Штамм бактерий еsснеriснiа coli - продуцент неорганической пирофосфатазы

 

Изобретение относится к биотехнологии . Цель изобретения - получение нового штамма, используемого для выделения фермента - неорганической пирофосфатаэы. Штамм Escherichia coli ВКПМ B-4780(LG 88) - продуцент неорганической пирофосфатазы выделен из сточных вод Новый продуцент обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известным. Удельная активность в клеточном экстракте Е. coli ВКПМ В-4780 (LG 88) составляет 8,0-9,0 ед/мг белка, общая активность 1500-1800 ед. на 1000 мл культуральной жидкости. 1 табл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 12 N 9/16, 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

glfГ rgp qi.ipq

8A :- : 1 :г

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4711208/13 (22) 03.04.89 (46) 30.06.91. Бюл. ¹ 24 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной знзимологии (72) Г.А. Шпокаускас, В,Й. Палубинскас, А.А, Глемжа, Э,Ю. Кюдулене и В.Й. Янюнайте (53) 577.15 (088.8) (56) John Josse, А В1о!, Chem. V. 241, 1966, р. 1938 — 1947. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHlA

CALl — ПРОДУЦЕНТ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ

ПИРОФОСФАТАЗЫ

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению нового высокопродуктивного штамма, используемого для получения фермента — неорганической пирофосфатаэы.

Целью изобретения является получение штамма Escherichia coll ВКПМ В-4780 (LG 88) — продуцент... неорганической пирофосфатазы с более высокой ферментативной активностью.

Штамм Е. coll ВКПМ В-4780 (LG 88)— продуцент неорганической пирофосфатазы — выделен из сточных вод, Штамм Е, coll LG 88 характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Палочковидные клетки с закругленными концами, соотношение длины и ширины клетки Зх1. На мясопептонном агаре развивается в виде слабовыпуклых полупрозрач„, Я2„„1659481 А1 (57) Изобретение относится к биотехнологии. Цель изобретения — получение нового штамма, используемого для выделения фермента — неорганической пирофосфатаэы. Штамм Escherichia coll ВКПМ В-4780(LG

88) — продуцент неорганической пирофосфатазы выделен иэ сточных вод. Новый продуцент обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известным. Удельная активность в клеточном экстракте Е. coll ВКПМ В-4780 (LG 88) составляет 8,0-9,0 ед/мг белка, общая активность 1500-1800 ед. на 1000 Мп . культуральной жидкости. 1 табл. ных, светло-желтых, бежевых колоний, а в самом мясопептонном бульоне вызывает. диффузионное помутнение и образование осадка.

Физиолого-биохимические признаки.

Оптимальная температура роста 3037 С. рН среды 6,5 — 7,5, кишечная палочка погибает при 55й2 С в течение 1 ч, а при температуре 60 2 С вЂ” в течение 15 мин.

Грамотрицательные, подвижные, каталазоположительные, сбраживающие гл юкозу палочки. Желатину не сбраживает, Культура Escherichia coti LG 88 хранится в столбиках МПА под слоем вазелинового масла при 4 — 20 С в течение 1 года.

Пример. Культуру E coll LG 88, законсервированную в столбике МПА под слоем вазелинового масла, для оживления пересевают на стерильные чашки Петри с агаризованным рыбным гидралиэатом и

1659481

П о ент

Показатели

П е агаемый штамм

Известный штамм

4 — 6 ч (до конца логарифмической фазы) 8,0-9,0

Стационарная фаза

Продолжительность культивирования, ч

Удельная пирофосфатазная активность, ед/мг белка

Общая активность на

1000 мл культуральной жи кости, е

4,0

1500-1800

Данные отсутствуют

Составитель И. Чаплйна

Редактор М. Петрова Техред М.Моргентал Корректор Т. Малец

Заказ 1821 Тираж 376 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 выращивают в термостате при 37 С в течение 24 ч.

Оживленную культуру. используют для приготовления инокулята. Инокулят выращивают в качалочных колбах емкостью

750 мл по 250 мл среды в каждой. Состав среды, $: гидролизат отходов жмыха легких

1,0; гидролизат пекарских дрожжей 0,5;

КН Р04 0,5; 0-глюкоза 0,5. рН среды 7,2 доводят при помощи 2 н. едкого натрия. Среду стерилизуют 30 мин при 0,8 атм, Температура выращиваыия инокулята 37 С, продолжительность роста 18 ч. Ферментацию проводят в ферментере типа "Биолафит" емкостью 20 л, заполненного 9 л указанной среды. Количество вносимого инокулята составляет 0,27ь от общего объема среды. Время культивирования 5 ч, аэрация 5-6 л/мин, температура выращивания

37 С.

Клетки от культуральной жидкости отделяют центрифугированием (10 мин при

12000 об/мин).

Для определения пирофосфатаэной активности клетки разрушают дезинтегратором со стеклянными шариками (диаметр шариков 150-200,ик) в течение 10 мин при

4500 об/мин. Разрушенные таким образом клетки отделяют путем центрифугирования (15 мин при 15000 об/мин). В полученном супернатанте определяют пирофосфатаэную an.ивность.

5 Активность неорганической пирофосфатазы определяют спектрофотометрическим методом (длина волны 660 нм) по интенсивности окраски продукта реакции индикатором. За единицу пирофосфатаэной

10 активности принимают такое количество фермента, которое при 30 С и при рН 9,0 за

1 мин гидролизует 1 мкмоль пирофосфата.

Сравнительные данные предлагаемого продуцента — неорганической пирофосфа15 тазы и известного штамма представлены в таблице.

Новый продуцент Escherlchia coll LG 88 обладает более высокой пирофосфатазной активностью по сравнению с известным

20 продуцентом Escherichia coll К-12. Удельная активность в клеточном экстракте Е. Coll LG

8е превышает удельную ферментативную активность известного штамма в 2 — 2,2 раза.

25 Формула изобретения

Штамм бактерий Escherlchia coll ВКПМ

8-4780 — продуцент неорганической пирофосфатазы.