Способ определения аденилаткиназной активности легких

Авторы патента:

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

Изобретение относится к медицинской биохимии и лабораторной диагностики заболеваний внутренних органов, в частности легких и сердца. Целью изобретения является повышение точности способа за счет использования в качестве биологического материала конденсата выдыхаемого воздуха , активации вспомогательного фермента пируваткиназы ионами магния и калия, заменой фосфатного буфера,более устойчивым и удобным в работе трис-буфером 0.05М, рН-7,5, увеличением температуры инкубации до 37°С. Для исследования в две пробирки берут по 2 мл трис-буфера (0,05 М), 0,2 мл НАД На (0,011 М), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0,015 М). 0,1 мл АТФ (0,025 М). 0.1 мл АМФ (0,025 М), 0,2 мл М 04(0,1 М), 0,2 мл КС (0,025 М). 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавляют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают пробирки в термостат при 37°С на 30 мин. После инкубации охлаждают на льду и замеряют при 340 нм. Расчет проводят по формуле Е-3-10-1000 Е 2,679 6,22 1800 ммоль/л/с. Способ позволяет при обследовании больных выявлять низкий уровень аденилаткиназной активности, диагностирующей степень функциональных нарушений . 2 табл. w Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

"ОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 и 33/68

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4464334/14 (22) 06.06.88 (46) 30.06.91. Бюл. hb 24 (71) Белорусский научно-исследовательский институт экспертизы трудоспособности и организации труда инвалидов (72) С.В.Бестужева и Н.А.Жерносек (53) 612.015 (088.8) (56) У.В,С., 1951, ч.193, р.481-495. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДЕНИЛАТКИ НАЗНОЙ АКТИВ НОСТИ Л Е ГКИХ (57) Изобретение относится к медицинской биохимии и лабораторной диагностики заболеваний внутренних органов, в частности легких и сердца. Целью изобретения является повышение точности способа за счет использования в качестве биологического материала конденсата выдыхаемого воздуха, активации вспомогательного фермента пируваткиназы ионами магния и калия, заменой фосфатного буфера, более устойчивым и удобным в работе трис-буфером

Изобретение относится к медицинской биохимии и лабораторной диагностике за. болеваний внутренних органов, в частности заболеваний легких и сердца, Цель изобретения вЂ” повышение точности способа.

Способ осуществляют спектрофотометрическим методом, основанным на измерении скорости сопряжения ферментативных реакций. Субстратами реакций являются

АТФ и АМФ, а образующийся АДФ реагирует с фосфоэнолпируватом в-присутствии пируваткиназы. Продуцируемый пируват определяют при помощи лактатдегидрогеназы при наличии НАД Н

АТФ + AMcD 2 АДФ

„„ „„1659858 А1

0,05М, рН-7,5, увеличением температуры инкубации до 37 С. Для исследования в две пробирки берут по 2 мл трис-буфера (0,05

М), 0,2 мл НАД Н2 (0,011 M), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0,015 М), 0,1 мл АТФ (0,025

М),0,1 мл АМФ(0,025 М),0,2 мл M 04(0,1 М), 0,2 мл КС (0,025 M), 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавляют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают пробирки в термостат при 37 С на 30 мин. После инкубации охлаждают на льду и замеряют при 340 нм. Расчет проводят по

Е 3 10 1000 формуле 6.22 1800 = Е 2.679 ммоль/л/с. Способ позволяет при обследовании больных выявлять низкий уровень аденилаткиназной активности, диагностирующей степень функциональных нарушений. 2 табл.

АДФ + фосфознолпируват пируват +

АТФ

Прируват+ НАД Н2Пактат+ НАД

Для исследования в опытную и контрольную пробирки помещают по 2 мл трисбуфера (0,05М), 0,2 мл НАД . Нг (0,011M), 0,2 мл фосфоэнолпирувата (0,015М), 0,1 мл

АТФ (0,025M), 0,1 мл АМФ (0,025М), 0,2 мл

MgSO4 (0,1М). 0,2 мл KCI (0,025М), 0,01 мл пируваткиназы и 0,01 мл лактатдегидрогеназы. В опытную пробирку добавляют 0,1 мл конденсата выдыхаемого воздуха, а в контрольную 0,1 мл бидистиллированной воды и помещают в термостат при 37 С на 30 мин.

После инкубации пробирки охлаждают на

1659858 льду, замеряют оптическую плотность при

340 нм. Расчет проводят по формуле

Е " 3 10 1000

6 22 1800 . Е 2 679 ммоль/л/с ) где Е вЂ” разница экстинций контрольной и 5 опытной проб;

6,22 вЂ” коэффициент молярной экстинции НАД - Н2;

3 вЂ” объем инкубационной смеси;

1000 вЂ” пересчет на 1000 мл; 10

1800- пересчет на 1 с;

10- пересчет на 1 мл конденсата.

Пример 1. 8 клинических условиях данным способом npoeopm исследование конденсата выдыхаемого воздуха у больных 15

ХНЗЛ без бронхоспастического синдрома, с бронхвспастическим синдромом, при бронхиальной астме и ишемической болезни сердца.

Результаты исследования представле- 20 ны в табл.1.

Как видно иэ табл.1. ии<азатели аденилвткиназной активности в конденсате выдыхаемого воздуха у обследованных больных значительно ниже, чем у здоровых 25 и коррелируат со степенью функциональной недостаточности.

Адеиилаткииазиая активность легких по коидеисату выдыхаемого воздуха, мХ/л/с п Х -+8х!

Здоровые

0,740 0,125

ЛН 1-11 ст, ЛН 11 ст

ЛН 0-1 ст.

ЛН 1-1". ст„

Бронхиальная астма:

ЛН 0-1 ст.

ЛН 1-11 ст., 15

ИБС:

ХКН 0-1 ст.

ХКН 1-11 ст.

Группа обследованных

ХНЗЛ без бр6нхоспастичаского синдрома:

ХНЗЛ с бронхоспастическим синдромом;

При исследовании плазмы крови у данных больных изменения аденилаткиназной активности менее выражены.

Сравнительные данные приведены в. табл.2.

Таким образом, способ позволяет с большим коэффициентом достоверности и специфичности выявить при обследовании больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких (ХНЗЛ) и ишемической болезни сердца (ИБС) низкий уровень аденилаткинаэной активности, диагностирующий степень функциональных нарушеФормула изобретения

Способ определения аденилаткиназной активности легких, включающий исследования биологической жидкости путем измерения скорости в системе сопряженных ферментативных реакций. о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, система сопряженных ферментативных реакций дополнительно содержит

О, 1М Мц304 идо 25М КО, а в качестве буфера вЂ” 0,05М трис-НО буфер рн 7,5 и реакции осуществляют при 37 С.

Таблица 1

0,356 и 0,040 с 0,001

0,245 0,030 <О 001

О, 314 + О, 123 <0, 001

О, 251 вЂ” О, 026 с О, 001

Оэ 278+ Оэ 049 <0> 001

0„273 вЂ” О, 032 сО, 01

0,317 Х 0,050 0,001

0,1582 0,070 с0,001

1659858

Таблица 2

Аденилаткиназная активность плазмы крови, ми/л/с

Группы обследованных т.

Здоровые

5,31 t 0,53

ХНЗЛ без бронхоспастического синдрома:

4 44ьО 35 г0,05

4р 21 Оэ 50 < Оэ05

ХНЗЛ с бронхоспастическим синдромом:

5р36 а Ор82 рОэ05

4,43Ф. 0 47 « 0 05

Бронхиальная астма:

ЛН 0-1 ст.

ЛН

ИБС:

Составитель А«Агуреев

Техред М.Моргентая Корректор М.Пожо

Редактор С.Лисина

Заказ 183Э Тираж 417 .. Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101

ЛН 1-11 с .

ЛН 11 ст.

ЛН 01- ст.

ЛН 1-11

ХКН 0-1 ст.

ККН 1-11 ст.

3,56+ 0,51

4,08 t 0,46

4,70 + 0,26

3,70 «+ 0,32 (0,02 (0,05 0,05 с 0,05

Способ определения аденилаткиназной активности легких

Изобретение относится к биологии, биотехнологии и медицине, может быть использовано в клиниках и применяться для определения концентрации белка в автоматизированном режиме при биотехнологических процессах, конкретно для солюбилизированных детергентами растворов мембранных белков Цель изобретения - определение белка в присутствии ПАВ при одновременном повышении точности способа Сущность способа заключается в том, что предварительно снимают спектры поглощения растворов белка с поверхностноактивным веществом и самого поверхностно-активного вещества при той же концентрации в УФ-диапазоне длин волн 200-260 нм

Способ диагностики характера течения ревматоидного артрита // 1652916

Изобретение относится к медицине, в частности к ревматологии, и может быть использовано для диагностики характератечения ревматоидного артрита

Способ диагностики хронической внутриутробной гипоксии плода // 1651215

Изобретение относится к медицине , в частности к клинической перипатологии, и может быть использовано для диагностики внутриутробной гипоксии плода

Способ моделирования дыхательной вспышки полиморфоядерных лейкоцитов // 1644206

Способ определения концентрации биополимеров в реакции связывания комплемента // 1644037

Способ определения пероксидазной активности крови // 1644035

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в диагностике состояния перекисных процессов в организме Цель изобретения - повышение точности способа о Способ заключается в том, что при 25°С инкубируют опытную пробу , содержащую ацетатный буфер, индигокармин в концентрации 4-10 М, перекись водорода и гемолизат крови, разведенный в 3000 раз, а также контрольную пробу, не содержащую крови

Способ определения срыва терапевтической ремиссии хронического алкоголизма // 1644034

Способ прогнозирования осложнений сахарного диабета у детей // 1640655

Изобретение относится к медицине , в частности к биохимии, и может быть использовано для определения гликозилирования различных белков , что лежит в основе осложнений у больных сахарным диабетом

Способ прогнозирования фиброзообразования у больных хроническим бронхитом // 1638624

Изобретение относится к медицине , в частности к пульмонологии, и может быть использовано для определения фиброзообразования в легких

Способ определения индивидуальной чувствительности к сандиммуну // 1631435

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунодепрессивной терапии

Способ оценки эффективности замещения костного матрикса при трансплантации в ходе оперативного лечения костной опухоли // 2101708

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии

Способ прогнозирования осложненного течения острого панкреатита // 2102764

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогнозированию течения острого панкреатита

Способ дифференциальной диагностики клинических форм бруцеллеза у людей // 2103687

Изобретение относится к медицине, а, именно, к диагностике бруцеллеза цитохимическими методами

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Синтетические олигопептиды, специфически взаимодействующие с антителами к вирусу гепатита с, способы диагностики hcv- инфекции (варианты) // 2104284

Изобретение относится к медицине, молекулярной биологии и вирусологии и представляет собой биологически активные соединения - синтетические олигопептиды, соответствующие аминокислотным остаткам (а

Способ ранней диагностики послеродового эндометрита // 2104529

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для ранней доклинической диагностики послеродового эндометрита, одного из гнойносептических постгестационных заболеваний

Способ прогнозирования развития цилиохориоидальной отслойки после внутриглазной операции // 2104548

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может найти применение после внутриглазных операций для своевременного принятия профилактических мероприятий

Способ диагностики атрофического эндобронхита // 2104549

Способ определения эффективности иммуноцитотерапии у больных с опг-гестозами // 2105311

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и может найти применение в оценке эффективности терапии гестозов

Способ оценки завершенности формирования соединительнотканного рубца у больных, перенесших инфаркт миокарда // 2105983

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для установления завершенности патологического процесса при инфаркте миокарда (ИМ)