Способ получения биомассы хламидий

 

Изобретение относится к области микробиологии, в частности к биотехнологии получения биомассы хламидий для производства диагностических и лечебно-профилактических препаратов. Целью изобретения является увеличение выхода биомассы хламидий на инфицированных куриных эмбрионах. Это достигается за счет выращивания бактериальной массы одновременно в желточной и аллантоисной полостях куриных эмГфионов. Для выполнения способа 6-7-дневные эмбрионы инфицируют разведенной до 10 3-10 4суспензией хламидий в желточный мешок, 1-2 дня культивируют, овосконируют,затем живые эмбрионы инфицируют повторно в аллантоисную полость тем же материалом в разведении , культивируют 4-6 дней, после чего аллантоисную жидкость, желточные и аллантоисные оболочки павшего эмбриона используют в качестве биомассы хламидий . 1 табл.

СВОЗ СОВЕТСНИХ

РЕСПУБЛИН (Я)5 С 12 И 1 20 А 61 К 39/118

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 ния проводят овоскопию. Оставшиеся живыми эмбрионы заражают повторно в аллантоисную полость хламидиосодержащей суспензией, разведенной до

t0 З, в дозе 0,2 мл. Отверстие в скорлупе после заражения заливают парафином и эмбрионы снова помещают в термостат для продолжения инкубации. Инфицированные эмбрионы ежедневно овоскопируют. Эмбрионы, павшие на третий день после заражения в желточный мешок считают неспецифи7 чески павшими.

Перед вскрытием скорлупу охлажденных эмбрионов дезинфицируют спиртом и обжигают. Эмбрионы вскрывают

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕП:НИЯМ И (ЛНРЫТИЯМ

ПРИ ЛЮТ СССР (21) 4497242/13 . (22) 25 10 88 (46) 15.04.91. Бюл. h» 14 . .(71) Научно-исследовательский ветеринарный институт, г ° Казань (72) Р.Х.Хамадеев, Ф.N.Хусаинов и А.Э,Равилов (53) 576.8.097 (088.8) (56) Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний.

М., 19 74, с. 726, (54} СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ XJIAМИДИЙ (57) Изобретение относится к области микробиологии, в частности к биотехнологии получения биомассы хламидий для производства диагностических и лечебно-профилактических препаратов °

Изобретение относится к микробиологии, в частности к биотехнологии получения биомассы хламиций для про-. изводства диагностических и лечебнопрофилактических препаратов.

Целью изобретения является увеличение выхода биомассы.

Пример 1. Хламидиосодержащую суспензию желточного мешка разводят до 10 и вводят в желточную полость,KypHHoro эмбриона по известной методике в дозе 0,2 мп; Отверстие в скорлупе после заражения заливают л и эмбрионы помещают в термостат с увлажненной атмосферой при

37 38 С. На второй день после зараже„,SU„„1641883 А 1

Целью изобретения является увеличение выхода биомассы хламидий на инфицированных куриных эмбрионах. Это достигается за счет выращивания бактериальной массы одновременно в желточной и аллантоисной полостях куриных эмбрионов. Для выполнения способа 6-7-дневные эмбрионы инфицируют разведенной до 10 — 10 суспензиеи

-Э -4 хламидий в желточиый мешок, 1-2 дня культивируют, овосконируют> затем живые эмбрионы инфицируют повторно в аллантоисную полость тем же мате-2 -Э риалом в разведении 10 -10, культивируют 4 — 6 .дней, после чего аллантоисную жидкость, желточные и аллантоисные оболочки павшего эмбриона используют в качестве биомассы хламидий. 1 табл.

1641883 путем срезывания скорлупы несколько выше границы воздушной камеры. Перво- начально отсасывают прозрачную слегка опалесцирующую аллантоисную жидкость пастеровской пипеткой, .соединенной с сифоном, находящимся под разрежением, затем (Иосле удаления инфицированной аллантоисной жидкости) в отдельную посуду двумя пинцетами удаляют зародыппф, При этом отсекают пупочный стебель и извлекают желточную и хорионаллантоисные оболочки вместе с сопутствующим желтком. Выход хла,мидиосодержащего материала из 120 ку,риных эмбрионов с учетом потерь со:ставляет 636 или 5,3 г на один инфицированный эмбрион, что в 9,4 раза больше по сравнению с биофабричной технологией. Инфекционный тито био в 20 массы IlpH этом составляет 10" ЭЗЩ п в 0,2 мл. Комплементсвязывающий хла.мидийный антиген,приготовленный из данной биомассы, показал активность в РСК 1:256. Выход антигеиа на 1 использованный эмбрион составил

10 мл, что в 9-10 раз. больше по сравнению с биофабричной технологией.

H p и м е р 2. Эмбрион заражают в в желточную полость суспензией (104) желточного мешка в дозе

0,2 ип. На второй день после заражения эмбрионы овоскопируют, удаляют павшие эмбрионы, а остальные инфицируют повторно в аллантоисную полость суспензией, разведенной до 35

10 9 в дозе 0,2 ип. Инкубацию эмбрионов проводят в течение 8 дней. Павшие эмбрионы по мере их гибели охлаждают и вскрывают, при этом отсасывают хламидиосодержащую аллантоисную 40 жидкость и отбирают желточную и хорионаллантоисную оболочки. От 120 куриных эмбрионов получают 452 ип хламидиосодержащей аллантоисной жидкости и 130 г инфицированных оболочек.

Выход хламидиосодержащего материала с инфекционньк титром 10 ЗЛД в

6Ф Ъ

0,2 мл составляет 582 или 4,8 г на один инфицированный куриный эмбрион, что в 9,6 раза больше биомассы данного штамма, полученного при заражении только в желточный мешок. Из полученной биомассы готовят экспериментальную инактивированную эмульсионную вакцину против хламидиозного аборта крупного рогатого скота и испытывают ее иммуногенную активность на белых мышах и нетелях. Вакцина в дозе 0,2 мл обеспечивает иммунологическую устойчивость к контрольному заражению вирулентным штаммом хламидий у 91,7Х вакцинированных мьппей.

Двукратное подкожное введение экспериментальной вакцины в дозе по

1,5 wr нетелям предохраняет их от развития хламидиозного аборта крупного рогатого скота после контрольного заражения вирулентным штаммом хламидий (см. таблицу).

Таким образом, предлагаемый способ выращивания биомассы хламидий позволяет более эффективно использовать широкодоступную биологическую модель — куриные эмбрионы при выращивании хламидий для целей биотехнологии.

Формула изобретения

Способ получения биомассы хламидий, включающий заражение и культивирование суспензии хламидий в желточной полости куриных эмбрионов с последующим сбором хламидосодержащего материала и вьделениеи биомассы, отличающийсятем,что, с целью повышения выхода биомассы, через 1-2 дня после заражения эмбрион дополнительно инфицируют в аллантоисную пълость суспензией хлаиидий в

-2 Ю разведении 10 -10 в дозе 0,2 мп и культивируют в течение 4-6 дней, при этом выделение биомассы производят из всего инфицированного материала.

1641883

Данные по»скопу беременности опытной н контрольной группы нетелей после экспериментального апреле а<я возбудителем хламидиозпого аборта крупного рогатого скота

Характер»стика плода

Группа

Возраст, Вес, кг Развитие иес.

Не беременная

Нормальные роды

»

° I

7

22

Меньше 7

Больше 7

12,5

Составитель А. Горбатов

Редактор Т.Лазоренко Техред М,динцк Корректор М.демчик

Подписное

Тира7к 388

Заказ 1126

ВНИИПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рау)нская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.У)кгород, ул. Гагарина,101

Опытная (вакцинированные) Контрольная (не вакцин»рованные) Количество ливотнык

\ а какой ень после арашения

49

52

36

53

Больше 8

Больше 8

Около 8

Больше 8

Около 7

31

29

26,5

Хорошее

Хорошее

Удовлетв.

Хорошее

Слабое

Нревдевременные р оды

Аборт

Наличие хламиднй в плаценте