Способ получения пентасахарида
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (й) СО0А (21) 3545151/04 (22) 14.01,83 (46) 23,11,91. Бюл. N 43 (31) 82/01575, 82/09392, 82/10804 (32) 01.02.82, 28.05.82, 06,08.82 (33) FR (46) 23.11,91. Бюл, N 43 (71) Шоай С.А, (FR) (72) Морис Петиту, Жан-Клод Жакине, Пьер Синаи, Жан Шоай, Ман-Клод Лормо (FR) и Махмуд Насер (EG) (53) 547.458,413,07(088,8) (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕНТАСАХАРИДА общей формулы OR СОО ОН ОН 0- ОР УО ОА 1 ОН qqR OR МНН он -о 0оо î oR он OR XHR где OR — группа ОН или.ОЯОз; R — атом водорода или группа ЯОз, в виде натриевой соли, отличающийся тем, что осуществляют реакцию конденсации дисахарида общей формулы где Ор — ацил для положений, предназначенных для сульфатирования, или бензил для положений, в которых группа ОН должна быть освобождена; Z — йз-азидогруп па; А — низший алкил; X — атом галогена; Т вЂ” монохлорацетил, с дисахаридом общей формулы » . Ы 1694065 А3 р где Ор и А имеют укаэанные значения; Z — бенэилоксикарбониламиногруппа, в среде органического растворителя типа дихлорзтана в присутствии трифторацетата серебра и симм-коллидина при температуре — 20 С = последующим постепенным повышением температуры и окончанием процесса при комнатной температуре с выделением образовавшегося тетрасахарида, в котором удаляют группу T действием тиомочевины в среде зтанола при температуре 100 С, а модифицированный тетрасахарид конденсирук)т с производным общей формулы где О>, X u Z имеют укаэанные значения, в условиях указанной выше конденсации с выделением пентасахарида, в котором удаляют группы ацила омылением раствором щелочи, с последующим повторным введением группы А, удаленной при омылении, действием алкилирующего агента типа диазометана, далее сульфатируют освобождение гидроксильные группы комплексом триметиламин/ЯОз в диметилформамиде при температуре 50 С, гидрируют бензиль- ные группы и группы Z и Z соответственно до группы OH u NH в присутствии палладиевого катализатора в атмосфере водорода, сульфатируют аминогруппы действием 1694065 08 — 0 — 0 uR OH . 0R NHR 10 сульфатирующего средства типа указанного выше при рН 9,5 в водной среде с последующим омылением группы А и выделением целевого продукта в виде натриевой соли на ионообменной смоле в натриевой форме. Приоритет по признакам: Ф» ъд;„ „ ,1 . -4М Ф,. Ф >». Е ф О Изобретение 6тносится к способу получения олигосахаридов, фрагментов мукополисахаридных кислот, в частности к способу получения пентасахарида общей фоPMynы R С00 OR 0 OB 0 (ОВ У— ! HR OR NHR где OR — группа 0Н или ОЯОз, R — атом водорода или группа ЯОз,, в виде натриевой соли, Целью изобретения является получение природных фрагментов мукополисахаридных кислот использованием химических реагентов заданной структуры, содержащих активные группы, способные к реакции гликозилирования, а также блокирующие группы, позволяющие вводить функциональные группировки, Пример 1. Получение дисахарида 20 общей формулы (II) или 1-бром-3,6-ди-0-ацетил-2-азидо-4-0-(метил-(2,3-ди-О-бензил-40-хлорацетил - P -D-глюкопиранозил) уронат - а -D-глюкопиранозида. а) Получение аллил- а -О-глюкопиранозида (соединение 1). Раствор газообразного хлористого водорода (18 г) в аллиловом спирте (600 мл) нагревают до 70 С, Затем добавляют безводную глюкозу (300 г) и выдерживают 3 ч при этой температуре. За течением реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) в смеси метанол/хлороформ (1/4 по объему). Полученный спустя 3 ч коричневого цвета раствор концентрируют досуха под вакуумом, нейтрализуют концентрированным раствором аммиака (50 мл), затем снова концентрируют досуха. К полученному остатку добавляют ацетон (500 мл), доводят до кипения и выдерживают до полного растворения, После охлаждения жидкость декантируют. Остаток снова подвергают такой же обработке вплоть до тех пор, пока 01.02.82 при синтезе дисахарида (ill), 28.05.82 при конденсации моносахарида И с глюкуроновой кислотой, 06,08.82 при синтезе дисахарида (II), взаимодействии дисахаридов (II) и (III), пon учении пентасахарида(1). TCX экстракта не покажет истощение состаЭ ва остатка производным 1 или слишком сильное загрязнение экстракта примесями. Часть экстрагированной первой фракции (12 г) хроматографируют на двуокиси кремния. Рекуперируют производное 1, которое может быть кристаллизовано из смеси ацетон/эфир (6,5 г, т.пл, 95-99 С). Остаток продукта может быть очищен тем we способом. б) Блокирование положений 4 и 6 аллильрого производного, приводящее к аллил-4.60-бензилиден- а -О-глюкопиранозиду (соединение 2). Соединение 1 (37 r) растворяют в диметилфармамиде (200 мл), Доба вл я ют диметокситолуол (41 г) и вслед за этим гидратированную и-толуолсульфокислоту (130 мг). Через 2 ч нагревания на водяной сане под вакуумом и при наличии флегмы реакция заканчивается. TCX в смеси метанол/хлороформ (2/25 по обьему). Растворитель выпаривают, Сироп растворяют s метаноле (минимальное количество), этот раствор выливают по каплям в водный раствор бикарбоната натрия {6,3 г в 320 мл воды). Полученный осадок перекристаллизовывают из этанола (21 г, т,пл, 120-121 С). В маточные растворы дают еще продукт 2. Общий выход 37 r (71,4®, в) Введение бенэильной группы, приводящее к аллил-2.3-ди-0-бенэил-4,6-0-бензилиден- и -Э-глюкопиранозиду (соединение 3), Соединение 2 {45 r) растворяют в без; Водном диметилформамиде (500 мл). Добавляют гидрид натрия (18 г 50 -ной дисперсии в масле). Спустя 30 мин смесь охлаждают до 0 С и добавляют па каплям бромистый бензил (52 мл), За реакцией следят с помощью TCX (эфир/гексан, 1/1 по объему). Затем медленно добавляют метанол (150 мл), выпаривают досуха и извлекают хлороформом. Хлороформную фазу промывают водой, сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток кристаллизуют из смеси. эфир/гексан (36,5 г, т.пл. 83 — 84 С). Этот продукт слегка загрязнен примесью, мигрирующей вверх в ТСХ (эфир/гексан, 1/1 по объему). 55 r) Удаление бензилиденовой группы, приводящее к аллил-2,3-ди-О-бензил- a -Dглюкопиранозиду (соединение 4), К раствору соединения 3 (56 r) в метаноле {1 л) добавляют воду (450 мл), затем гидратирова н ную и-толуолсул ьфокислоту (17 r). Спустя 2 ч при 80 С смесь оставляют охлаждаться, растворитель выпаривают и остаток растворяют в хлороформе (1 л). Хлороформный раствор промывают водой вплоть до нейтрального значения рН, затем сушат над сульфатом натрия. Таким образом получают сироп светло-желтого цвета (48 г), который используют для синтеза соединения 5, д) Введение трифенилметильной группы в положение 6 с последующей реакцией ацетилирования положения 4, что приводит последовательно к аллил-2,3-ди-О-бензил-6О-трифенилметил-a -D-глюкопиранозиду (соединение 5) и его 4-О-ацетилированному аналогу (соединение 6а), Полученное производное 4(48 г) растворяют в пиридине (250 мл) и добавляют трифенилметилхлорид (38,5 r), Спустя 1 ч при 100 С реакция заканчивается (ТСХ, эфир/гексан, 1/1 по объему). К предыдущему раствору добавляют уксусный ангидрид (200 мл). Спустя ночь реакция заканчивается (ТСХ, эфир/гексан, 1/2 по обьему). Выпаривают досуха, остаток растворяют в хлороформе (500 мл), промывают хлоооформную фазу 10 -ным раствором бисульфата калия, водой и высушивают над сульфатом натрия. Хлороформ выпаривают. Получают соединение ба, которое используют для получения соединения 7а. е) Удаление трифенилметильной группы, приводящее к алл ил-4-0-ацетил-2,3-ди-О-бензил- а -D-глюкопиранозиду (соединение 7а). Полученное производное ба растворяют в хлороформе (500 мл). В этот раствор, охлажденный до О С при перемешивании, прикапывают раствор трехфтористого бора в метаноле (20 Д-ный, 120 мл). За реакцией следят. с помощью ТСХ (толуол/ацетон, 10/2 по объему). Реакционную смесь переливают в делительную воронку. Хлороформ, ную фазу промывают водой (2x100 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия, затем водой до нейтрального значения рН. После высушивания и выпаривания полученный остаток вводят в колонку с силикагелем (500 r), уравновешенным в толуоле, После элюирования большинства примесей чистым толуолом продукт элюируют смесью толуол/ацетон (10/2 по объему), Таким образом получают 48 г соединения 7а, которое непосредственно вводят в синтез соединения 8а. Часть соединения 7а 45 получают в чистом виде, (а jp =+11 (хло2G и роформ). Его ИК- и ЯМР-спектры, как и элементный анализ, подтверждают структуру. ж) Окисление спиртовой первичной группы в положении 6, приводящее к аллил4-0-ацетил-2,3-ди-О-бензил- a -D-глюкопиранозилуроновой кислоте (соединение 8а), Раствор соединения 7а (48 r) в ацетоне (300 мл} охлаждают до — 50 С. Затем прикапыяают раствор трехокиси хрома (30 г) в серной кислоте {3,4 М, 125 мл). Смесь оставляют стоять для повышения температуры до камнатнсй. Реакцию контролируют с помощью TCX (метанол/хлороформ, 1/10 по объему). По окончании реакции реакционную смесь выливают в воду (500 мл). Продукт экстрагируют хлороформом (3x250 мл). Хлороформную фазу промывают водой до нейтрального значения рН, сушат над сульфатом натрия и концентрируют досуха. Полученный сироп (83 г) используют для получения соединения 9а. 3) М тилирование карбоксильной группы в положении 6, приводящее к метил-(аллил-40-ацетил-2,3-ди-0-бензил- а -0-глюкопиранозоил)-уронату (соединение 9а). Полученный s стадии получения соединения Оа сироп растворяют в эфире (300 мл). Затем добавляют эфирный раствор диазометана вплоть до исчезновения соединения Яа (ТСХ, эфир/гексан, 1/1 по объему). После подкисления уксусной кислотой растворители выпаривают. Полученный остаток (53 r) растворяют в горячем этаноле. Производное 9а вь кристаллизовывается при охлаждении. После перекристаллиэации получают соединение 9а (13,4 г), т.пл. 85— 86 С ja )в =+12 (c=1,2, хлороформ). Этот продукт охарактеризован ИК-, ЯМР-спектрами и элементным анализом. Из фильтрата после кристаллизации получают еще 7,6 г соединения 9а. Общий выход соединения 9а из соединения 2 составляет 38;/ . и) Введение пропенильной группы в положение 1, приводящее к метил-(проп-1е н ил-4-О-а цет ил-2,8-ди-О-бензил- а-D- люкопиранозил)-уронату (соединен,.е 10а). Производное 9а (4г) растворяют в смеси этанола (119 мл) с бензолом (52 мл) и водой (17 мл). Затем добавляют диазабициклооктан (170 мг) и доводят до кипения с обратным холодильником. К кипящему раствору. добавляют хлорид трис-(трифенилфосфин)радия-1 (550 мг}. Кипение поддерживают 4 ч (TCX. эфир/гексан, 1/1 по объему). По окончании реакции раствор фильтруют и растворители удаляют. Остаток хроматографируют на силикагеле (150 г) в смеси этилацетат/хлороформ (1/50 по объему), Получают соединение 10а (3,25 r, 81%), которое кристаллизуют иэ этанола, f а)о =+12 (с=1, хлороформ); т,пл. 90 С. Структура подтверждена элементным анализом и ЯМР- и ИК-спектрами. к) Удаление ацетильной группы в положении 4, приводящее к метил(проп-1 -енил-2,3ди-0-бенэил- а -О-глюкопиранозил)-уронату (соединен ие 13), Производное 10а (350 мг) растворяют в метаноле (5 мл). Добавляют метилат натрия (0,2 мл, 2M), После выдерживания в течение 1 ч. при комнатной температуре реакцию прекращают путем добавления смолы Dowex 50 в Н+-форме. После фильтрации получают продукт 13, загряз .енный небольшим количеством продукта, образующегося в результате a -P -отщепления. Согласно варианту стадии д вместо реакции ацетилирования реализуют реакцию бензоилирования, которая приводит к аллил-4-0-бенэил-2,3-ди-О-бензил-4-0-бензо ил-6-,0-трифенилметан- а- D-глюкопиранозиду (соединение 6б), из которого затем удаляют трифенилметильную группу, что позволяет получить аллил-4-0-бензоил-2,3ди-0-бензил-а-0-глюкопиранозид (соединение 7б). Эти реакции реализуются следующим образом, Получение соединений 6б и 7б. К пиридиновому раствору соединения 5 добавляют хлористый бензоил (1,5 экв.) и за реакцией следят с помощью ТСХ (этилацетат/бензол, 1/20 по объему), Избыток хлористого бензоила разрушают добавлением избытка метанола. После выпаривания досуха растворенный в хлороформе остаток промывают 10%-ным раствором бисульфата калия, водой, сушат и концентрируют досуха, Полученный сироп используют в синтезе соединения 7б, Этот сироп (105 r, получен из 80 r соединения 3} растворяют в хлороформе (300 мл). Добавляют и-толуолсульфокислоту (76 г моногидрата в 100 мл метанола), Спустя ночь реакция заканчивается (ТСХ, этилацетат/хлороформ, 1/20 по объему). Хлороформную фазу промывают водой до нейтрального значения рН, сушат и концентрируют досуха. Полученный сироп (98 г) хроматографируют на колонке с сипикагелем (1,2 г), элюируют хлороформом (0,6 л), затем смесью этилацетат/хлороформ (1/20 по объему). Таким образом получают чистое производное 7б (30 г), которое используют в стадии получения соединения 8б, Исходя из соединения 7б, можно окислять группу СН ОН в положении 6, затем вводить метильную группу в полу:-енную карбоксильную группу, получая последова5 тельность аллил-4-0-бензоил-2,3-ди-0-бензил- a-D-глюкопиранозилуроновую кислоту (соединение 8б) и соответствующий метиловый эфир (соединение 9б), Эти производные получают следующим 10 образом. Соединение 7б (27 г) обрабатывают, как укаэанд для 7а при получении 8а, Полученный по окончании обработки сироп содержит соединение 8б, которое метилируют 15 диазометаном (как для соединения 8а). Остаток от стадии метилирования очищают на силикагеле (200 г, эфир/гексан, 1/1) и получают соединение 9б (21 г, 77,5%}, Его ИК- и ЯМР-спектры подтверждают его структуру, 20 Исходя из производного 96, получают соответствующее пропенильное производное 10б, работая, как при получении ".Îà. Производное 13 получают, исходя из 10б согласно реакции, данной для получе25 ния 10а. Со гласно другому варианту получают аллил2,3-ди-0-бензил -О-глюкопиранозилуроновую кислоту и метил-(аллил-2,3-ди-0-бензил- -О-глюкопиранозил}-уронат(соединения 11 и 12), 30 Соединение 8б (1,9 г) растворяют в метаноле(40 мл). Затем добавляют 5 н. раствор гидроксида натрия в количестве, достаточном для того, чтобы иметь 1М концентрацию гидрокс. да натрия, За ходом реакции сле3..< pR T c по 0Li< hi<3 Г i ri (метанол /xлороформ, 1/4 по объему). Когда она заканчивается, добавляют воду (100 мл). Промывают эфиром, подкисляют и продукт экстрагируют эфиоом. Кислую эфирную фазу промывают 40 водой до нейтрального значения рН. Производное 11 не выделяют. Его метилируют эфирным раствором диазометана, получая соединение 12 (900 мг, 56%), которое затем очищают на колонке с силикагелем 45 (афир/гексан, 1/1 по объему). (a)p =+35,2 (с= l,3, хлороформ). Его ИК- и ЯМР-спектры и данные элементного анализа подтверждают его структуру. Таким хке образом производные 11 и l2 50 могут быть получены из 9а или 9б, Соединение 13 может быть получено из соединения 12 следующим образом. Производное 12 обрабатывают комплексом родил, как указано для 9а. Соедине55 ния 13 получают с выходом 90%. Оно охарактеризовано ИК- и ЯМР-спектрами, Более того, обработанное уксусным ангидридом (1 мл на 180 мг 9а), оно дает соединение 10а. 1694065 30 дисахарида 18 50 Согласно другому варианту производное 13 может быть получено из 10а или 10б, следуя методике, приведенной для получения соединений 17 из 9а или 9б. л) Хлорацетилирование соединения 13, приводящее к соединению 14, а именно к метил-(проп-1 -енил-2,3-ди-О-бензил-4-0хлора цетил-а -0-гл юко пир э нозил)-уро нату. 2,8 г соединения 13 растворяют в 30 мл пиридина (6,56 ммоль). После охлаждения до О С добавляют по каплям (10 мл) раствора 2 мл хлорацетилхлорида в 20 мл дихлорметана. Спустя 30 мин выпаривают досуха, остаток обрабатывают 200 мл хлороформа, промывают 10%-ным раствором бикарбонатэ калия, затем водой, сушат и концентрируют. Полученный сироп хромэтографируют на сил ика геле (200 г, зтилацетат/гексан, 1/3 по объему). Таким образом получают 2,7 г (80%) чистого соединения 14 в виде сиропа, (а)о =+2 (с=1,5; хлороформ). Элементный анализ и ЯМР-спектр подтверждают структуру соединения. м) Деблокирование аномерного углеродэ, приводящее к соединению 15 или к метил-(2,3-ди-О-бензил-4-0-хлорацетил- аО-глюкопиранозил)-уронату, 2,7 г (5,3 ммоль) производного 14 растворяют в 80 мл смеси ацетон/вода (5/1 по объему). Добавляют оксид ртути (3,1 г), затем раствор хлорида ртути (3,9 г) в ацетоне (27 мл). Спустя 5 мин соли отфильтровывают. После концентрирования досуха остаток обрабатывают хлороформом. Хлороформную фазу промывают 10%-ным раствором хлорида калия, затем водой. После выпаривания продукт кристаллизуют из смеси зтилацетат/гексан. Получают 2 r (80 Ятвердого вещества„т.пл. 105 — 107 С.; ( а) о = — 4,7 (с=1; хлороформ), Элементный анализ и ЯМР-спектр подтверждают структуру вещества. н) Бромирование аномерного углерода, приводяшее к соединению 16 или к метил(1-бром-2,3-ди-О-бензил-4-0-хлорацетил-аD-гл юкопиранозил)-уронату. 2г(4,30 моль) соединения 15 растворяют в 50 мл дихлорметана. Добавляют 4,8 мл (34,4 ммоль) симм-коллидина при О С, а затем диметиламмонийбромметиленбромид (17 ммоль). Через 4 ч смесь разбавляют 100 мл дихлорметана, затем выливают в ледяную воду, промывают ледяной водой и растворитель выпаривают. После хроматографирования на силикагеле (20 г, гексан/зтилацетат, 2/1 по объему) получают 2,06 г (90%) соединения 16 в виде сиропа,(а)о =+82,5 (c=1,5; хлороформ), Элементный анализ и ЯМРспектр подтверждают структуру соединения. о) Получение дисэхарида 18 или 3-О-ацетил-1,6-ангидро-2-азидо-4-0-(метил (2,3-ди -О-бензил-4-О-хлора цетил-P -0-гл ю ко п и ранозил)-уронат)- P-D-глюкопиранозы. Этот синтез основан на конденсации моносахридов 16 и 17. К раствору 870 мг (3,8 ммоль) соединения 17 в дихлорметэне добавляют 1 г осушителя, 0,6 r молекулярных сит 4 A в виде порошка и 0,525 г свежеприготовленного карбоната серебра. После перемешивания в течение 2 ч прикапывают при О С 670 мг (1,3 ммоль) соединения 16. Спустя 6 дней твердые вещества отфильтровывают. Полученный после концентрирования сироп хроматографируют на силикагеле (50 г, хлороформ/зтилацетат,4/1 по объему). Получают дисахарид 18 в виде пены (421 мг, 50%). (а )p =-17 (c=1; хлороформ), Элементный анализ подтверждает структуру, Изучение ЯМР-спектра подтверждает конфигурацию межгликозидной связи. и) Получение дисахаридов структуры 19 или 1,3,6-три-О-ацетил-2-азидо-4-0-(метил(2,3-ди-О-бензил-4-0-хлорацетил P-D-глюкопиранозил)-уронат)-0-глюкопирэнозы путем ацетолиза дисахарида, Получают дисахариды 19 ацетолизом 300 мг соединения 18 растворяют в смеси 4 мл уксусного ангидрида и 0,5 мл свежеперегнан ной трифторуксус ной кислоты. Реакционную смесь перемешивают 10 ч при 18 С, затем выпаривают досуха и выпаривают вместе с толуолом. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (15 г). Элюированием с помощью смеси дихлорме- тан/зтилацетат (19/1 по объему) получают 282 мг (86%) смеси аномерных ацетатов структуры 19 в виде бесцветного сиропа. Соотношение а - и Р -форм, определенное ЯМР-анализом, составляет 4/1. ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру. р) Получение дисахарида 20 общей формулы II бромированием дисахаридов 19, Раствор 140 Ml ацетатов 19 в смеси 3 мл дихлорметэна и 0,3 мл зтилацетата перемешивают при 17 — 18 С в атмосфере сухого эргона в присутствии 140 мг тетрабромида титана (примерно 2 зкв.) в течение 20 ч. После охлаждения до О С и разбавления 30 мл дихлорметанэ смесь промывают ледяной водой, затем 5%-ным водным раствором бромида калия, водой и сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с 1694065 силикэгелем (10 r). Элюировэнием смесью дихларметан/этилацетат (19/1 по объему} выделяют в порядке элюирования: бромид 20 формулы (11) (74 мг, 50%) в виде бесцветного нестабильного сиропа (немедленно вводят в следующую реакцию); ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру; фракцию (28 мг, 20%), соответствующую исходному непрореагировэвшему продукту; малоподвижную фракцию, соответствующую продуктам частичного 0-дебензилирования. Пример 2. Синтез моносахарида 22 или бензил-6-0-ацетил-3-0-бензил-2-бензилоксикарбониламино-2-деэокси-а-D ãëюкопиранозида. Суспенэию бензил-3-0-бензил-2-бензилоксикарбониламино-2-дезокси-а-D-глюкопиранозида (произвадное 21) (987 мг, 2 мМ) в безводном 1,2-дихлорэтане (15 мл) перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 30 ч в присутствии N-ацетиламидазола (2,5 мМ, свежеприготовленный). После охлаждения и разбавления хлорофавмом (50 мл) органическую фазу промывают ледяным раствором 1 M соляной кислоты, водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (50 г). Злюиравание смесью дихлорметан/ацетон (15/1 по абьему; дает производное 22 в виде сиропа, кристаллизующегося из смеси этилацетат гексан (759 мг, 71%}, т,пл. 114 — 115 С; (а)с> =+88 (с=1; хлороформ). Пример 3. Синтез моносахарида 33 или 3-0-бензил-D-метилидопиранураната, а) 63 г 3-0-бензил-1,2-0-изапропилиден-0-глюкофурэнозида (соединение 23) растворяют в 500 мл безводного пиридина. Добавляют 85 r трифенилметилхларида и нагревают при 80 С в течение 1 ч. Таким образом вводят тритильную защиту в положение 6 соединения 23 и получают соединение 24. (а )а = — 34,7 (хлороформ). Структура этого соединения подтверждена ИК- и ЯМР-спектрами, элементный анализ корректный, б) Смесь охлаждают до 0 С и добавляют 45 мл хлористого бензоила. Спустя ночь разлагают Избыток реагентов добавлением 300 мл метанола, полученную смесь, выпаривают досуха и обрабатывают хлороформом, Хлароформную фазу промывают водой, высушивают над сульфатом натрия и концентрируют. Таким образам дополнительно 3Г:, 4Q 55 вводят бензольную группу в положение 5 и получают соединение 25. в) Для снятия тритильной защиты полученный сироп растворяют в 400 мл хлоа.>форма, После добавления 100 мл 5 М раствора и-толуолсульфокислоты в метаноле раствор оставляют на ночь при 4 С. После промывки водой органической фазы получают 215 r смеси. Путем хроматографирования смеси на силикагеле(эфир/гексан, 2/1 по объему) получают 36 г соединения 26, (с)о =65.30 (хлороформ). Структура соединения 26 и.;твержденэ ИК- и ЯМРспектрами. г) Метилиравание карбаксильной функции в положении 6 соединения 26. Соединение 26 (1,88 r) растворяют в ацетоне (20 мл). При — 50 С прикапывают 3,5 мл раствора трехокиси хрома (13 г) в 3,5 М НгЯО4 (29 мл). Дают температуре поoûøàòüся и выдерживаю 1 ч в этих условиях. Затем реакционную смесь выливают на лед и продукт экстрагируют хлороформом. После промывки водой и высушивания выпаривают досуха, Получают соединение 27. Полученную смесь растворяют в метаноле (20 мл), затем добавляют 10 мл 1 н. раствора гидраксида натрия и оставляют на ночь при комнатной температуре, Реакционную смесь затем пропуска,от через колонку (25 мл) са смолой Dowex 50 в Н -форме, предварительна промытой метанолом. ПуТ8М концентрирования элюата получают соединение 28. Это соединение растворяют в эфире и метилируют классическим способам с помощью диазометана. Получают после выпаривания соединение 29 (1,08 г 70,4%), (г) а =-27 (хлороформ). Элементный 2О анализ соединения 29 корректный. Е ro структура, кроме тога, подтверждена ИК- и Я1ЛР-спектрами, д) Изомеризация ОН-группы в положении 5 соединения 29. К охлажденному до -20 С раствору трифтарметансульфанатного ангидрида (0,8 мл) в дихларметане (16 мл) прикэпывают раствор пиридина (0,8 мл) в дихлорметэне (8 мл), Затем при -10 С прикапывают 80 мг соединения 29, растворенного в дихлорметане (8 мл}. Спустя 1 ч при — 50 С реакционную смесь выливают в смесь воды со льдом (8 мл), содержащую 160 мг бикарбоната натрия. Перемешивают до разделения органической и водной фаз. Органическую фазу промывают 30%-ной соляной кислотой, водой, насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают, концентрируют и получают соединение 30. 169 4ОЬ Сироп обрабатывают диметилформамидом (10 мл). Добавляют трифторацетат натрия (1,6 г) и нагревают при 80 С в течение 3 ч. Таким образом получают соединение 31, После выпаривания обрабатывают дихлорметаном, полученный раствор промывают водой и высушивают. Остаток обрабатывают метанолом, затем растворитель спустя 1 ч выпаривают. После хроматографирования на колонке (эфир/гексан, 2/1) получают соединение 32(450 мг, 56,2%); (а)о = — 3 (хлороформ). Структура соединения подтверждена ИК- и ЯМР-спектрами. Элементный анализ корректен, е) Образование пиранового цикла соединения ЗЗ. Соединение 32 (200 мг) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты с водой (9/1). Спустя 15 мин растворители выпаривают. Остаток кристаллизуют из смеси этилацетат/гексан и получают 110 мг соединения 33, т.пл, 125 — 126 С, ИК-спектр (хлороформ) т, см; 3450 (ОН), 3080, 3060, 3080, (СН2:бензил) и 1740 (СООСНз). ЯМР-спектр(д, ТМС), м.д.: 3,75(синглет, ЗН+, СООМе), 4,98 (1 Н ), 7,30 (синглет, 5Н, С8Н8). (а) р =+130 (метанол). Вычислено, %: С 56,37; Н 6,08. С14 Н1807 Найдено, %; С 56,17; Н 5,85. Пример 4. Синтез производного 38 или 3-.0-бензил-4-0-хлор-ацетил-1,2-0-третбутоксиэтилиден-Р -L-метил идо и и ра нуроната. а) Реакция ацетилирования соединения 33, приводящая к 1,2,4-три-О-ацетил-3-0бензил- а- P --L-метилидопирануронатам (и ро из водн ы е 34 и 35). Раствор соединения 33 (3 г) в смеси безводного пиридина (20 мл) и уксусного ангидрида (10 мл) перемешивают при О С в присутствии влаги в течение 5 ч, Реакционную смесь выпаривают досуха, выпаривают с толуолом (4x20 мл) и высушивают под вакуумом. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (150 г), Элюирование смесью толуол/этилацетат (4/1 по объему) дает в порядке элюирования: фракцию головного соединения фурановых производных, соединение 34 (аномер а ), сироп (170 мг, (а )о20= — 43 (с=1; хлороформ), ЯМРспектр (СОС!з) д: 6,23 (синглет, 1Н, Н вЂ” 1); соединение 35 (аномерф), кристаллизующееся из смеси эфир/гексан (2,688 г, 63%), т.пл. 112 — 113 С, а о =+9 (с=1; хлороформ), ЯМР-спектр (СОС!з) д: 6,08 (дублет, 1Н, Н вЂ” 1), J >,2- 1 5 Гц). 3Q Аномеры а иP 34 и 35 не разделяются, если осуществляют непрерывный ряд описанных синтезов. Их смесь используют непосредственно в виде сиропа для последующих реакций, б) Реакция бромирования, приводящая к соединению 36 или 2,4-ди-О-ацетил-З-Обензил- a-L-метилидопирануронилбромиду. Смесь ацетатов 34 и 35 (212 мг; 0,5 мМ) растворяют в безводном дихлорметане (5 мл) и безводном этилацетате (0,5 мл). Тетрабромид титана (250 мг, 0,7 мМ) добавляют за один раз и реакционную смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре в отсутствие влаги. После охлаждения до О С и разбавления дихлорметаном органическую фазу промывают ледяной водой (3 раза), высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают для получения производного 36 в виде слегка окрашенного сиропа (217 мг, 96%). RMP-спектр (СОС!3) д: 6,41 (синглет, 1Н, Н вЂ” 1). Это соединение очень неустойчивое, его немедленно вводят в следующую реакцию. в) Получение ортоэфира 37 или 4-О-ацетил-З-О-бензил-1,2,0-трет-бутоксиэтилиденP-L-метилизопирануроната. Раствор бромида Зб (свежеприготовленный иэ 2,122 г, 5 ммоль смеси ацетатов 34 и 35 в безводном дихлорметане) (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере сухого аргона. Последовательно добавляют симм-коллидин (2,65 мл, 20 ммоль) и безводный трет-бутанол (3 мл, 30 ммоль) и реакционную смесь перемешивают 15 ч в этих условиях. После разбавления дихлорметаном (50 мл) органическую фазу промывают водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (120 г). Элюирование смесью гексан/этилацетат (2/1 по объему), содержащей 0,5% триэтиламина, дает соединение 37 в виде чистого сиропа (1,54 г, 70% из 34 и 35). (а) D =-23 (с=1; хлороформ), ЯМРспектр (CDClg) д: 5,48 (дублет, 1Н, Н вЂ” 1), J>,р= 2,5 Гц). rj Монохлорацетилирование ортоэфира 37. Раствор ортоэфира 37 (220 мг, 0,5 MM) в безводном метаноле (10 мл) охлаждают до -20 С при перемешивании s атмосфере сухого аргона, добавляют безводный карбонат калия (40 Mr) и реакционную смесь. перемешивают в течение 5 ч s этих условиях, Твердые вещества отсасывают. фильтрат выпаривают и остаток обрабатывают хлоро,1694065 формом (50 мл). Органическую фазу быстро промывают три раза ледяной водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток немедленно растворяют в безводном пиридине (4 мл) и безводном дихлорметане (2 мл). После охлаждения до — 20 C в атмосфере сухого аргона прикапывают раствор хлорацетилхлорида (0,1 мл, 1,24 ehË, свежеперегнанный) в безводном дихлорметане (1 мл), перемешивают 30 мин и выливают в смесь воды со льдом (100 мл). После перемешивания в течение 15 мин смесь экстрагируют хлороформом (3x20 мл), Органические фазы промывают ледяной водой, водным 2%-ным раствором бикарбоната натрия, водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток быстро хроматографируют на колонке с силикагелем (12 г). Элюирование смесью гексан/этилацетат (5/2 по объему), содержащей 0,2% триэтиламина, дает в порядке эл юи рован ия . насыщенное соединение 39 (15 мг, 8%, далее не используется), оотоэфир 38, сироп (145 мг, 61; из 12); (а) о =+19 (с=1, хлороформ), ЯМР (СВОЗ) д; 5,45 (дублет, 1Н, Н=1, J>,2=2,5 Гц); 5,24 (дублет-дублет, 1Н, Н вЂ” 4, дз, =2,5; Jq,ü=1,5 Гц); 4,00 (синглет, 2Н, CI — СН2 — СОΠ— ), который используется на следующей стадии. Пример 5. Синтез дисахарида 41 оащей формулы (III) или бензил-5-О-ацетил3-0-бензил-2-бенэилоксикарбониламино-2 -дезокси-4-0- (2-0-ацетил)-3-0-бен зил-а -I..метилидопирануронил)-а -D IRloKoïèðaíoзаида, a) Получение pисахарида 40 и ги бензил 6-О-ацетил-3-0-бензил-2-бензилоксикарбониламино-2-дезокси-4-0-(2 -О-ацетил)-3-0бензил-4-О-хлорацетил- а-(-метилидопирануронил)- а-о-глюкопиранозида, Раствор ортоэфира 38 (284 мг, 0,6 ммоль) и соединения 22 (214 мг, 0,4 ммоль) в безводном хлорбензоле (12 мл} нагревают при 140 С, перемешивании и легком токе сухого аргона, После медленной отгонки 10 мл растворителя в течение 30 мин прикапываат раствор перхлората 2,б-диметилпиридиния (0,006 ммоль, свежеприготовленный} в хлорбензоле (4 мл) с одновременной отгонкой растворителя (4 мл). Реакционную смесь перемешивают 1 ч с добавлением свежего растворителя (10 мл) и одновременной отгонкой таким образом, чтобы реакционный объем оставался постоянным и был равен 4 мл. После охлаждения и разбавления хлороформом органическую фазу промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой, высушивают над сульфатом 4Q натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силика.-.— лем (40 г), Элюирование смесью гексан/этилацетат (4/3 по объему) дает в г1:,рядке элюирования: продукт 22 (120 мг, 65%); дисахарид 40, кристаллизуюшийся из смеси ефир гексен (111 мг, 30 g), г.пс. 1СС145 С, (a)p =+35 (с=1; хлороформ}; ЯМРспектр (СООз} подтверждает ожидаемую с груктуру. б) Удаление монохлсрацегильной группы. Смесь дисахарида 40 (56 мг, 0,06 ммол ь) и тиомочевины (7 мг, О 1 ммоль) в пиридине (2,5 мл) и абсолютном этаноле (0.5 мг} перемешивают при 100OÑ в течение 30 мин. После охлаждения и упаривания досуха остаток обрабатывают смесью вода/хлороформ (1/1 по объему) (40 мл). Органическую фазу промывают водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют v выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (2 r), Элюирование смесью этилацетат/гексан (2/1 по объему) дает дисахарид 41 формулы (III), кристаллизующийся из эфира (46 мг, 30%), т.пл. 146-147 С: (a)p =44 С (с=1; хлороформ). ЯМР-спектр (СОС з) подтверждают ожидаемую структуру Пример 6. Синтез тетрасахарида 43, а} Реакция конденсации дисахаридов формулы (II) и (II!) (соединения 20 и 4";), Смесь 64 мг (80 ММ) свежеприготовленного бро иида 20, 51 мг (60 мк/M) срединения 41 и 80 мг молекулярного сита 4 А в виде порошк- в "..5 мл безводного дихлорэтана перемешивают 0,5 ч при комнатнсй температуре в атмосфере сухого аргона, затем охлаждают до -2ООC., Последовательно дооавляют 20 мл (150 мкмГ!ль) симм-коллидина и 31 мг.(120 мкмоль трифторацетата серебра. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при — 20 С, затем оставляют до повышения температуры до комнатной в течение 15 ч. После разбавления 50 мл дихлорметана твердые вещества отсасывают и фильтрат промывают водным ледяным раствором 1М cofl53HoA KMcJiQTtA, 3aTeM водой (Paa Pa3a}. Фильтрат высушивают над сульфатом натрия, фильгруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (8 r, гель 230-400 меш). Элюирсвание смесью гексан/этилацетат(4/3 по обьему) позволяет выделить 37 мг тетрасахарида 42 (выход 39%) в виде бесцветногп стекла, (a )lp =,:+ 56о (C=0,6: хлороформ); ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру. 1694065 18 с силикагелем (5 г; гель 230-400 меш). Элю- 45 ируя смесью гексан/эгилацетат(4/3 по объеМу), извлекают 30 мг (90 /,) пентасахарида 45 в виде бесцветного стекла, (а)р = 67 26 о {с=1; хлороформ), ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру. В частности для 50 аномерных протонов глюкозаминных единиц находят сдвиги (д, TiViC) 5,36 и 5,52 м..д, соответственно. б) Удаление ацетил ьн ых груп и из и роизводного 45. 55 Раствор 28 мг пентасяхаридя 45 в смеси 2,5 мл 1,2-диметоксиэтана и 0,8 мл метанола охлаждают до 0 С при перемешивянии. Затем добавляют 1 M раствор гидроксида натрия по каплям в течение 10 мин, Элюирование смесью этилацетат/гексан (2/1 по объему) позволяет выделить 23 мг (44%) исходного продукта 41. б) Реакция О-дихлорацетилирования. Раствор 36 мг (23 мкмоль) тетрасахарида 42 в смеси 1,25 мл пиридина и 0,25 мл абсолютного этанола нагревают 20 мин при 100 С в присутствии 7 мг (100 мкмоль) тиомочевины, После охлаждения и выпаривания досуха остаток обрабатывают 20 мл воды и экстрагируют хлороформом (5х5 мл). Органические фазы промывают 10%-ным водным раствором бисульфата натрия, водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают, Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (3 r), Элюируя смесью этилацетат/гексан (3/2 по объему), получают 27 мг (80%) производного 43 в виде бесцветного стекла, (a)p +61 (с=0,8; го о хлороформ): ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру, Пример 7. Синтез пентасахарида 50 общей формулы (i). а) Осуществляют реакцию конденсации между тетрасахаридом 43 и моносахаридом 44 общей формулы (И). Смесь 27 мг (54 мкмоль) бромида 44 формулы (! Ч), 26 мг (18 мкмоль) тетрасахарида 43 и 50 мг молекулярного сита 4 А я виде порошка в 0,8 мл дихлорэтаня пер мешивяют 0,5 ч при комнатной температуре в атмосфере сухого аргона, затем охлаждают до — 20 С. Последовательно добавляют 16 мл (120 мкмоль) симм-коллидина и 26 мг (100 мкмоль) трифторацетата серебра и реакционную смесь перемешивают 18 ч при повышении температуры до комнатной. После разбавления 50 мл дихлорметана твердые вещества отсасывают и фильтрат промывают охлажденным 1М водным раствором соляной кислоты, затем два раза водой. Высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток хромятографируют на колонке Реакционную смесь перемешивают 1 ч при 0 С, зятем 12 ч при комнатной температуре. Г1осле охлаждения до 0 С добавляют 3 мл 1 М соляной кислоты и молочного цвета смесь немедленно экстрагируют хлороформом {5х5 мл). Органические фазы промывают водой, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают. Остаток растворяют в 2 мл метанола и обрабатывают эфирным раствором диазометана (избытком вплоть до устойчивости желтого окрашивания) втечение 0,5 ч. После выпаривания досуха остаток хроматографируют на колонке с силикагелем {2 г, гель 230 — 400 меш). Элюирование смесью дихлорметан/метанол (15/1 по объему) позволяет извлечь 18 мг {72%) пентасахарида 46 в виде бесцветного стекла, (a)p =+57 20 о (c=1; хлороформ). Ожидаемая структура одтверждена ЯМР-спектром. в) Сульфатирование ОН-групп соединения 46, К рас вору соединения 46 (22 мг) в диметилформамиде (0,5 мл) добавляют комплекс триметиламина с 50з (22 мг, 2,5 экв. (ОН). Реакционную смесь нагревают при 50 С примерно 14 ч. Затем добавляют снова комплекс триметиламина с 50з (10 мг) и оставляют ня 24 ч. Добавляют в реакционную смесь метанол (0,5 мл) и хлороформ (0,5 мл). Раствор вводят В BBpxHlolo часть колончы с Сефадексом LH-20, уравновешенным в смеси хлороформ/метанол (1/1 по объему). Содержащие счльфатиравянный продукт фракции объединяют и растворитель выпарulBB!QT. Остя1ок в виде стекла (30 мг) хроматогряфируют на силикагеле (10 r) в растворителе, состоящем из 3 ч. смеси этиляц;-.тат/пиридин/уксусная кислота/вода (6/2/О, 6/1 по обьему) в 2ч. смеси этилацетят/уксусная кислота/вода (5/5/1/3 по объему, . Фракции, содержащие искомый продукт, обьединяют и концентрируют. После выпаривания растворителей полученный остаток растворяют в метаноле, к которому добавлена вода, затем пропускают через колонку с Dowex 50 wx 4, s N а -форме, уравнов-;.;. енныл. в смеси метанол/вода (50/50 по обьему). Таким образом получают натриевую соль (соединение 47). г) Гидрирование соединения 47. Вышеполученный продукт растворяют в метаноле {3,7 мл), к которому добавлена вода (0,8 мл). В этот раствор добавляют катализатор (Pd/С, 6%-ный, 40 мг) и перемешивают в атмосфере водорода в течение 5 дней. После отфильтровывяния катализатора УФ-спектр полученного раствора показывает полное ис«езновение 1694065 Составитель А.Шкуркин Техред M.Ìîðãåíтал Корректор О,Кундрик ! Редактор Н.Рогулич Заказ 4086 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 абсорбции, вызываемой бензильными группами, Тогда растворитель выпаривают и в остатке получают соединение 48. д) Сульфатирование NHz-групп, затем омыление карбоксильных, Соединение 48 растворяют в воде (4 мл), доводят рН до 9,5, после чего добавляют комплекс триметиламина с ЯОз (54 мг). Значение рН поддерживают равным 9,5 в течение всего процесса путем добавления 0,1 н. раствора гидроксида натрия, Спустя ночь, снова добавляют сульфатирующий агент (27 мг). Последнее добавление осуществляют спустя 24 ч. Через 48 ч добавляют раствор гидроксида натрия (ЗМ, 34 мл) к образовавшемуся соединению 49, затем раствор перемешивают в 3 ч при комнатной температуре, чтобы гидролизовать сложные метиловые эфиры звеньев типа уроновой кислоты. Реакционную смесь нейтрализуют, затем концентрируют до объема около 2 мл. Полученный раствор вводят в верхнюю часть колоннь с Сефадексом G 25 (Па+) (100 Mn), элюируя водой. Собранные фракции анализируют с помощью УФ- абсорбции (206 нм) и поляриметрии (265 нм), Обладающие оптической активностью фракции группируют, растворитель удаляют, остаток растворяют примерно в 2 мл воды и лиофилиэуют. Получают производное 50 общей формулы(1) в виде белого порошка (5,6 мг, 25 по отношению к продукту 45). ЯМР-спектр подтверждает ожидаемую структуру, В частности для аномерных протонов глюкоэаминных единиц находят сдвиги (д. TMC) 5,36, 5,45 и 5,52 м.д, 
