Способ выявления хроматина в клетках

 

Изобретение относится к биологии, медицине и сельскому хозяйству, а именно к цитологии. Цель изобретения - улучшение контрастности и разрешения мелких деталей хроматинового рисуика в клетках, повышение точности и информативности количественного анализа ядерного изображения. Клеточный материал в виде мазков, отпечатков или давленых препаратов (нативных или фиксированных) подвергают гидролизу 5Н HCI в течение 3--5 мин и окрашивают азур-П в течение 5 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (53)5 А 61 В 10/00

- — — -- — г т ряц \ н ": 5 ; ." I IE3}f33

I-é <5 . : ПА

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 !

10 ф

ОО

1(,д !

СР (21) 4697089/14 (22) 04.04.89 (46) 15.05.91. Бюл, М 18 (71) Латвийский научно-исследовательский институт экспеоиментальной и клинической медицины и. Научно-исследовательский институт физико-химической медицины (72) Е.А. Эренпрейса, Л,Ю. Ряузова, А.В. Жукоцкий и H.Н. Бутусова (53) 615,475(088.8) (56) Srnetana К., Zejnar Z„Potmesii М,.

Folla haematoIogica, 1967, v. 88, р. 305--307. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ХРОМАТИНА В

КЛЕТКАХ

Изобретение относится к биологии, медицине и сельскому хозяйству и может быть использовано для выявления формы органиэации генетического материала — хроматина и последующего анализа ядерного изображения.

Цель изобретения — повышение точности и информативности анализа.

Цель достигается минимизацией кислотного гидролиза и использованием в качестве красителя азура-ll. Гидролиз проводят

5Н HCI в течение 3 — 5 мин при 2--4 С.

Способ осуществляют следующим образом.

Клеточный материал наносят на предметные стекла в виде мазков, отпечатков или давленых препаратов.

Фиксируют препараты 96" зтанол/ацетон (1:1) или 96 этанол/эфир (1:1) в течение

10 мин и высушивают на воздухе. Фиксация может быть продгена до нескольких часов или, наоборот, опущена — если исследуемый материал может быть окрашен не позднее

2 ч после приготовления мазка.

„,, Я2„„1648385 А1 (57) Изобретение относится к биологии, медицине и сельскому хозяйству, а именно к цитологии, Цель изобретения улучшение контрастности и разрешения мелких деталей хроматинового рисунка в клетках, повышение точности и информативности количественного анализа ядерного изображения. Клеточный материал в виде мазков, отпечатков или давленых препаратов (нативных или фиксированных) подвергают гидролизу 5Н Н С! в течение

3--5 мин и окрашивают азур-II в течение 5 мин.

Далее проводят гидролиз 5 Н HCI npu

2-4 С (в холодильнике) в течение 3-5 мин.

Тщательно прополаскивают стекла в дисгиллированной воде (no 1 мин 5 раз).

Окрашивают созревшим 0,1%-ным раствором азура-11, забуференным перед употреблением на 1/4 цитратным буфером

Чакильвейна (рН 4) в течение 5 мин.

Избыток красителя отмывают в дистиллированной воде (5-10 с).

Для приготовления длительно сохраняемого материала проводят обезвоживание в третичном бутиловом спирте, проводку через ксилол и заключение в одну из постоянных сред.

Отпечатки печени крысы, Температура бытового холодильника (2 -4" С).

Пример 1. 30 с гидролиза — реагируют еще РНК, недостаточно яркая реакция гетерохроматина.

Пример 2. 3 мин гидролиза — не реагирует РНК, яркая реакция гетерохроматиновых блоков.

1648385

Составитель А, Древаль

Редактор С. Рекова Техред М.Моргентал Корректор О. Кундрик

Заказ 1861 Тираж 453 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Пример 3. 3 — 5 мин гидролиза— оптимальная реакция, Пример . 4, Интервал 6-10 мин и более (до 3 ч) — постепенно нарастает раздробление блоков гетерохроматина и появляется мелкозернистая фоновая реакция эухроматина. Комнатная температура.

Пример 5, К 2-3 мин гидролиэа экстрагирована РНК.

Пример 6, 3 — 3,5 мин гидролиза— оптимальная реакция гетерохроматиновых блоков, однако по сравнению с температурой холодильника она менее яркая.

Пример 7.. Начиная с 4 мин гидролиза стремительно нарастает разрушение гетерохроматиновых блоков и появляется мелкозернистый фон.

5 Формула изобретения

Способ выявления хроматина в клетках, включающий проведение кислотного гидролиэа и окраску основным красителем, о тличающийся тем,что,сцелью

10 повышения точности и информативности анализа, проводят гидролиз 5Н соляной кислотой в течение 3-5 мин при 2 — 4 С, при этом в качестве красителя используют азур-П.