществляется устройством, представляющим собой стеклянный капилляр Э, соединенный переходниками 5 и 6 одним концом с поршневой системой 2, другим — с инъекционной иглой 4 шприца 1. Именно использование метастазирующего в легкие перевиваемого аффинитетного штамма в сочетании с предлагаемым устройством для изоляции и инъекции единичных клеток позволяет с высокой эффективностью получать отдельные метастазы в легких лабораторных животных. 1 ил.

1628076

Нзобрететттте относится к биологии и медицине, в частности, к экспериментальной онкологии, и может 6b11ь применено при моделировании метастазов легких у лабораторных животных.

Цель изобретения — повышение избирательности и эффективносттт образоваштя одиночных метасстатчческих опухолей, а также повышение производительности и снижение повреждений едшгичных опухолевых клеток.

На чертеже изображено устройство для изоляции и инъекции отдельных клеток.

15

Способ осуществляется следующим образом, %твотттьтт-реципиентам трансплантируют аффинитетттетй к лат ким переви- 20 ваемый опухолевый штамм путем внутривенной шгьекции одиночных опухолевых клеток в дозе 5 клеток и более. Вводимые через вену единичные опухолевые клетктт, попадая с током крови в боль- 25 шой круг кровообращения и далее в капилляры легочной ткани, закрепляются в легком благодаря тропности в этой ткани и дают начало отдельным опухолевым метастазам, которые затем могут быть удалены хирургическим путем.

Дттч,осутяествления изоляции отдельных клеток применены взаимозаменяемые съемные кани.тляры, причем для введения опухолевых клеток животно;ту-реципиенту кап;ттчяр с изолированными единичньтлттт клетками присоединяют с одной стороны через селиконовый и стальной переходттики к шгьекционной игле шприца, а с другой — посредством гибкого 40 капилляра к поршневой системе, что обеспечивает достаточную жесткость конструкции устройства и дает возможность осуществлять прокол кожного покрова и ввесзи отдельные опухолевые т клетки в любой участок тела животному-реципиенту, в том числе и в хвостовую вену.

Устройство содержттт поршневые систеттьт 1,2 и съемный взаимозаменяемый стеклтттт,тый капттлляр 3. Одна из поршневьтх с:fc"тем 1 представляет собой инсу.тттт ттоттттй шттрттц емкостью 1 мл с насажеlllloff на ттего глазной итгьекционной иглои 4. Стекляттньш капилляр 3 с од55 ной стороны посредством гибкого, например селиконового„ тт жесткого, например стального переходттттков 5,6 соединен с и;гьекционной иглой 4 шприца, с другой — через гибкий капилляр

7 с поршневой системой 2, Стекляштый капилляр благодаря своей прозрачности и малому поперечному диаметру (1-2 мм) позволяет визуаль-но наблюдать с помощью стереоскопического микроскопа непоследовательное проникновение в него отдельных клеток. Клетки заходят в капилляр вместе с током жидкости под действием капиллярных сил или же за счет разрежения, создаваемого поршневой системой 2. Регулируя давление в поршнечой системе 2, можно выделить любое нужное количество клеток. Кроме того, визуальный контроль позволяет выбрать неповреждеттньте клетки, что значительно увеличивает вероятность образования опухолевых узлов и повышает эффективность метода.

Устройство функционирует ледующим образом.

Перед инъекцией капилляр с выделенными клетками вставляют в переходник 5. При увеличении давления в поршневой системе 2 опухолевые клетки вместе с питательной средой попадают через переходники 5, 6 и инъекционную иглу 4 в организм животного.

Инсулиновый шприц в момент инъекции играет роль держателя капилляра и иньекционной иглы, После введения клеток с его помощью промывается игла и переходник от возможного попадания в них сгустков крови и пузырьков воздуха, представляющих опасность для жизни животного.

Пример. Крысе вводят клетки перевиваемой рабдолтиосаркомьт PA-2.

У животного с выросшими в легких метастазами предварительно перевитой аффинитетной опухоли PA-2 сразу же после егo гибели (или забоя) извлекают легкие и вылущивают 20-30 опухолевых узлов. После кратковременной (12 мин ) механической гомогенизацитт в соаеео« буфере приготовляют слабую суспензию опухолевых клеток и под контролем микроскопа с помощью капилляров изолируют отдельные опухолевые клетки. Капилляр с выделенными клетками (по 5 клеток на капилляр) до трансплантации их животным находятся при пониженной температуре (на льду), что способствует сохранению жизнедеятельности этих клеток.

16280 76

<1«о р и у.и и и з о б р е т е ни я

1, Способ моделирования опухоли лег..ого путем в««утр11с«енного введения еди1«и 31<ых ollgxoлевых клеток зкспериразовпния одиночн,<х метастатических онухоле13,;11«ъе<3иряот онухолевые клетки орган<;тропно-метпстазирующего перенияпемогп IIIT;IMt1;3 я дозе 5 клеток и б<с<1е» °

?. Устрой«< ТНо для моделиро3«ания опухол11 31<.акогo, содер;;..;.щее стекляни при своем разм«<ожени«< брп уют отдельные опухоле вые узлы кло наивно гп происхождения (т.е. от одной единственной клетки). ным капилляром.

Составитель А. Лычкова

Редактор М. Келемеш Техред 1,0лийньц< Корректор М. Кучерявая

Заказ 342 Тираж 283 — — -Подписное

ВНИИПИ Государственного комитата по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Непосредственно перед инъекцией капилляр с клетками одним концом соединяют с инсулиновым шприцом, другим— через гибкую тонкую трубку с поршневой системой. И уже этим устройством осуществляют иньекцию клеток, Цi<я чего вводят инъекционную иглу в хвостовую вену животного и с помощью

20 мл шприца создают давление в системе. Под действием повышенного давления клетки вместе с соловым бу<«3ером попадают через инъe

Так как клетки перевиваемогo штамма PA-2 обладают аффинитетом (ср<>дством, тропностью) к легочной Ti

Опыты показали, что при внутривенном введении клеток PA-2 в дозс 50, 25,10 клеток у 80-907 живот1г.х в лег35 ких возникают опухолевые узлы, число которых примерно соответствует числу введенных клеток, т.е, при инъекции 50 клеток в легких крыс образу- 40 ется в среднем 43-48 узлов, при зведении 25 клеток — 20-23 узла, д 3за 10 клеток дает 5-7 узлов на легкое, а при введении 5 клеток у 70-807 животных в легких возникает по 2-3 45 узла, и даже доза 3 клетки при 6070Х прививаемости дает по 1-2 удара на животное.

<<3

Таким образом, примс некие аффисгитетного к легким перевиваемого ь«там<1а со способностью его клеток избирательно клонироваться в легочной ткани совместно с устройством, позволяющим одновременно как изолир<«вать под визуальным конгролем отдельные опухолевые клетки, так и шгьецировать зги же клетки животному-ренипиенту, дает возможноеTE. с высокой эффективностью получить отдельные опухолевые метастазы н легочной ткани лабораторных жи<«тны х. В cEI<«I< очередь, рс ст метаста 3oH в виде огра«<чченнь<х, едини <ныл опухолевых узлов обеспечивает их оперзбельность, Trfll,Hñму жив<«THoMQ о т л и ч а юIII II и с я тс.м, :«то, с целью повышения и«б1<рательн сги и эффективности обHbIv. к п пили я р, одн11 . < концом соединенный через гибкую трубку с поршневой сис:емой, о т л и ч а ю щ е е с я тем,