Способ моделирования инфекционного процесса после трансплантации

 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и трансплантологии. Цель - повышение воспроизводимости способа . Бактериальный агент вводят непосредственно в трансплантат в степени 10 -107 клеток и через 2-3 ч трансплантируют сосудистый трансплантат экспериментальному животному Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистом трансплантате 30% по сравнению с прототипом .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sr>s G 09 В 23/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ. К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 44.7216.1 /14 (22) 14.06.88 (46) 15.04.91. Бюл. М 14 (71) Институт сердечно-сосудистой хирургии им, А. Н. Бакулева (72) И. И. Затевахин, Г. В. Говорунов, Д. С, Добронравов, С. Я. Махмудов и В, Е.

Комраков . (53) 615,475(088.8) (56) Scrota А. I. et aI.-Surgery, 1981, v, 90, N. 11, р. 35-40. Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и трансплантологии.

Цель изобретения — повышение воспро-. изводимости способа.

Способ осуществляют следующим обра. зом.

За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого стафилококка (штамм 489) суспендируют. в 5 мл физиологического раствора, инкубируют при 37 С в течение 3 ч на шутеле.

Выбор штамма 489 условен, так как может быть использован и любой другой другой штамм с высокой степенью патогенности. Однако на протяжении всех этапов экспериметальных исследований необходимо использовать определенный штамм для чистоты эксперимента.

После инкубации центрифугируют в течение 10 мин при 7000 об/мин, затем надосадочную жидкость сливают, осадок ресуспендируют в 5 мл стерильного физиологического раствора и вновь центрифугируют

„„Я „„1642499 А1 (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к.хирургии и трансплантологии.

Цель — повышение воспроизводимости способа. Бактериальный агент вводят непосредственно в трансплантат в степени

10 — 10 клеток и через 2 — 3 ч трансплантиру7 ют сосудистый трансплантат экспериментальному животному, Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистом трансплантате 307 по сравнению с прототипом.

10 мин при 7000 об/мин для получения высокой концентрации. Степень мутности со ставляет 10" клеток (по стандарту мутности).

В пробирку с 5 мл данной культуры помещают синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см и инкубируют О его в течение суток при 4 С (в холодильни-. фь ке), Диаметр трансплантата подбирают в соответствии с диаметром аорты экспери- ф ментального животного (0,6 — 1 см). О

3а 2 — 3 ч до операции и ротез перемещают . в стеоильную чашку Петри до полного высйхания при комнатной температуре.

Операцию проводят в условиях стерильной операционной под интубационным наркозом после премедикации дроперидолом и калипсолом, иньецированными внутримышечно в одном шприце за 30 мин до операции, для интубации используют 2 g>-ный раствор гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, который иньецируют внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под

1642499 контролем роговичного рефлекса, После интубации наркоз поддерживают внутривенным капельным введением фентанила по 2

r через 20-30 мин на физиологическом растворе (200.мл}

После обработки операционного поля иодом производят разрез по средней линии живота, вскрытие брюшной полости и обкладывание ее пеленками, выделяют брюшную аорту после рассечения париентальной 10 брюшины, аорту пережимают на двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий и выше бифуркации аорты. После пересечения аорты производят ее протезирование синтетическим гофрированным протезом (длина 3 см, диаметр соответствует диаметру аорты), поскольку протез был заранее инфицирован патогенной культурой, производят отграничение свободной брюшной

20 полости и забрюшинной клетчатки стерильПосле тщательного гемостаза ушивают брюшину непрерывным кетгутовым швом.

Рану, передней брюшной стенки наглухо ушивают послойно шелковыми швами.

Пример 1, Беспородная собака муж30 ского пола весом 16 кг.

За сутки до операции суточную патогенную культуру золотистого. стафилококка (штамм 489) суспендировали в 5 мл физиологического раствора, инкубировали при

37 С в течение 3 ч в шутеле. Затем центрифугировали в течение 10 мин при 7000 об/млн надосадочную жидкость сливали, осадок ресуспендировали в 5 мл . стерильного фи40 зиологического раствора и вновь центрифугировали 10 мин при 7000 об./мин, для получения высокой концентрации. Степень мутности в данном случае составила 10 клеток (по стандарту мутности)..

В пробирку с 5 мл данной культуры помещали синтетический сосудистый гофрированный протез длиной 3 см и диаметром

1 см и инкубировали его в течение суток при

40С (в холодильнике).

После инкубации протез перемещали в стерильную чашку Петри и после полного

° высыхания его через 2 ч начинали операцию.

Операцию проводили в условиях стерильной операционной под интубационным наркозом, за 30 мин до операции произвели премедикацию дроперидолом и калипсоRoM по 3 г, инъецированными внутримышечно в одном шприце. Для полного расслабления дыхательной мускулатуры в

55 ными пеленками для предотвращения распространения бактериального агента.

После окончания протезирования снимают . дистальный, а затем проксимальный зажимы с аорты и восстанавливают кроваток. 25 момент интубации использовали 2%-ный раствор. гексенала, разведенный 50 мл физиологического раствора, которым инъецировали внутривенно струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под контролем роговичного рефлекса. После интубации наркоз поддерживали внутривенным капельным введением фентанила по

2 г через 20 — 30 мин (в зависимости от роговичного рефлекса) на 200 мл физиологического раствора.

После интубации и подключения интубационной трубки к аппарату искусственной вентиляции легких брили переднюю брюшную стенку лежащего на спине и фиксированного за лапы животного. Операционное поле на всем протяжении передней брюшной стенки обрабатывали. йодом, затем производили разрез по средней линии живота на. протяжении 25 см, . вскрывали брюшную полость и обкладывали ее пеленками. После рассечения париентальной брюшины выделяли брюшную аорту (инфраренальный отдел). Аорту пережимали на. двух зажимах, наложенных ниже почечных артерий (на 0.5 см) и выше бифуркации аорты на 1 см, после пересечения аорты производили ее протезирование синтетическим гофрированным протезом длиной 3 см, заранее инфицированным золотистым стафилококком со степенью 10 клеток. Диаметрыаорты и протеза одинаковы — 1 см. До протезирования аорты и начала манипулирования в брюшной полости инфицированным протезом обкладывали стерильными пеленками свободную брюшную полость и забрюшинную клетчатку. отграничив их тем самым от возможного инфицирования во время операции. После окончания протезирования снимали дистальный, а затем проксимальный зажимы и восстанавливали кроваток. Время пережатия аорты составило 24 мин, кровопотеря — около 60 мл. После тщательного гемостаза протез реперитонизировали, ушив брюшину непрерывным кетгутовым швом. Рану передней брюшной стенки ушили послойно наглухо шелковыми швами, Пробуждение собаки от наркоза наступило через 1 ч 40 мин.

Достоверность инфицирования трансплантата в зоне протезирования аорты была подтверждена сцинтиграфией с 99М Тс-лейкоцитами через 2 ч после операции (после, полного пробуждения животного). При

-сцинтиграфии протез четко визуализировался на персистеноскопе гамма-камеры, что свидетельствовало о миграции в зону протезирования меченых лейкоцитов, а значит, наличии s этой зоне инфекции. Контрольная сцинтиграфия через 8 сут после

1б42499 операции также подтвердила наличие инфекционного процесса в зоне протеза, так как инфицированный трансплантат четко визуализировался, Кроме того, полученные результаты подтверждены при аутопсии, проведенной на 11-е сутки после операции (в день смерти собаки). На аутапсии обнаружено около 900 мл крови в брюшной поласти вследствие прорезывания двух швов проксимального анастомоза и аррозионного кровотечения, что безусловно явилось результатом развития в зоне -реконструкции аорты инфекционного процесса. Кроме таго, бактериологическое исследование резе10 цированнаго so время аутопсии протеза идентифицировало рост патогенной. культуре золотистого стафилококка (штамм 489), что свидетельствует. о прогрессировании инфекционного процесса и достоверно подтверждает практическую значимость восп-. ный протез длиной 3 см, диаметром 0.9 см и инкубировали его в течение суток при 4ОС, (в холодильнике).

После инкубации протез перемещали в стерильную чашку Петри и после полного

40 высыхания его через 3 ч начали операцию

Операцию производили в стерильных условиях (как и во всех случаях) пад интубацианным наркозом, за 30 мин да операции производили премедикацию драпередалом и калипсалом па 3 r, иньецированными

50 внутримышечно в одном шприце. Для полного расслабления дыхательной мускулатуры в момент интубации использовали

2%-ный раствор гексенала, разведенный

50 мл физиологического раствора, который .55 иньецировали BH/jTpMBBHKo струйно через катетер в периферическую вену передней лапы под контролем роговичного рефлекса.

После интубации наркоз поддерживали внутривенным, капельным введением фенроизведеннай модели инфицированного трансплантата.

Пример 2. Беспородная собака,жен. ского пола массой 15,5 кг.3а сутки до операции суточную патаген- 25 :ную культуру золотистого стафилакакка (штамм 489).суспендировали в 5 мл. физиоло- . гического раствора, инкубировали при.37 С в течение 3 ч на шу1еле. Затем центрифугиро. вали в течение 10 мин при 7000 об)мин. На- 30 досадачную жидкость сливали, осадок ресуспейдировали 5 мл стерильного раствора и . вновь центрифугиравали 10 мин при

7000 об./мин. для получения высокой концентрации. Степень мутности в данном слу- 35 чае составила 10 клеток (no стандарту мутнастй).

В пробирку с данной культурой помещали синтетический сосудистый гофриравантанила по 2 r через 20-30 мин (в зависимости от роговичного рефлекса) на 200 мл физиологического раствора.

Укладывали собаку на операционный стол на спину и фиксировали к столу вытянутые лапы, Подключали к аппарату искусственной вентиляции .легких интубацианную трубку. Брили переднюю брюшную стенку, а затем обрабатывали йодом ее на всем протяжении. После обработки операционного поля производили разрез по средней линии живота на протяжении 25 см, вскрывали брюшную полость и обкладывали ее пеленками. После рассечения париетальной брюшины выделяли брюшную аорту (инфраренальный отдел).

После выделения аорты обкладывали свободную брюшную полость, а также забрюшинную область пеленками, отграничив от попадания инфекции. Аорту пережимали на двух. зажимах, наложенных ниже почечных артерий (на 0,5 см) и выше бифуркации аорты на 1 см. После пересечения аорты производили ее протезирование синтетическим гофрированным протезом длиной 3 см, диаметром 0,9 см (как и аорта), заранее инфи цираванным золотистым стафиликокком (штамм 489) со степенью 10 клеток, после .окончания протезирования снимали дистальный, а затем проксимальный зажимы и восстанавливали кровообращение. Время пережатия аорты составила 29 мин, кровопотеря — около 70 мл. После тщательного гемостаза протез реперитонизировали, ушив брюшину непрерывным кетгутовым .швом. Рану передней брюшной стенки уши- ли послайно наглухо шелковыми швами, пробуждение собаки ат наркоза наступило через 1 ч 55 мин.

Достоверность инфицирования трансплантата в зоне протезирования аорты была подтверждена сцинтиграфией с 99М Тс-лейкоцитами через 2,5 ч после операции(после полного пробуждения). При сцинтиграфии протез четко визуализировался на персистеноскопе гаммы-камеры, что свидетельствовало о миграции в зону инфекции меченых лейкоцитов. Собака умерла на 7-е сутки после операции от аррозианного кровотечения из зоны протезирования вследствие прорезывания 6 швов проксимального. анастомаза, что было выявлено при аутопсии. В брюшной полости было около 1 л крови. Бактериологическое исследование протеза идентифицировало рост культуры золотистого стафилококка (штамм 489).

Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели инфекционного процесса в сосудистом

1642499

Составитель А,Бобров

Редактор Л.Веселовская Техред М.Моргентал Корректор А.Обручар

Заказ 1150 Тираж 298 Подписное

ВНИИПИ Государственного ком тета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4(5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 трансплантате на 30 по сравнению с прототипом.

Формула изобретения

Способ моделирования инфекционного процесса после трансплантации путем введения экспериментальному животному патогенной культуры, отличающийся, тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа., бактериальный агент вводят непосредственно в трансплантат в степени

5 10 — 10 клеток и через 2-3 ч трансплантиру6 7 ют сосудистый трансплантат животному.