Препарат бактериофага клебсиелл поливалентный

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов и их применению. Цель изобретения - является разработка нового препарата бактериофага клебсиелл поливалентного для лечения клебсиеллезных инфекций. Для этого при терапии гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных бактериями клебсиелл, используют препарат, содержащий бактериофаги клебсиелл, активные в отношении 70 - 94% штаммов бактерий клебсиелл пневмонии,озены и риносклеромы, содержащий в 1 мл: бактериофаги клебсиелл пневмонии (0,5 - 1,0) · 10⁹ фаговых частиц; озены 0,5 - 1,0 · 10⁹ фаговых частиц; риносклеромы 0,5 - 1 · 10⁹ фаговых частиц; желатин 7,0 - 8,0 мг; хлористый натрий 7,2 - 7,4 мг; фосфорнокислый натрий двузамещенный двуводный 1,1 - 1,3 мг; фосфорнокислый калий однозамещенный 0,35 - 0,37 мг; хлористый магний 0,09 - 0,11 мг; вода - остальное. Препарат нетоксичен, эффективен при терапии экспериментальных клебсиеллезных инфекций, защитный эффект при заражении животных дозой бактерий 100 ЛД₅₀ составляет 80 - 100%. Препарат эффективен при лечении больных. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов и их применению. Известны бактериофаги для лечения гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных бактериями шигелл, сальмонелл, протея, стафилококка, синегнойной и кишечной палочки. Бактериофаги клебсиелл известны и используются в настоящее время только для типирования штаммов клебсиелл. Эти бактериофаги относятся к группе умеренных и не способы лизировать бактерии клебсиелл без образования фагоустойчивых мутантов, вследствие чего неэффективны при использовании их для лечения клебсиеллезных инфекций. Бактериофаги клебсиелл не используются в настоящее время для лечения клебсиеллезных инфекций, лечебных препаратов бактериофагов клебсиелл не существует (аналогов нет). Целью изобретения является разработка нового препарата бактериофага клебсиелл, поливалентного для лечения клебсиеллезных инфекций. Поставленная цель достигается тем, что для лечения клебсиеллезных инфекций используют препарат бактериофага клебсиелл поливалентный, включающий бактериофаги клебсиелл пневмонии KP 1, KP 2, KP 3, KP 4, KP 5, KP 6, KP 7, KP 8, KP 9, KP 10, KP 11, KP 12, KP 13, KP 14, KP 15, клебсиелл озены KO 16, KO 17, KO 18, KO 19, KO 20, KP 21, KO 22, KO 23, клебсиелл риносклеромы KR 24, KR 25, KR 26, KR 27, KR 28, KR 29, активные в отношении 70,0-94% штаммов бактерий клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы, содержащий, мг/мл: Бактериофаги клебсиелл пнев- монии (0,5-1,0)х10⁹ фаговых час- тиц озены (0,5-1,0)х10⁹ фаговых час- тиц риносклеромы (0,5-1,0)х10⁹
фаговых час-
тиц
Желатин 7,0-8,0
Хлористый натрий 7,2-7,4
Фосфорнокислый
натрий двузаме-
щенный двуводный 1,1-1,3
Фосфорнокислый
калий однозаме-
щенный 0,35-0,37
Хлористый магний 0,09-0,11
Вода Остальное
Впервые изучены биологические свойства вирулентных бактериофагов клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы, разработана технология получения препарата, схема и способ его применения. Существенным признаком описываемого препарата является наличие в нем стабилизирующей среды следующего состава, мг/мл: желатин 7,0-8,0; хлористый натрий 7,2-7,4; фосфорнокислый натрий двузамещенный двуводный 1,1-1,3; фосфорнокислый калий однозамещенный 0,35-0,37; хлористый магний 0,09-0,11; вода остальное. Приведенный состав стабилизирующей среды препарата обеспечивает изотоничность среды, оптимальный для биологических объектов pH среды в пределах 7,1-7,2, а также стабильность специфической антибактериальной активности препарата, препятствуя агрегации и инактивации фаговых частиц. В литературе перечисленные существенные признаки не описаны. Данный препарат является принципиально новым средством для лечения клебсиеллезных инфекций. П р и м е р 1. Биологические свойства бактериофагов клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы. Источником выделения бактериофагов клебсиелл служили сточные воды. В качестве тест-штаммов для выделения бактериофагов и последующего изучения биологических свойств бактериофагов используют клинические штаммы бактерий клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы. Бактериофаги клебсиелл пневмонии, вошедшие в состав препарата (15 штаммов бактериофагов), при размножении их на тест-штаммах гомологичного вида клебсиелл характеризовались латентным периодом размножения продолжительностью 15-22 мин, урожайностью в пределах 20-80 фаговых частиц из 1 инфицированной бактериальной клетки, константами скорости адсорбции (K) в пределах (0,7-5,4)˙10^-9 мл/мин. При рассеве на плотных питательных средах двухслойным методом Грациа они образовывали негативные колонии диаметром 0,5-2,0, 5,0-5,0 и 8,0-12 мм. Данные представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, для бактериофагов клебсиелл озены константа скорости адсорбции составляла (1,21-11,44)˙10^-9 мл/мин, латентный период размножения 20-30 мин, урожайность 20-80 фаговых частиц из 1 инфицированной бактериальной клетки. По морфологии негативных колоний бактериофаги клебсиелл озены также были сходны с вышеописанными бактериофагами клебсиелл пневмонии (см. табл. 1). Для бактериофагов клебсиелл риносклеромы константы скорости адсорбции находились в пределах (1,05-14,04)˙10^-9 мл/мин, латентный период размножения составлял 20-30 мин, урожайность 30-100 фаг. част./бакт. кл. (см. табл. 1). Бактериофаги клебсиелл пневмонии в количестве 15 штаммов, вошедшие в состав препарата, были активны и обеспечивали стабильный литический эффект в отношении 70-77,7% из 278 клинических штаммов гомологичного вида клебсиелл при определении методом Аппельмана с активностью 10^-4 и выше. Бактериофаги клебсиелл озены в количестве 8 штаммов, вошедшие в состав препарата, были активны в отношении 83,1-94% из 90 клинических штаммов клебсиелл озены с активностью по Аппельману 10^-4 и выше. Бактериофаги клебсиелл риносклеромы в количестве 5 штаммов, вошедшие в состав препарата, были активны в отношении 73,9-90% из 160 клинических штаммов клебсиелл риносклеромы с активностью по Аппельману 10^-4 и выше. Бактериофаги клебсиелл перечисленных видов были активны как в отношении антибиотикочувствительных, так и антибиотикорезистентных штаммов гомологичных видов и не обладали способностью к трансдукции детерминант антибиотикорезистентности чувствительным штаммам клебсиелл. П р и м е р 2. Способ получения препарата бактериофага, его биологические свойства и терапевтическая активность. Для культивирования бактериофагов клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы используют бактериофаги и тест-штаммы, перечисленные в примере 1. Для каждого штамма бактериофага используют свой тест-штамм (см. табл. 1). Бактериофаги клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы культивируют раздельно, затем объединяют и очищают от бактериальных клеток и балластных белков культуральной среды. Препарат бактериофага, полученный таким образом, содержит в 1 мл 0,5-1,0˙10⁹ фаговых частиц каждого вида бактериофага клебсиелл, 7,3 мл хлористого натрия, 1,2 мг фосфорнокислого натрия двузамещенного двуводного, 0,36 мг фосфорнокислого калия однозамещенного, 0,1 мг хлористого магния, 7,5 мг желатина и остальное вода. Для определения специфической антибактериальной активности препарата используют метод Аппельмана и клинические, выделенные от больных, штаммы клебсиелл. Препарат бактериофага клебсиелл поливалентный, полученный способом, описанным в примере 2, обладает активностью в отношении 70-72,2% штаммов клебсиелл пневмонии, 83,1-94% штаммов клебсиелл озены и 73,9-90% штаммов клебсиелл риносклеромы. Препарат содержит бактериофаги клебсиелл вышеперечисленных видов каждого в концентрации (0,5-1,0)˙10⁹ фаговых частиц в 1мл. Степень активности по Аппельману 10^-4 и выше (см. табл. 2). Препарат бактериофага клебсиелл поливалентный нетоксичен при введении однократно белым мышам и морским свинкам в дозе, превышающей максимальную разовую для человека в расчете на единицу массы соответственно в 3500 и 1000 раз (острая токсичность). Препарат бактериофага также нетоксичен при введении в объеме разовой человеческой дозы в пересчете на единицу массы в течение 20 дней белым мышам. Гибели животных, падения масса тела, патологических изменений внутренних органов как при изучении острой токсичности, так и хронической токсичности не отмечено. Для определения терапевтической активности препарата используют модель клебсиеллезного сепсиса у белых мышей, вызванного внутрибрюшинным заражением бактериями клебсиелл в дозе 10-100 ЛД₅₀. Через 24 ч после заражения бактериями клебсиелл на фоне дессиминации возбудителей проводится терапия ежедневно внутрибрюшинным введением препарата в объеме 0,1 мл при дозе (2,5-5)˙10⁹ фаговых частиц на 1 кг массы тела. Как видно из табл. 2, ежедневное применение препарата в течение 20 дней позволило получить защитный эффект 80-100% при заражении дозой 100 ЛД₅₀ в сравнении с контрольной группой нелеченных животных. При изучении специфической активности и реактогенности препарата, бактериофага клебсиелл поливалентного в соответствии с программой испытаний препарата, утвержденной Комитетом МИБП МЗ СССР, установлено, что ни у одного из 25 больных, леченных предлагаемым препаратом клебсиеллезного поливалентного бактериофага, не отмечено патологических реакций на его введение. Препарат был эффективен при лечении озены, хронического гнойного отита, хронического гнойного синусита, вызванных бактериями клебсиелл озены, пневмонии, риносклеромы. Применение препарата бактериофага клебсиелл поливалентного приводило к сокращению сроков выздоровления, к улучшению общего состояния больного, санации патологического очага, элиминации возбудителей из гнойного очага, подтвержденной бактериологическими анализами. Внедрение нового препарата бактериофага для лечения клебсиеллезных инфекций позволит дать службе здравоохранения эффективный препарат для лечения гнойно-воспалительных инфекций, снизить длительность пребывания больных в стационаре, снизить смертность от клебсиеллезных инфекций.

Формула изобретения

ПРЕПАРАТ БАКТЕРИОФАГА КЛЕБСИЕЛЛ ПОЛИВАЛЕНТНЫЙ, включающий бактериофаги клебсиелл пневмонии KP 1, KP 2, KP 3, KP 4, KP 5, KP 6, KP 7, KP 8, KP 9, KP 10, KP 11, KP 12, KP 13, KP 14, KP 15, клебсиелл озены KO 16, KO 17, KO 18, KO 19, KO 20, KO 21, KO 22, KO 23, клебсиелл риносклеромы KR 24, KR 25, KR 26, KR 27, KR 28, KR 29, активные в отношении 70,0 94% штаммов бактерий клебсиелл пневмонии, озены и риносклеромы, содержащий, мг/мл:
Бактериофага клебсиелл пневмонии (0,5 1,0) · 10⁹ фаговых частиц
Озены (0,5 1,0) · 10⁹ фаговых частиц
Риносклеромы (0,5 1,0) · 10⁹ фаговых частиц
Желатин 7,0 8,0
Хлористый натрий 7,2 7,4
Фосфорнокислый натрий двузамещенный двуводный 1,1 1,3
Фосфорнокислый калий однозамещенный 0,35 0,37
Хлористый магний 0,09 0,11
Вода Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:
Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

(73) Новое наименование патентообладателя:
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН

Извещение опубликовано: 10.08.2004        БИ: 22/2004

---