Способ оценки проникновения веществ в клеточные суспензии

 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть исп оль зовано для определения количества проникших в клетки веществ Цель повышение точности за счет одновре - менной оценки концентрации нескольких веществ - достигается за счет измерения спектров ЯМР клеток и внеклеточной жидкости и последующего определения концентрации веществ по отношению интенсивностей сигналов ЯМР. 2 ил. фиг.1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1642342

А1 (у) < 01 1 1 24 08, 33/483

ГОСУДАРСТВЕННЬ1Й НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

APN ГННТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, ДСС. фь (21) 4360297/14 (22) 08а 01 88 (46) 5,04,91, Бюл, 11 14 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) В,Д,Зинченко, М И,Щетинский, В,И,Мусатов и . В,A,Ìoèceåâ (53) 615 4-75 (088,8) (56) Nayrand R. R., Levitt D. I.

Urea and ethylene-glyed facilitated

transport sys tems in the human red сеll membrane. T. Gen. Physiol.

1983, v. 81, р. 221 237. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ПРОНИКНО ВЕНИЧ

ВЕЩЕСТВ B КЛЕТОЧНЫЕ СУСПЕНЗИИ (57) Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для определения количества проникших в клетки веществ. Цельповышение точности за счет одновременной оценки концентрации несколь-. ких веществ - достигается за счет измерения спектров ЯМР клеток и внеклеточной жидкости и последующего определения концентрации веществ по отношению интенсивностей сигналов

ЯМР, 2 ил °

1642342 жидкости

$сн г

Ь

$ с"з Всс сНз мет

Ь

$ сн зсс

52

1 262

1, 317

54

41 цитов.

Na Эр

Ь

$ Na эт

11 — О, 183

60 чной жидкости адо садо

$Na ep

Na т аходят и для н

152 — = 2 533

Далее н деления

by 0,183 е — — О, 072

116 Ь 2,533

Таким образом, по коэффициентам перераспределения можно оценить кон центрацию ве,еств внутри и вне клетки»

Фор мул аизобретения

Способ оценки проникновения веществ в клеточные суслензии, включаю"

55 щий разделение исследуемой су слензии на клетки и внеклеточную жидкость и последующее определение в них кон центрации исследуемых веществ, о тличающийсятем,что,сцеИзобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для определеHHR количества проникших в клетки веществ»

Цель - повышение точности з а счет одновременной оценки концентрации не скол ьких в еще ст в. .4

На фиг, l и 2 показан спектр Н-ЯМР эритроцитов и надосадочной жидкости соот вет ственно»

Спо соб осуществляют следующим о бразом„

Эритроциты выделяют из свежей донорской крови человека» К 50 об.Х эритроцитной массы добавляют 50 об.il раствора следующего состава, мас.7.:

Этиленгликоль (ЭГ) 5

Метанол (мет) 5

Диметилсульфо ксид 20

QMC0 ) 5

Натрийхлор (NaC1) 0 9 и о 84,1

При го товле нные образ цы су спензни эритроцитов помещают в ампулу сне кт- 25 рометра ЯМР, туда же вкладывают капилляр с эталонным раствором„Состав эталонного раствора подбирают таким, чтобы при снятии спектра ЯМР эритроцитов на ядрах Н и натрия Na иметь 30 эталонные. сигналы, не меняя капилляр в ампуле спектра метра, Для приготовления эталонного раствора используют тяжелую Д О, в которой растворяют следующие вещества. 35

Натриевая соль 2,2-диметил-2-силапентан-5 сульфоновой кислоты (JlCC)

50 мМ, NaC1 200 мМ„

Суспензию эритроцитов в ампуле слектрометра ЯМР центрифугируют и 40 снимают спектры ЯМР эритроцитов.и надосадочной жидкости на ядрах Н

< и 2 Na, Используют мультиядерный спектрометр В ruker CXP-300. В качестве эталона в спектрах

Н-ЯМР служит ДСС, И спользуя спектры на фиг, l, находят интегральные интенсивности сигналов ЯМР, нормированные к интенсивности эталонного сигнала, для эритроцитов си г 48

Ь = — -- — — = — = 0 842

$снзгсС снз. е 46

b = — —.--- — = — = 0,807

$сн,асс — 1,017

Ь = $сн, сс

По спектрам на фиг,2 находят аналогичнь|е величины в надрсадочной

СИЗ Змср 49

Ь 1,195

$сизусс

Отсюда находят коэффициенты пере распределения

Ь 0 842

Ч 0,667 Г Ь 1,262

Ьс 0 793

Q — 0,602

ivleT Ь 1,317

Ьз 1,017

Q — — = 0,851 эмсо Ь 1, 195

Далее снимают спектры ЯМР эритроцитов и надосадочной жидкости на яд рах Na„;îíîì здесь служит сиг нал Na в капилля ре, смеще нный относительно сигнала Na в ампуле за счет взаимодействия с диспрозием, Из полученных спе ктро в находят нормированные интегральные интенсивности сигналов Na-ЯМР для эритрокоэффициент перераспреСоставитель С,Рыбалкин

Техреду. М.Дидык Карре кто р Л . Б ескид

Редактор М„Самерханова

Заказ 1432

Тираж 407

Подпи сно е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина, 101

5 1б42 342 6 лью повышения точности за счет Одно= точной жидкО сТН и 110 ОтнОИ!енин1 интен временной оценки концентрации несколь- сивио стей полученных сигналов ЯМР ких веществ, разделение суспензии определяют концентрации исследуемых осуществляют в пробирке, в которой веществ.

5 снимают спектры ЯМР клеток и внекле