Способ диагностики заболеваний растений, вызванных рsеudомоnаs syringae 1у серогруппы
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к иммунохимическим методам экспресс-диагностики фитозаболеваний, вызванных PSCUDOMONAS SYRINGAC. Цель изобретения - ускорение диагностики заболевания. Способ диагностики заболеваний растений, вызванныхР. SYRINGAC IV серогруппы заключается в следующем. На предметном стекле смешивают 0,05 мл водносолевого экстракта исследуемого растительного материала и 0,025 мл реагента для диагностики P. SYRINGAC IV серогруппы, который предварительно готовят из антисыворотки к О-специфическому антигену P. WIERINGAC штамм 7923 и 10%-ной суспензии клеток STAPHYLOCOCCUS AUREUS штамм COWAN - 1, взятых в соотношении 1:5 - 1:50. О наличии фитопатогенных бактерий P. SYRINGAL IV серогруппы судят через 30 - 60 с реакции агглютинации. Способ позволяет ускорить время проведения реакции и уменьшить расход сыворотки на каждый анализ. 5 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)л G 01 N 33/536
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕГ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4494776/13 (22) 21.07.90 (46) 30.08.91. Бюл. ¹ 32 (71) Киевский государственный университет им. T. Г, Ш вечен ко и И н ститут микробиологии вирусологии им. Д.К.Заболотного (72) Н.Е.Вихоть, З,В,Чеусова, ll.À.Mèõaëüский, В,В.Овод, Л,М.Яковлева, P.È,Ãâîçäÿê и Г.М.Здоровенко (53) 632.07(088.8) (56) Защита растений, 1978, № 11, с,40 — 41, (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ РАСТЕНИЙ, ВЫЗВАННЫХ
PSEUD0M0NAS SVRINGS"Е (Ч СЕРОГР".ППЫ
r57) Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии. в частности к иммунохимическим методам экспресс-диагностики фитозаболеваний, вызванных
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к иммунохимическим методам экспрессдиагностики фитоэаболеваний, вызванных, Pseudomonas syringae.
Цель изобретения — ускорение диагностики заболевания.
Способ диагностики заболеваний растений, вызванных Pseudomonas syringae IV серогруппы, заключается в следующем.
На предл1етном стекле смешивают
0,05 мл водносолево о экстракта исследуемого растительного материала и 0,025 мл реагента для диагностики P.syrlngae ГЧ серогруппы, который предварительно готовят из-антисыворотки к 0-специфическому,, Ы„„1673973 А1
P s cud omonas з уг! поае, Цель и зобретен ия— ускорение диагностики заболевания. Способ диагностики заболеваний растений, вызванных P.syringae 1Ч серогруппы, заключается в следующем. На предметном стекле смешивают 0,05 мл водно-солевого экстракта исследуемого растительного материала и 0,025 мл реагента для диагностики
P.syringae IV серогруппы, который предварительно готовят из антисыворотки к О-специфическому антигену Р,wlerlngae штамм
7923 и 10 ф,-ной сус пензии клеток
Sta„ihyIococcus au ел штамм Cowan-, в".я1ых в соотношении 1:5-1:50, О наличии фитопатогенных бактерий P,syrlngae !V серогруппы судят через 30-60 с реакции агглютинации, Способ псзволяет ускорить время проведе ия реакции уменьшить расход сыворозки на каждый а;:алиэ
5 табл. агентУ P.wier. nga. штамм 79:3 и С=, .— Гюй суспензии клеток Staphylococcus авг;.us штамм Союаг1-1, взятых в соотношении i;51;50. О наличии фитопатогенных бактерий
P.syringae IV серогруппы судят по прохождению через 30 — 60 с реакции агглютинации.
Пример 1. "олучение имуннсй сыворот«и к экзоцеллюлярному О-анти ену
Р.меппаае 7923.
Для получения специфической знтисыворотки кроликов иммунизируют зкэоцеллюлярным О-специфическил" полиса харидом (ЭОПС), В препара:е ЭОПС обнаружено 56 углеводов, мерзее 1 белка, Кроликов ил.мунизируют ЗОПС
Р.wieringae 7923 по комбиниро,:аннои схе1673973 ме с интервалом между инъекциями 2 недели.
1 введение — вунтримышечно 2 мг ЭОПС в 0,5 мл иэотонического раствора NaCI u
0,5 мл полного адьюванта Фрейнда.
Il введение — внутримышечно 5 мг
ЭОПС в 0,5 мл изотонического раствора
NaCI и 0,5 мл полного адьюванта Фрейнда, 111 введение — внутривенно 2,5 мг ЭОПС в 1 мл иэотонического раствора NaCI.
IV введение — внутривенно 3 мг ЭОПС в
1 мл иэотонического раствора йаС1. Кровь брали на 8-14-й день после последней инъекции. Антисыворотка к ЭОПС агглютинировала гомологичную культуру в разведении 1:50000.
Пример 2. Способ получения реагента
Реагент для экспресс-диагностики бактерий Р,syringae IV серогруппы получают сенсибилизацией клеток Staphylococcus
aureus штамм Cowan-1, содержащих белок
А, специфической иммунной сывороткой к экзоцеллюлярному О-антигену P.wieringae
7923. Для этого 0,1 мл нативной иммунной сыворотки инкубируют с 1 мл 10%-ной стафилококковой суспензии из клеток, полученных при 18-часовом культивировании на мясопептонном агаре, отмывают от неприсоединившихся к белку А антител в течение 10 — 15 мин при центрифугировании при 3 тыс, об/мин. Осадок, представляющий собой белок А-содержащие корпускулы стафилококка, обработанные иммуноглобулинами к экзоцеллюлярному О-антигену
Р wleringae 7923, суспендируют в 10 мл физиологического раствора: полученная суспензия является готовым реагентом для определения антигенов P.syringae И серогруппы, способным храниться без потери активности при +4 С в течение 2 месяцев., Реагент обладает высокой специфичностью в отношении антигенов P.sóringae IV серогруппы (табл.1).
Пример 3, Применение реагента для обнаружения фитопатогенных бактерий
P.syrlngae IV серогруппы, Представителями IV серогруппы фитопатогенных P.syringae 2846 и 4394 и
P.wierlngae 7923 проводят искусственное заражение пшеницы, фасоли, конских бобов, перца, табака. Из образцов искусственно зараженных растений готовят водносолевые экстракты путем измельчения растительной массы и экстракцией физи50, антителосодержащим реагентом и учетом результатов, отличающийся тем, что, 55
15 20
40 ологическим раствором с последующим фильтрованием.
Реакции осуществляют на предметном стекле: к 0,025 мл реагента добавляют
0,05 мл растительного экстракта, B течение
30 — 60c производят учет реакции на наличие агглютинатов (табл,2).
Пример 4. Сравнение предлагаемого технического решения с известным, Для проведения реакции агглютинации используют сыворотку, полученную аналогично описанной в примере 1, и реагент па примеру 2. Реакцию осуществляют с чистыми культурами указанных фитопатогенных бактерий.
Полученные результаты представлены в табл.3.
Пример 5. Исследована зависимость чувствительности реакции от концентрации стафилококковой суспензии при приготовлении реагента и концентрации сыворотки при приготовлении реагента.
Данные приведены в табл.4 и 5.
Как видно из табл.4, для приготовления реагента для осуществления способа экспресс-диагностики заболеваний растений, вызванных P.syrlngae Ь) серогруппы, можно использовать 5-15%-ную взвесь стафилококка. При использовании 15%-ной взвеси вследствие большой густоты затрудняется учет реакции. Сравнивая результаты реакции с использованием 5-15%-ной взвеси стафилококка, можно сделать вывод, что наиболее целесообразно использовать 10% ную взвесь, Как видно из табл.5, оптимальным является соотношение сыворотки и взвеси стафилококка 1:10, Способ позволяет ускорить время проведения реакции и уменьшить расход сыворотки на каждый анализ.
Формула изобретения
Способ диагностики заболевания растений, вызванных Pseudomonas syrlngae IV серогруппы, включающий нанесение на предметное стекло экстракта исследуемых растений с последующим проведением серологической реакции со специфическим с целью ускорения диагностики заболевания, в качестве реагента используют сыворотку к
О-специфическому антигену P seudomonas
wieringae 7923, адсорбированную на клетках Staphylococcus aureus Cowan-1.
1673973
Таблица 1
Таблица 2
Выявление возбудителя в экстрактах зараженных растений
Результат реакции
Штамм, используемый для за ажения
Вид растений
Перец P.syringae
P.syrlngae
Р wierlngae
Контроль-неинфицированное растение пеона
Табак P.syrlngae
P.syringae
p.wieringae
Контроль-неинфицированное растение табака
Конские бобы Р.syringae
P.syringae
Р,wlerlngae
Контроль-неинфицированное растение конских бобов
Пшеница P.syrlngae
Р. syrlngae
Р.wlerlngae
Контроль-неинфицированное
;растение пшеницы
Фасоль P.syringae
P,syringae
Р wleringae
2846
4394
7923
++++
++++
+4-++
2846
4394
7923
++++
++++
++++
2846
4394
7923
2846
4394
7923
++++
++++
++++
2846
4394
7923
++++
++++
++++ нное
Таблица 3
Сравнение способов с применением реагента и нативной сыворотки
Специфичность реагента для экспресс-обнаружения P.syrlngae IV серогруппы
1673973
Таблица 4
Зависимость чувствительности реакции от концентрации стафилококковой суспензии при приготовлении реагента
Таблица 5
Зависимость чувствительности реакции от концентрации сыворотки при приготовлении реагента
Составитель Ю, Рогачев
Техред M. Ìoðãåíòàë Корректор О. Ципле
Редактор А, Огар
Заказ 2915 Тираж 394 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
