Способ дифференциации bacillus аnтнrасis и bacillus cereus

 

изобретение относится к медицинской микробиологии, Цель изобретения - ускорение способа. Способ включает выращивание микробной массы на агаре Хоттингера, приготовление суспензии в концентрации 25«10 микробных клеток в 1 мл, внесение ее в реакционную смесь. По восстановлению 2,6-дихлорфенолиндофенола в присутствии яблочной кислоты определяют активность фермента малатдегидрогеназы спектрофотометрически и при ее значении от 0,036 до 0,0181 мкМ/мин/млрд дифференцируют В. anthracis, а при значении активности от 0, до 0,0005 мкМ/мин/млрд. - В. се reus. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТ ИЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1629З1 (рц С 12 Q 1/04 Д. РЦ1 !

tr (ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ мого раствора.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4658888/13 (22) 17.01.89 (46) 23.02.91 Бюл. К- 7 (71) Иркутский научно-исследователь— ский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (72) Е. В.Поликарпова (53) 5 76. 8. 093, 1 (088. 8) (56) Колесов С. Г. Сибирская язва. — М,: Колос, 1976, с. 36. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ SAC I LLUS

ANTHRAC l S И BAC I LI.US CEREUS (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретеI

Изобретение относится к медицинской микробиологии.

Цель изобретения — ускорение способа.

Пример. Исследуемый штамм выращивают на агаре Хоттингера (рН 7,2) в течение 18 ч при 37 С. Клетки двукратно отмывают физиологическим раствором и готовят суспензию вегетативных клеток на К Na-фосфатном буфере

1/15 M (рН 7,2), Для определения ферментативной активности используют следукщие соединения, мп: фосфатный буфер (рН 7,2) 2,3; 0,05Х-ный Раствор хлористого магния О, 2; 0,05Хный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола (2,6-ДХФИФ) О, 1; 25 10 иикр. кле9 ток/ип суспензии клеток исследуемого штамма 0,2; О,! M раствор субстрата (яблочная кислота) О, 2, которые добавляют в одну пробирку, 2 ния — ускорение способа. Способ включает выращивание микробной массы на агаре Хоттингера, приготовление суспензии в концентрации 25 ° 10 микробных клеток в l ип, внесение ее в реакционную смесь. По восстановлению

2,6-дихлорфенолиндофенола в присутствии яблочной кислоты определяют активность фермента малатдегидрогенаэы спектрофотометрически и при ее значении от 0,036 до 0,0181 мкИ/MHH/млрд дифференцируют В. ап th,raci s, а при значении активности от О, до

О, 0005 мкМ/мин/млрд. - В, ce re us .

1 табл, Измерение оптической плотности проводят в кювете спектрофотометра после внесения в нее 3 ип исследуеУчет реакции ведут в течение

5 мин. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 600 нм против контрольной пробы, содержащей 0,2 мп дистиллированной воды. Ферментативную активность выражают в мкмолях восстановленного 2,6-ДХФИФ sa 1 мин на 1 млрд. клеток. Для пересчета полученных данных в эксперименте применяют коэффициент молярной экстинкции для 2,6-ДХФИФ - 21 10 CM 1ч

Определение активности малатдегидрогеназы (МДГ) проводят у трех вакцинных штаммов В. anthraci СТИ-I, 34F<, вторая вакцина Ценковского, у 26 ви1629317 руд ентных штаммов возбудителя сибирской язвы, выделенных в различных регионах страны и от разных объектов (люди, животные, почва), а также у 11 музейных штаммов В, сеreus, Показатели активности МДГ у В. cereus и В. anthraci s приведены в таблице, Использование предлагаемого способа позволяет сократить время анализа до 5 мин (1-3 сут - в известном способе) при определении лецитиназной активности, а также дать количественную оценку активности МДГ, Фер мент ативная активность (мкмопь за 1 мин. на 1 млрд микробных кле ток) Хар акт ери стика штаммов

Типичный

09 000+0

О, 0005+0

0,0042+0,0003

Вакцинный

Ор0089+0,0016

Сп аб овирул ен тный

0,0095+0,0016.

0,0181+0,0031

Высоковирулентный

Составитель Г.Смирнова

Техред A,Êðàâ÷óê Корректор С. Черни, Редактор Н. Гунько

- еказ 410 Тираж 358 Подписное

ВНИИПИ Государственного комигета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,10 .

В. cereus 504

В. cereus 687

В. anthracfs СТИ-1

В.anthraс1s 34Гд

В. anthracis 47

В. an thraci s 810

Формула изобретения

Способ дифференциации Bac i l l us anthraci s и Baci11us cereus путем выра5 щивания исследуемых культур на агаре

Хоттингера с последукицим определением ферментативной активности, о r л ич а ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, из агаровой культуры готовят суспензию с концентрацией 25 ° 1О микр,клеток/мп и определя ет мал атде гидро ге наз ную акти вност ь и при ее значении от 0,0036 до

0,0181 мкМ/мин/млрд дифференцируют

Bacillus anthracis, а при значении

o T 0 до О, 0005 мкМ/мин/млрд дифферен» цируют Вас111us cereus.