Способ получения иммунной сыворотки к липотейхоевой кислоте стрептококка группы а
Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для получения антигенов стрептококка группы А, используемых в диагностике заболеваний. Цель изобретения - повышение активности целевого продукта и упрощение способа за счет использования непатогенного штамма -- продуцента . Выращенную культуру штамма Streptomyces levoris K-3053 перед иммунизацией им животных подвергают воздействию ультразвука в режиме 22 кГц трехкратно в течение 1 мин. Затем разрушенной культурой иммунизируют животных и получают сыворотки со специфической активностью . По сравнению с прототипом повышается активность целевого продукта в 16 раз. Ё
СОК Э СОВЕТСКИХ
СОЩИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБ JlHH
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР >. r>l,."t ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4639687/14 (22) 26,12.88 (46) 15.06.91. Бюл. М 22 (71) 1-й Московский медицинский институт им. И.M.Ñå÷åíîâà, Институт микробиологии АН СССР и Институт экспериментальной медицины АМН СССР (72) Е,С.Вылегжанина, Н.Ф.Дмитриева, К, Б. Грабовская, В,Д. Кузнецов и Н,И. Брико (53) 615.475 (088.8) (56) Кпох К.W. Marham l.L., Cken F,J. infection and immunity, 1976, v. 13, р. 647652, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННОЙ СЫВОРОТКИ КЛИПОТЕЙХОЕВОЙ КИСЛОТЕ СТРЕПТОКОККА ГРУППЫ А Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано при оценке прогноза течения ряда инфекционных заболеваний и иммунопатологических состояний. Цель изобретения — повышение активности целевого продукта и упрощение способа за счет использования непатогенного штамма микроорганизма. Способ осуществляют следующим образом. В качестве антигена используют разрушенную ультразвуком биомассу штамма Streptomyces levoris К-3053, которым иммунизируют животных, Пример 1. Двухсуточный мицелий Streptomyces levoris К-3053, отмытый от среды 3-кратно забуференным физиологическим раствором (ЗФР), разрушают на ультразвуковом дезинтеграторе "УЗДН-1" при 22 кГц 3 раза по 1 мин. Суспензию разру. Ж„» 1656456 A l (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для получения антигенов стрептококка группы А, используемых в диагностике заболеваний. Цель изобретения — повышение активности целевого продукта и упрощение способа за счет ис- пользования непатогенного штамма — продуцента. Выращенную культуру штамма Streptomyces levoris К-3053 перед иммунизацией им животных подвергают воздействию ультразвука в режиме 22 кГц трехкратно в течение 1 мин, Затем разрушенной культурой иммунизируют животных и получают сыворотки со специфической активностью. По сравнению с прототипом повышается активность целевого продукта в 16 раз. шенного мицелия прогревают трижды по 30 мин при 60 С с 24-часовым интервалом, хранят при 4 С, при введении животным разводят его стерильным ЗФР до оптической плотности (ОД) 0,16, определенной при длине волны (il) 650 нм. Беспородным морским свинкам весом 200 r вводят 1 мл разрушенной ультразвуком биомассы штамма Streptomyces levoris К-3053 (ОД = 0,16 при 650 нм), при этом 0,75 мл вводят внутрибрюшинно, а 0,25 мл — подкожно в область шеи. Путем однократной инъекции в неделю, курс иммунизации продолжается 3 недели. В процессе иммунизации из сердца свинок берут пробы крови для определения титров антител в РПГА против липотейхоевой кислоты (ЛТК) стрептококка группы А. После отделения от зритроцитарной массы полученные сыворотки прогревают 30 мин при 56 С и сохраняют в 1656456 Составитель В,Литовченко Техред M.Mîðãåíòàë Корректор С.Шевкун Редактор А.Ревин Заказ 2050 Тираж 421 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Стерильных ампулах при 4 С,Титр проверяют в РПГА по общепринятой методике следующим образом; 2 -ный раствор бараньих эритроцитов отмывают дважды ЗФР (5 мин при 1000 o6/мин) и доводят до первоначального объема, после чего смеши,вают с равным объемом раствора ЛТК в ЗФР (концентрация 2 мкг/мл) и инкубируют при постоянном перемешивании 30 мин ,при 37 С. Эритроциты отмывают ЗФР от неприсоединившейся ЛТК 3 раза, РПГА проводят в микротитраторных шлашках, При этом к 0,2 мл последовательным разведениям испытуемых сывороток добавляют 1 каплю сенсибилиэированных эритроцитов и инкубируют при 37 С 1 ч и 2 ч при 4 С, Результат реакции учитывают визуально. Титр антител в сыворотке был равен 14 41. Полученная антисыворотка может быть использована для изучения циркуляции ан тигена в крови больных с различной стрептококковой этиологией, что дает воэможность оценить прогноз течения заболевания. Таким образом, упрощение предлагаемого способа (no сравнению с известными) достигается за счет использования непатогенного штамма стрептомицета, позволяющего получить специфические антитела к ЛТК стрептококка группы А, что в свою оче5 редь приводит к увеличению в несколько раз титра специфических антител. По сравнению с прототипом увеличивается титр антител в липотейхоевой кислоте в 16 раз (титр антител, получаемый по про10 тотипу, равен 10,39 2,3 ig2, а по предлагаемому способу — 14,41 + 1,02lg2), Формула изобретения Способ получения иммунной сыворотки 15 к липотейхоевой кислоте стрептококка группы А, включающий культивирование микробов-продуцентов, разрушение их, иммунизацию животных, забор крови, выделение целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й20 с я тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и упрощения способа эа счет использования непатогенного штамма микроорганизма, в качестве микроба-продуцента используют штамм Streptomyces 25 levoris К-3053 и перед иммунизацией клетки микроба разрушают ультразвуком.
