Способ получения антикокцидийного препарата на основе омомицина

 

Изобретение относится к ветеринарии и может использоваться в борьбе с кокцидиозами сельскохозяйственных животных и птиц. Цель изобретения - повышение качества препарата. Используют антикокцидийный препарат на основе омомицина путем культивирования Streptomyses chromopurpureus subsp. chlketamanus subsp. nov. На жидких питательных средах, отделения и высушивания мицелия и экстракции из него смесью петролейного эфира с хлороформом в соотношении 3 - 4 : 1 целевого продукта из мицелия с последующими хроматографической очисткой на кремневой кислоте, концентрированием элюатов, обработкой их водным раствором 1 н. NaOH и высушиванием. Выход натриевой соли омомицина составляет 50 - 60%. Препарат способствует снижению заболеваемости животных и птицы от кокцидиодза, увеличению прироста живой массы. 3 табл.

Изобретение относится к ветеринарии и может использоваться в борьбе с кокцидиозами сельскохозяйственных животных и птицы. Цель изобретения повышение качества препарата. П р и м е р 1. От 10 л культуральной жидкости, полученной в процессе культивирования Streptomyces chromopurpureus subsp. chiketamanus subsp. nov. содержащей 2000 мкг/мл омомицина, отделяют мицелий центрифугированием или фильтрованием и высушивают в сушке с псевдоожиженным слоем при 50^оС в течение 24 ч. Получают 400 г сухого мицелия, к которому добавляют 1200 мл смеси петролейного эфира (т.кип. 70-100^оС) с 20% хлороформа и экстрагируют при помешивании в течение 24 ч при комнатной температуре, после чего мицелий отделяют и повторно экстрагируют 1200 мл экстрагента. Экстракты объединяют, концентрируют в вакууме до 200 мл и вносят в колонну с водной кремниевой кислотой (Н 100 см, d 5 см). Сорбент промывают 2000 мл хлороформа для удаления жирных примесей и антибиотик элюируют смесью хлороформа с этилацетатом (20: 1). Элюат собирают фракционно по 200 мл. Анализ фракций проводят с помощью ТСХ на пластинках "Силуфол" (Кавальер, ЧССР) в системе растворителей бензол-ацетон (10:1). Антибиотик обнаруживают по поглощению в УФ-свете при 254 нм или проявлением 1% -ным раствором KMnO₄ (коричневое окрашивание). Фракции, содержащие омомицин, объединяют, растворитель удаляют выпариванием в вакууме, остаток растворяют в 200 мл хлороформа и обрабатывают равным объемом щелочи, добавляя 200 мл 1 н. NaOH, и встряхивают в делительной воронке до насыщения фаз растворителей. После расслоения фаз хлороформный слой, содержащий Na-соль антибиотика, отделяют, обезвоживают добавлением безводного сульфата натрия, фильтруют через бумажный фильтр и высушивают в распылительной суше. Получают 12,5 препарата натриевой соли омомицина, содержащего 80% антибиотика, остальное неактивные, нетоксичные вещества (смесь непредельных сложных эфиров, зола, вода). Выход 50% П р и м е р 2. От 10 л культуральной жидкости, полученной аналогично примеру 1, содержащей 2500 мкг/мл омомицина, отделяют и высушивают мицелий как в примере 1. Экстракцию антибиотика из высушенного мицелия проводят смесью петролейного эфира с 30% хлороформа, хроматографическую очистку и получение Na-соли осуществляют по примеру 1 за исключением стадии высушивания конечного продукта, которую проводят упариванием хлороформного раствора в вакууме при 50^оС до образования порошкообразной массы, которую затем помещают в вакуумсушильный шкаф и выдерживают при 50^оС 3 ч до полного удаления растворителей. Получают 17,8 г препарата натриевой соли омомицина, содержащего 84% антибиотика, остальное неактивные, нетоксичные вещества (смесь непредельных сложных эфиров, зола, вода). Выход 60% П р и м е р 3. От 10 л культуральной жидкости, полученной аналогично примеру 1, содержащей 2000 мкг/мл омомицина, отделяют и высушивают мицелий по примеру 1. Экстракцию антибиотика из высушенного мицелия проводят смесью петролейного эфира с 25% хлороформа, хроматографическую очистку и получение Na-соли осуществляют по примеру 1 за исключением стадии высушивания конечного продукта, которую проводят методом лиофильной сушки. Для этого хлороформный раствор Na-соли омомицина упаривают в вакууме до удаления растворителя, остаток растворяют в 200 мл дистиллированной воды и высушивают лиофильно. Получают 12,8 г препарата омомицина натриевой соли, содержащего 86% антибиотика, остальное неактивные, нетоксичные примеси (смесь непредельных сложных эфиров, зола, вода). Выход 55% П р и м е р 4. Берут 5 групп ягнят-аналогов по 12 голов в каждой массой 20-20,5 кг, спонтанно инвазированных эймериями. Для приготовления лекарственной смеси рассчитывают дозу антибиотиков на 1 т концентрированного корма (контрольная группа ягнят не получает никаких препаратов). Опытным группам вводят омомицин Na-соль или монензин. Ежедневно в течение трех дней ягнят обследуют копроскопически. Антибиотики вводят в различных дозировках по схеме (табл.1) после установления фона зараженности ягнят кокцидиями. Через каждые семь дней ягнят трехкратно обследуют копроскопически. Результаты копроскопического исследования, представленные в табл.2, свидетельствуют о хорошей эффективности омомицина Na-соли против инвазии эймериями. Получена высокая эффективность препарата в группе ягнят, получавших омомицин Na-соль в дозе 20 ppm. Через 30 дней у ягнят этой группы снижается интенсивность инвазии на 85,9% против 49,1% в контроле и 78,3% в группе, получавшей монензин. Омомицин-Na-соль в дозе 20 ppm по своей интенсэффективности превышает монензин в той же дозировке. Кокцидиостатическую эффективность химкокцида (контроль) и омомицина-Na-соли определяют путем копрологических исследований в 2-4-6-8-недельном возрасте бройлеров. Интенсивность инвазии в 1 г помета бройлеров (тыс. экз. ооцист) при спонтанном эймериозе определяют по ГОСТ 25383-82. Результаты исследований представлены в табл.3. Результаты исследований показывают, что количество ооцист кокцидий в помете бройлеров, получавших омомицина-Na-соль составляет 48,2-42,0-68,1% от числа ооцист кокцидий в помете бройлеров, получавших химкокцид. Положительное действие омомицина-Na-соли отмечают при спонтанном кокцидиозе утят. Омомицин-Na-соль (82%), вводимая в корм утятам в дозе 200 ppm в течение 9 дней снижает общую инвазию кокцидиями на 20-25% при этом живая масса опытных утят увеличивается по сравнению с контролем на 5,7% В проведенных опытах на кроликах, спонтанно инвазированных эймериями, также установлено, что препарат омомицина-Na-соль (85% основного вещества, остальное неактивные, нетоксичные вещества) в дозе 5 г/т корма при пятидневном курсе снижает экстенсивность инвазии кроликов эймериями на 30-32% в дозе 10 г/т на 78-79% и в дозе 20 г/т на 80-81%). Таким образом, омомицин-Na-соль является препаратом с выраженным антикокцидийным и ростстимулирующим действием.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИКОКЦИДИЙНОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ОМОМИЦИНА путем культивирования Streptomyces chromopurpureus subsp.chiketamanus subsp.nov. на жидких питательных средах, отделения и высушивания мицелия и экстракции из него растворителем целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения качества препарата, в качестве растворителя для экстракции используют смесь петролейного эфира с хлороформом в соотношении 3 4 1, а после экстракции целевого продукта из мицелия проводят его хроматографическую очистку на кремниевой кислоте, концентрирование элюатов, обработку их водным раствором 1 н. NOH и высушивание.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2