Способ прогнозирования течения рака ободочной кишки
ССЮЗ СОВЕТСКИХ
COUIW
РЕСПУБЛИК
А1,SU„„1644
yl)g G 01 N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ГЮ ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
К АВТОРСКОМ,Ф СВИД =ТЕЛЬС1 ВУ
1 (21) 4412755/14 (22) 15.04.88 (46) 23.04.91. Бюл, 0 15 (71) Научно-исследовательский институт онкологии им. проф. Н.Н,Петрова (72) Л.М.Берштейн, И.В.Правосудов и В.М.Дильман (53) 612.015(088.8) (56) Бассалык Л.С, и др. Прогностическое значение уровня рецепторов стероидных гормонов при раке толстой кишки. — Вопросы онкологии, 1987 т. 33э 5 9ь с. 43-46, (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВА%И ТЕЧЕНИЯ
РАКА ОБОДОЧНОЙ КИШКИ (57) Изобретение относится к медйци- . не, в частности к онкологии. Цель изобретения - повышение точности способа, Для этого ткань опухоли, полу-, ченной во время операции, гомогенизи-. руют 1:10 в 0,05.N трис-ЙС1 (рН 7,5) >
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии.
Цель изобретения - повышение точности способа.
Способ осуществляют следующим образом.
Ткань опухоли„ полученную во время операции, немедленно транспортируют на холоду в лабораторию и замораживают там в жидком азоте. 200 мг ткани гомогенизируют на холоду в 2 мл
0,05 М трис-НС1 буфера (рН 7;5) в системе стекло - тефлон, фильтруют через капрон, центрифугируют при
2200 g надосадочную жидкость декантируют, осадок суспендируют s упомя2 гомогенат центрифугируют при 2200 g, надосадочную жидкость отбрасывают, а осадок суспендируют в том же буфере.
Затем в полученном препарате определяют базальную и стимулированную глюкагоном активность аденилатциклазы (АЦ).Инкубационная смесь содержит
0,05 М трис-НС3. (рН 7,5), 2 мМ ЭПТА, 10 мМ кофеина, 10 мМ NgC1, 2 мМ
АТФ, 20 мМ креатинфосфата и 0,5мг/мл креатинфосфокиназы. Общий объем
200 мкл. Конечная концентрация глюкагона 2 ° 10 М, Активность аденилатциклазы выражают в пМ цАМФ ° мг бел-1 ка препарата - 20 мин инкубации
При увеличения стимулированной активности АЦ в 1,7 раза и более, от-, носительно базальной, прогнозируют благоприятное послеоперационное течение рака ободочной кишки. Точность способа составляет 907.. 2 табл. нутом буфере и используют полученный препарат (в количестве 100-150 мкг по белку) для определения баэальной и . Ф стимулированной активности аденилат- М .циклаэы (АЦ). Инкубационная среда для 4Р определения активности АЦ (общий объем 200 мкл) содержит 0„05 М трисHCl (рН 7,5), 2 мМ ЭДТА, 10 мМ кофеина, 10 мМ MgCly, 2 мМ АТФ, 20 мМ креатинфосфата и 0,5 мг/мл фосфокреатинкиназы. Гормоны вносят в объеме А
50 мкл. Вазоактивный интестинальный пептид (ВИП) используют в конечной
-7 концентрации 10 М, глюкагон - 2»
«10 М, пентагастрин - 5 > 10 М. Влияние В11П и глюкагона на АЦ оценивают
3 1644030 в присутствии ГТФ (10Ч: М) . Длительность инкубации составляет 20 мин, температура инкубации 37 С. Реакцию останавливают кипячением проб на водяной бане в течение 3 мин. Образующий5 ся в результате реакции цАМФ определяют с помощью радиоконкурентных (Англия) или радиоиммунологических (ЧССР) наборов. Активность АЦ выра- 1р жают в пМ цАМФ мг белка . 20 мин
При увеличении стимулированной активности АЦ в 1,7 раза и более, относительно базальной, прогнозируют благоприятное послеоперационное течение рака ободочной кишки, Суммарные данные по оценке стимуляции активности аденилатциклазы в опухолевой ткани ВИП и глюкагоном в сопоставлении с уровнем смертности больных представлены в табл. 1, Степень стимуляции акти ности аденил циклазы глюк гоном
Уровень летальности, X,при раке ободочной кишки
10,0+9,5 n-=10
38,5+13,5 п=13/Р 0,05
Таблица2
Гормоны, Ж
Стимуляция активности АЦ по отношению к базальной ак тивности фермента
ВИП тагастюкагон
44,8(39)
8,0(7)10,3(9)
11,5(8)
27,-6(24) С1, 25
1,25-1,5
1, 51-1, 7
1,71-2,0
>290
48,0(12)
20,0 (5)
12,0 (3)
20 0(5) 43,6(44)
12,9(13)
7,9(8)
18,8 (19)
16э8(17) П р и м е ч а н и е: В скобках — число случаев.
Распределение данных о степени стимуляции активности аденилатциклазы (АЦ) гастроинтестинальными гормонами в ткани опухолей толстой кишки человека дано в табл. 2.
Пример 1 ° Больная М., 66 от.
Диагноз: рак ободочной кишки, III стадия. Активность аденилатциклазы в опухолевой ткани, пМ цАМФ/мг белка/, /20 мин: базальная 12,5 после стимуляции глюкагоном 3.,1, коэффициент стимуляции 0,25 (т.е. меньше 1 7).
Исход — больная скончалась через
17 мес, после операции.
Пример 2. Больной Б.,62 r. а диагноз: рак ободочной кишки, III ст.
Произведена операция - левосторонняя гемиколэктомия. Активность аденилатциклазы в опухолевой ткани, пМ цАМФ/мг белка/20 мин: базальная
t2,9, после стимуляции глюкагоном
21,6; коэффициент стимуляции 1,7,Исl ход — больной жив (44 мес. после операции) .
Пример 3. Больная М., 60 лет,.
Диагноз: рак ободочной кишки, III ст. Произведена операция — левосторонняя гемиколэктомия. Активность аденилатциклазы: базальная 18,4, после стимуляции глюкагоном 39,0, коэффициент 2, 1 (т.е. больше 1,7).
Исход - больная жива (61 мес. после операции).
Таким образом, стимуляция активности аденилатцнклазы опухолевой ткани глюкагоном более, чем в 1,7 раза по сравнению с базальной активностью может свидетельствовать о по» тенциально благоприятном прогнозе.
Точность способа составляет 907..
Формула и з о б р е т е н н я
Способ прогнозирования течения рака ободочной кишки путем определения гормон-чувствительности опухоле- вой ткани, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в опухолевой ткани, взятой при операции, определяют активность аденилатциклазы до и после стимуляции глюкагоном и.при увеличении активности аденилатциклазы в 1,7 раза и более прогнозируют благоприятное течение рака ободочной кишки.
Таблица 1
