Способ определения скорости образования костной ткани

 

Изобретение относится к медицине , а именно к травматологии и ортопедии. Цель - повышение точности способа. С этой целью животному вводят костный маркер, образец костной ткани экспериментального животного инкубируют в течение 1-1,5 ч в 5%-ном растворе осчовного фуксина в 60%-ном этиловом спирте. Затем готовят серийно срезы через 150-200 мкм. После этого определяют суммарную площадь костной ткани, образованной за период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную площадь костной ткани во всех шлифах. Затем находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной ткани. Применение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравнению с прототипом за счет оценки объемной скорости образования кости. Ј (Г.

СОЮЗ СОВЕТСНИК

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

{51)5 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

907 и 3 смены абсолютного спирта r o

24 ч в каждой смене).

Образец заключают в метилметакрилат, проводят через следующие смены по 24 ч в каждой: 1/2 абсолютный спирт — 1/2 стабилизированный метилметакрилат (мономер): три смены стабилизированного метилметакрилата (мономера): предполимеризованный метилметакрилат:свежий предполимеризованный метилметакрилат в форме для затвердевания. В этой среде образец помещают на 2-3 сут в термостат при температуре 37 С, располагают в цент-. о ре будущего блока в вертикальном положении, на две формьг, исследуемой стороной вниз.

Готовыйг блок обтачивают, придавая ему форму цилиндра диаметром

Ж

OC

Ж е,)

4-1 ба.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

f10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4708760/14 (22) 26.06.89 (46) 15,10.91.Бюл. К 38 (71) 2-й Г1осковский государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) В.П.Тутатчиков, И.И.Новиков и А.С.Пыпаев (53) 615.475 (088.8) (56) Lee И,R Т.Anatomy, 1964, v.98. у 4, р ° 665-617. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ

ОБРАЗОВАггИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии. Цель — повышение точности способа. С этой целью животному вводят костный маркер, образец костной

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии.

Цель — повыпение точности спосоСпособ осуществляют следующим образом.

Иивотному внутривенно дважды вводят тетрациклин гидрохлорид в дозе

20 мг/кг веса животного с интервалом 10 дней. Через 3 дня после второй инъекции извлекают кость и выпиливают из нее поперечный срез толщиной

2 мм.

Образец фиксируют 1 сутки в 60Хном спирте. Образец инкубируют в

5Х-ном растворе основного фуксина в

602-ном спирте в течение 1,0-1,5 ч, затем обезвоживают в батарее спиртов восходящей концентрации (70K, „„SU„„1684674 ткани экспериментального животного инкубируют в течение 1-1,5 ч в 57-ном растворе основного фуксина в 602-ном этиловом спирте. Затем готовят серийно срезы через 150-200 мкм. После этого определяют суммарную площадь костной ткани, образованной эа период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную площадь костной ткани во всех шлифах. Затем находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной ткани ° Применение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравнению с прототипом

C) за счет оценки объемной скорости образования кости.

1604674

5-7 см и высотой 1 см. 11зучаемую сто-рону блока шлифуют на шпифовальном круге для выделения поверхности шлифа и получения параллельности поверхнос- 5 тей блока. Параллельность поверхностей констролируют путем измерения толщины блока в трех равноудаленных точках у его краев.

Поверхность кости полируют на !О фотобумаге до исчезновения царапин.

Микроскопируют поверхность кости под флюоресцентным микроскопом с возбуждаюцим фильтром (максимум пропускания в диапазоне 420-460 нм) и барьер- 15 ным фильтром (максимум пропускания

520 нм).

При увели енин микроскопа 60х фотографируют все участки костной ткани, заключенные между двумя полос - 20 ками маркера, и определяют их площадь путем накладывания сетки и подсчета квадратов, приходящихся на эту кость, Квадраты, частично занятые к;с-,ью, считают как 0,5 квадрата. 25

При увеличении микроскопа 10х с чомощью сетки, встроенной в окуляр или наложенной на поверхность образна. определяют общую площадь костной ткани шлифа пугем подсчета квад- 30 ратов, приходящихся на кость. Квадраты, частично занятые костью, считаiclT как 0,5 квадрата.

Пл»»фуют, контролир-,я параллельность поверхнс стей, и затем полируют поверх-ность блока, с тем чтобы получить последующ»»й шлиф кости, расположенный на расстоянии 150--200 MKM от предь»дущего.

Аналогичныи способом исследуют 40 заданное количество серийных поверхностей (эадаьп»ый обьем костной тка-ни).

Суммируют площади нонообразонанной кости всех шпифов. 45

Суммируют площади костной ткани всех шпифов.

Скорость образования костной ткани определяют из отношения полученных показателей, Пример 1. животному внутривенно вводят тетрациклин гидрохлорид из расчета 20 мг/кг веса, Через 10 сут повторно вводят гакую же дозу тетра.циклина гидрохлорггда. Через 3 сут

5 извлекают поперечный срез середины диафиза праной малой берцовой кости толщиной 2 мм и фиксируют его в

60,-ном спирте н течение суток. Далее инкубируют его в 5%-I»oM pace»»opel основного фуксина в 60%-ном спирте в течение часа и заключают в метилметакрилат. Для этого образец последовательно проводят через следующие среды: 70%-ный спирт, 90%-ный спирт, три смены абсолютного спирта, 1/2 абсолют-. ного спирта — 1/2 стабилизированного метилметакрилата (мономера) . три смены стабилизированного метилметакрилата (мономера), предполимериэованный метилметакрилат, свежий предполимеризованный метилметакрилат в форме, соответствующей будущему блоку. Р каждой смене перед окончательным помещением н форму для затвердения образец находится в течение суток.

3атнердевание происходит в течение

2-3 сут в термостате при 37 С, После этого затвердевший блок извлекают из формы, обтачивают его для придания формы цилиндра диаметром 5-6 см и высотой 1 см. Образец располагается в середине блока, причем его изучаемая поверхность примыкает к одной из поверхноcreA блока. Эту поверхность

«JIoKR шлифуют на шлифовальном круге

I для получения ее параллельности с противоположной поверхностью и выделения костной понерхности. Параллельность поверхностей контролируется измерен»»е»» толщинь» блока в трех равноудаленных точках у cro краев, После

"-того полируют костную поверхность на фотобумаге до исчезновения цараг,ин и проводят микроскопию костной

;.оверхности под флюоресцентным микро скопом при падающем освещении. При

=-том фотографируют все участки кости, =-аключенные между полосками маркера, гри увеличении микроскопа 60х. На фотографиях при увеличении 240х определяется площадь кости, заключенной межлу полосками маркера, путем наложения сетки и подсчета квадратов сетки, риходящихся на нее. Площадь но1 ообразован»»ой кости данного шпифа составляет 0,22 мм . При микроскопии при увеличении микроскопа 10х с помощью сетки, встроенной в окуляр, определяют площадь костной ткани путем подсчета квадратов сетки, приходящих ся на кость. Площадь кости составляет 7,41 мм .

Далее шлифуют и полируют поверх» ость блока, с тем чтобы IT лучить сне;;ующий шлиф кости, расположенный;»а расстоянии 1.50 MKM от IipeqIIII;znего. По1 3мм рость костеобразования:

37,3 мм

0,035, или 3,5Х. Таким образом, кость, сформированная эа 100 дней составляет 3,5 . в обг(ем объеме кости. нению с прототипом за счет оценки объемной скорости образования кости. формула и з обретения

Составитель А. Бобров

Редактор А,Маковская Техред М.Моргентал Корректор Н Ревская

Заказ 3502 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина,101

5 .16846 лученный шлиф исследуют как опипано выше. Площадь новообразованной кости в нем составляет 0,27 мм, а общая площадь кости — 7 50 мм . Аналогичф °

5 ным способ м получают и исследуют

r еще 18 шлифов проходя таким образом 1 мм длины кости.

Суммарная площадь костной ткани, образованной за период между введе- .10 ниями маркера во всех шлифах, составила 5,41 мм . Суммарная площадь костной ткани во всех шлифах — 150,01 мм"-.

Скорость образования костной ткани определяют путем нахождения отноше- 15 ния между полученными показателями (она составила 0,036).

П р и и е р 2. Животному внутривенно вводят тетрациклин гидрохлорид иэ расчета 20 мг/кг веса. Через

10 сут повторно вводят такую же дозу тетрациклина гидрохлорида. Через

3 сут извлекают поперечный срез сере-дины диафиза правой малой берцовой кости толщиной 2 мм, фиксируют его в 60 -ном спирте в течение суток, инкубируют в 5 -ном растворе основного фуксина в 60%-ном спирте в течение 1,5 ч и заключают в метплметакрилат. Дистальную поверхность среза 30 поэтапно шлифуют. Поверхности шлифов изучают с помощью флюоресцентного микроскопа. Расстояние между соседними шлифами составляет 200 мкм. Всего исследуют 5 шлифов, что соответствует толщине среза кости 1 мм. При микроскопии каждого шлифа фотографируют костную ткань, заключенную между двумя полосками маркера (т.е. кость, сформированную за период меж- 40 ду введениями маркера). Площадь сформированной кости определяют на фотографиях с помощью сетки. Кроме этого, для каждого шлифа при малом увеличении микроскопа с помощью сетки, встро- 45

74 6

-енной в окуляр, определяют площадь костной ткани ° Площадь костной ткани равна разности общей площади среза кости и площади костно-мозговой полости.

Суммарная площадь образованной за

10 дней кости для изученных шлифов составила 1,3 мм, а суммарная площадь костной ткани — 37,3 мм . Ско1

Применение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравСпособ определения скорости образования костной ткани, включающий введение экспериментальному животному маркера н оценку его отложения, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, об™ разец констной ткани инкубируют в течение 1,0-1,5 ч в 5 -ном растворе основного фуксина в 60 -ном этиловом спирте, готовят илифы серийно через

150-200 мкм, определяют суммарную площадь костной ткани, образованной эа период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную площадь костной ткани во всех шлифах, находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной ткани.