Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Цель изобретения - повышение точности способа путем одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. Помещают исследуемый раствор в измерительную трубку с постоянной площадью поперечного сечения. Пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно"КонтактнЬ1е части, извлекают после акспозиции пробу из одной части трубки и перемешивают. После этого измеряют в ней и в остатке пробь! концентрацию исследуемых компонентрв и по,формуле определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции. Применение способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клетОк поликомпонентного раствора в моносистеме по сравнению с прототипом за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (Щ (1I) (я)5 6 01 и 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 2 (21) 4726547/14, 4775256/14 (22) 08.06.89 (463 15.02.92. Бюл. М 6 . (72) Ю. M. Чабров (53) 615.475(088.8) (56) Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии", София,1963, с.

382,, (54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ СКОРОСТИ

ДИФФУЗИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ КЛЕТОК

ПОЛИКОМПОНЕНТНОГО РАСТВОРА В

МОНОСИСТЕМЕ

{57) Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Цель изобретенйя— повышение точности способа путем одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. Помещают иссИзобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Цель изобретения — повышение точности способа путем одновременной фиксации скоростей диффузии разнотипных компонентов.

Способ осуществляют следующим образом.

Предварительно готовят измерительную трубку и две емкости.

Производят забор в емкость пробы поликомпонентного раствора, не обязательно содержащего цветоконтрастные объекты, Это может быть кровь, плазма, желчь, желудочный сок и т.д.

Производят забор из .емкости пробы раствора в измерительную трубку до нулевой отметки (на наружной поверхности трубки. имеется одна разграничительная ледуемый раствор в измерительную трубку с постоянной площадью поперечного сечения. Пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно-контактные части, извлекают после экспозиции пробу из одной части трубки и перемешивают. После этого измерМют в ней и в остатке пробы концентрацию исследуемых компонентрв и по формуле определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции. Применение способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентнаго раствора в моносистеме по сравнению с прототипом за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. метка). В емкости должна быть оставлена часть раствора.

Трубку на период экспозиции устанавливают под любым углом к горизонту в зависимости от применяемой той или иной движущей силы.

По окончании экспозиции производят извлечение фиксированной (т,е. до уровня разграничительной метки) части раствора из трубки в емкость. При этом извлечение должно быть произведено только из одной, но любой части трубки без механического перемешивания смежных частей раствора.

Раствор в емкости, а также оставшуюся часть раствора взбалтывают.

Необходимое количество раствора попарно забирают (повторно) из емкости для измерения концентрации разнотипных объектов, например клеток, молекул белков, жиров, углеводов и т.д.

1712871

Измеряют парные концентрации соответственна для каждого типа микрообъектов, используя формулу, или рассчитывают скорость и направление каждого типа микрообъектов в отдельности, Число таких типов для измерения их взаимоперемещения в одной трубке не ограничено.

Направление и величину перемещения компонентов рассчитывают по формуле cсд .S= где S — длина пути перемещения в трубке компонентов раствора определенного типа, м, за время экспозиции;

l — длина части трубки, м;

С вЂ” концентрация компонентов определенного типа, измеренная в пробе, извлеченной из первой части трубки;

С0 — концентрация компонентов определенного типа, измеренная в исходной пробе раствора.

Пример 1. Диффузионный анализ раствора в моносистеме применен к пробам крови, взятым у здоровых и больных лиц.

Измерены одномоментные скорости седиментации эритрацитов (визуально), а также перемещения лейкоцитов и их фракций в цельной (несепарированной) крови в одной измерительной трубке.

Последовательность предварительных и основных технологических операций ñïàсаба следующая.

Предварительно готовят стабилизатор крови по прописи:

2,8-ный раствор поливинилового спирта (мол. вес 60000), мкл 5,0

Цитрат кислый, r 0,16

Глюкоза, г 0,16

Вода дистиллированная, мкл Да 10,0

Стерильно!

Одновременно готовят три емкости— флаконы А, Би В.

Предварительно готовят измерительную стеклянную трубку, нижний конец которой эапаян и общая длина канала которой равна 120 мм, Отметка 0 нанесена у верхнего (открытого) конца трубки. Разграничительная метка делит длину канала трубки на две части (объема): верхнюю длиной 50 мм и нижнюю длиной 70 мм. Внутренний диаметр трубки 7 мм. Размеры длин верхней и нижней частей трубки обоснованы следующим: предварительные контрольные измерения показали, чта скорость оседания эритроцитов не превышает 75 мм/ч, а скорость перемещения лейкоцитов вверх — 55 мм/ч.

Шприцем берут пробу крови из вены пациента — 5 0 мкл и помещают ее в отдельную предварительно приготовленную емкость — флакон А, куда налит стабилизатор

5 крови в объеме 1,7 мкл. Полученную смесь в объе 4е 6,7 мкл (соотнашение 3:1) взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток крови, Пробу крови из флакона А в объеме 5,7

10 мкл выливают в измерительную трубку до нулевой отметки. Трубку устанавливают вертикально при комнатной температуре на период экспозиции — 1 ч, Диффузионный процесс идет под воздействием градиента

15 сил гравитации.

По окончании экспозиции (1 ч) визуально фиксируют скораст ь оседания эритрацитов по известной методике.

Одновременно определяют направле20 ние и скорость перемещения лейкоцитов.

Для этого, избегая механического переиешивания, шприцем с иглой извлекают пробу крови полностью из верхнего объема трубки и выливают ее в предварительно приготов25 ленную емкость — флакон 6, а пробу крови из нижнего объема трубки — ва флакон В.

Пробы крови во флаконах Б и В взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток.

30 Из каждого флакона (Б и В) берут необходимое количество крови для измерения концентрации лейкоцитов и подсчета дифференциальной формулы, концентрации фракции.

35 Определяют направление движения (вверх или вниз) лейкоцитов в целом и каждой из их фракций, Для этого сравнивают полученные концентрации однотипных клеток из флаконов Б и В. Например, если кон40 центрация клеток во флаконе Б больше их концентрации во флаконе В, следовательно; клетки перемещаются вверх, и наоборот.

Рассчитывают длину пути и скорость диффузии клеток по формуле

45, cñ.

S—

Параметры трубки: i>-50 мм; 4,"70 мм.

Исследуемый раствор — кровь.

Экспозиция — 1 ч.

Требуется определить в одной трубке величину С03, направление и скорость лейкоцитов, направление и скорость сегментоядерных нейтрафилав.

По окончании экспозиции величину

СОЭ определяют визуально по известной методике. Получают (например) 40 мм/ч.

Определяют парные концентрации лейкоцитов: С0 10,9х10 шт,/л; С = 15х10 шт,/л, 1712871

S—Составитель А;Бобров

Редактор А.Лежнина Техред M.Mîðãeíòàï Корректор И,Му ка

Заказ 533 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

По формуле

3 50 15 10 109 10

+ 188 мм.

10,9 10

Определяют парные концентрации С- 5 нейтрофилов: Со=2,5х10 шт,/л; С1=2,0х10 шт./л.

По формуле — — 10 мм.

2,5Вывод: СОЗ вЂ” 40 мм/ч; скорость лейкоцитов =+18 мм/ч (вверх); скорость С-нейтрофилов =-10 мм/ч (вниз)..

Применение предлагаемого способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме за счет одновременной фиксации скорости диффуэии разнотипных компонентов.

Формула изобоетения

Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме, включающий помещение исследуемого раствора в измери- 25 . тельную трубку с постоянной площадью поперечного сечения, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем одновременной фиксации скоростей диффузии раэнотипных компонентов, пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно-контактные части, после экспозиции осуществляют забор пробы из одной части трубки, перемешивают и измеряют в ней концентрацию исследуемых компонентов, измеряют длину части трубки, из которой осуществлен забор пробы, измеряют концентрацию компонентов в неизвлеченной пробе и определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции по формуле cс.)

Со где S — скорость диффузии компонентов за время экспозиции;

I — длина части трубки, из которой осуществлен забор раствора;

С вЂ” концентрация компонента в забранной пробе;

C> — концентрация компонента в неиэвлеченной пробе,,