Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr серовара 2, используемый для приготовления диагностической сыворотки

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, и может быть использовано до получения специфической диагностической сыворотки. Целью избретения является штамм Vibrio cholerae eltor 2, выделенный из популяции Vibrio Nag. NcTc4711 2 серовара, обладающий общим антигеном с исходной культурой Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара, служащий для получения специфических сывороток. Штамм Vibrio cholerae eltor 2 выделен из популяции Vibrio Nag. 2 серовара при помощи способа отбора токсигенных субкультур Vibrio cholerae eltor 01 и депонирован в коллекции Музея живых культур Всесоюзного научнс-исследовательского противочумного институга Микроб. При использовании штамма Vibrio cholerae eltor 2 возможно получение сыворотки, агглютинирующей холерные и неагглютинирующиеся вибрионы 2 серовара. 2 табл. СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (stIs С 12 N 1/00, А 61 К 39/40

ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Т

4<юяД

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4764904/13 (22) 12.12.89 (463 30.12.91. Бюл. ¹ 48 (71) Ростовский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии, паразитологии и гигиены (72) И,Т.Андрусенко, А.П.Шепелев, А.К.Адамов и И.И.Шуркина (53) 576,551.31(088,8) (56) Иммунология холеры. Саратов, 1981, с.320. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE

ELTOR CEPOBAPA 2, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ

ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологическай идентификации патогенных вибрионов, и г

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, и, может быть использовано для получения специфической диагностической сыворотки.

Целью изобретения является штамм

Vibrio cholerae eltor 2, выделенный из популяции ЧМад.NcTc 4711 2 серовара, обладающий общим антигеном с исходной культурой Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара, служащий для получения специфических сывороток.

Штамм Vibrio Nag. 2 серовара хранится в коллекции Музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского протичумного института "Микроб" под номером NcTc Ы«17Î1741 А1 может быть использовано да получения специфической диагностической сыворотки.

Целью избретения является штамм Vibrio

cholerae eltor 2, выделенный из популяции

Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара, абладающий общим антигеном с исходной культурой

Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара, служащий для получения специфических сывороток.

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 выделен из популяции Vibrio Nag. 2 серавара при помощи способа отбора токсигенных субкультур

Vibrio cholerae eltor 01 и депанираван в коллекции Музея .кивых культур Всесоюзного научна-исследовательского противочумного института "Микроб". При использовании штамма Vibrio cholerae eltor 2 возможна получение сыворотки, агглютинирующей холерные и неагглютинирующиеся вибрионы

2 серавара. 2 табл. М

4711 и используется для получения моноварных специфических сывороток 2 серовара. Штамм Vibrio Nag. NcTc 4711 обладает свойствами, характерными для рода Vibrio.

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 получен + ь путем целенаправленной селекции из штамма Vibrio Nag, NcTc 4711 следующим образом, Штамм Vibrio Nag, NcTc 4711 выращи-. д вают в пептонной воде и стандартизируют па оптическому стандарту мутности да 109 микробных те:-: в 1 мл.

Культуру в количестве 1 мл вносят в пробирки с 3 мл 2 -ного растопленного и остуженного до 40 — 45 С щелочного агара (рН 7,6 — 7,8), тщательно перемешивают и выливают вторым слоем в чашки Петри с 10 мл

1701741

40

55 предварительно разлитого 2 -ного щелочного агара. После его застывания на поверхНос tb наносят полупроницаемую мембрану, вырезанную по кругу чашки, и простерилизованную 10-минутным кипячением в дистиллированной воде. На мембрану засевают суточную культуру Vibrio

cholerae closslca 569 В, выращенную в

0,3 -ном питательном arape,. Чашку поме, щают в термостат при 37 С и выдерживают . 18 ч, Затем мембрану с нанесенной в ней культурой удаляют, а пассированный штамм на участке частичного его роста непосредственно под культурой Vibrio

cholerae classlca 569 В отбирают петлей и подращивают для нового пассажа в течение

4 — 5 ч.

В результате 10-кратного пассирования укаэанным способом взятая в опыт культура

Vibrio Nag,NcTc 4711 приобрела свойства типичные для холерного вибриона, а выде, леннй штамм диагностирован как Vibrio cholerae eltor 2, Штамм Vibrio cholerae eltor 2 депориро, ван в Музее живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института "Микроб" под номером КМ-29 (2).

Свойства штамма Vibrio cholerae eltor 2

NKM-29 (2), Морфологические признаки. Подвижные изогнутые палочки с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образует.

Грам-отрицательные.

Культуральные признаки. На 1 (,-ной пептонной воде вызывает помутнение, на плоском агаре образует гладкие круглые полупрозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром 2-2,5 мм, Физиологические свойства. Оксидазоположителен, ферментирует глюкозу и маннит (до кислоты без газа), не ферментирует инозит и салицин, образует индол, декарбоксилирует лизин и орнитин и не дегидрирует аргинин, не фосфоресцирует. относится к 1 группе Хейберга, дает феномен "тяжа",. не растет на 1;(,-но пептонной воде с 7% и 10 g хлорида натрия, агглютинируется холерными диагностическими "0", "ОН" и "Инаба" сыворотками, не агглютинируется "Огава" "PO" сыворотками. не лизируется холерными фагами С.

Лизируется холерными фагами зльтор и

ХДФ 3 — 5, Антигенные свойства. Обладает холерными О-антигенами. При иммунизации животных вызывает образование холерных агглютининов. Полученная сыворотка агглютинирует холерные вибрионы и исходную культуру (вибрионы 2 серовара), но не аглютинирует штаммы 3-26, 28 — 56 сероваров.

Сравнительная характеристика исходного и полученного штаммов представлена в табл.3.

Пример, Штамм Vibrio cholerae eltor

2 МКМ-29(2) используют для получения специфической диагностической сыворотки, С этой целью штамм высевают на 1 -ную пептонную воду рН 7,6 и выращивают 4 ч при 37 С, затем пересевают на мясопептонный агар рН 7,6. Посевы инкубируют при

37 C в течение 18-20 ч. С агара культуру смывают физиологическим раствором рН

7,2. Микробную массу кипятят при 100 С в течение 2 ч. Затем дважды отмывают физиологическим раствором центрифугированием. Микробную взвесь после контроля на стерильность используют для иммунизации кроликов, Кроликов иммунизируют трехкратно с трехдневными перерывами: первую и вторую иньекции делают подкожно по 20 млрд. микробных клеток, третью — .внутривенно—

5 млрд, микробных клеток. На 7 сут после третьей инъекции антигена кроликов обескровливают, получают сыворотку. Сыворотку инактивируют мертиолятом натрия 1:10000.

Титры сывороток составляют 1:16001:3200 для холерных вибрионов и 1;2001:400 с исходным штаммом (контроль), Сыворотку применяют в реакции агглютинации с холерными штаммами, а также вибрионами 2 — 56 сероваров, Реакцию аглютинации ставят в пробирках объемным методом. Для разведения сыворотки и приготовления вэвесей культур используют физиологический раствор рН 7,2, Специфичность сыворотки штамма

Vibrio cholerae eltor 2 М KM-29 (2) представлена в табл,2, Сыворотка против V, cholerae eltor 2 агглютинирует как холерные вибрионы зльтор, так и Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара (табл.2).

Штамм Vibrio choierae eltor 2 М KM-29 (2), полученный из популяции Vibrio Nag. серовара 2, позволяет получить специфичную. сыворотку, необходимую при диагностике кишечных заболеваний, которая позволяет более широко дифференцировать патогенные вибрионы, а также способствует выявлению антигенного родства между некоторыми представителями холерных и неагглютинирующихся вибрионов.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor КМ

29(2) серовара 2, используемый для приготовления диагностической сыворотки.

1701741

J3

l о о

z о с

Ф

l»

С5

Ф

S с о !

С5

lD

С Э о.

О

l б) с о

СЙ

X

=3

Б с о

Л" о

IS

О

I» о

IS

X о

Ф

Б и

Ф х

Б и

О

L

I5

S о х

Б с о х Б

z

Ж

СЭ о

Gl бБ о

z о !

Ф с бБ о

1 о

z о и о

CL о й

С 3

Cb

СМ

Б

hC и

СЧ

I» о

Ф

Ф

С5

Ф о с и

О

1 .О

S (»

° 5 и и

Об

15 с! о

О

) и о .Е

X б5

Iç

lu !

Б о и

М

Iи

O.

Ф

О

m х

z с

Ф

IS

Ф

С5 а и и Й S ои=т

Е а!

W .5

Б 1

Ф и

ez o о z (о

o. K о.„" а

1 15

С б5

S m б- с

Ф о

С.с о.

S

S

О. о

z о m

Б бБ 6)

Ф S с

Я

Б а

ХФ3

О. m оФ в

С:

Ф с Ф

u S

Б о хыД

oog

l» Г

БоБ

D аи

1 !

1 !

I I

Ф

Ф б

Ф о

„с

С5 И о

О

Я ".а о

0) Ф

С K

S S

Q. о с б5 х х

)Б

БББ

z а о ба с б5

l- Х У

S с! а

Б S S

Z C2. о x z

2 а (5 Б бС

Б а

1701741

Таблица 2

Специфичность "О" — холерной сыворотки штамма Vibrio choterae eltor 2 hL KM — 29 (2)

Составитель Г.Соболева

Редактор Л.Павлова Техред M,Moðråíòçë Корректор С,Черни

Заказ 4512 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государсгвенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород. ул,Гагарина, 101