Способ повышения рыбопродуктивности рабоводных водоемов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51)5 А 01 К 61 /00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4679771/13 (22) 14.02.89 (46) 30.04.92. Бюл. № 16 (71) Молдавская научно-исследовательская рыбохозяйственная станция (72) А.Е.Каховский и И.Д.Тромбицкий (53) 536 (088.8) (56) Wakabayeshi H,Ecological studies of fish

pathogenic bacteria in eel farm. Fish. Pathol., 1976, ч. 11. ¹ 2. р. 63-66.

Вода питьевая технические и гигиенические требования и нормы. ГОСТ 2974-73.

Авторское свидетельство СССР

N -1346085, кл. А 01 К 61/00, 1987.

Справочник по болезням рыб/Под ред.

Микитюка П.В. Киев, Урожай, 1984, с. 161162.

Изобретение относится к прудовому рыбоводству и предназначается для увеличения рыбопродуктивности интенсивно эксплуатируемых загрязненных прудов, в том числе за счет профилактики бактериальных болезней рыб путем поддержания численности условнопатогенных бактерий, в водоеме на неопасном для рыб уровне.

Известен метод определения численности бактерий-деструкторов органики в воде рыбоводных водоемов, сходный с предлагаемым методом. Он заключается в исследовании ряда параметров экосистемы рыбоводного водоема.

Санитарно-микробиологические показатели воды, подаваемой в водопроводную сеть, предусматривают нормативы, ограничивающие численность и состав микроорганизмов в воде. Но этот ГОСТ предназначен для оценки качества питьевой воды и не применим в рыбоводных целях, Так, напри(54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ РЫБОПРОДУКТИВНОСТИ РЫБОВОДНЫХ ВОДОЕМОВ (57) Использование: повышение рыбопродуктивности водоемов. Сущность изобретения; в водоем вносят гипохлорит натрия из расчета 0,05-1,5 г/м при превышении чис3 ленности бактерий в воде и печеночной ткани рыб фиксированных значений. мер, он исключает возможность содержания сапротрофных бактерий вообще, которые в определенных количествах необходимы для самоочистки водоема и создания естественной кормовой базы.

Известен способ удобрения рыбоводных прудов, заключающийся в том, что для повышения рыбопродуктивности и профилактики бактериальных болезней рыб известь вносят в рыбоводные пруды каждые

7-10 дней. Разовую дозу извести оп ределяют исходя из массы рыбы в пруду и уменьшают ее постепенно с 12 (, от массы рыбы в пруду в начале вегетационного сезона до

6% к концу вегетационного сезона. Основа действия извести слагается из коагуляции и осаждения органической взвеси (увеличение эвфотического слоя) и бактерицидного действия, Предназначенный для интенсификации фотосинтеза способ не учитывает потребности в уровне бактерицидной актив1729345 ности обработок. В свою очередь интенсивность бактериальной деструкции в рыбоводном пруду меняется в зависимости от ряда показателей — эвтрофикации органическими стоками с водосборной площади, запаса иловых отложений прошлых лет, проточности, меняющейся в зависимости от климатических и иных особенностей, уровня соответствия внесенных удобрений потребности в них и т.п. Т.е. очевидно, что масса рыбы, в значительной мере определяющая уровень интенсификации рыбоводства в водоеме, в меньшей мере определяет интенсивность деструкции (потребность в бактерицидном препарате), чем сами показатели численности различных групп бактерий-деструкторов органики. Так, например, если значительная доля органических эвтрофикантов приходится.на сток близлежашей фермы, очевидно, что потребность в препарате будет определяться не только массой посаженной в водоем рыбы, но и интенсивностью сброса с фермы.

Известен также способ профилактики аэромоноза, основанный на внесении (2 — 3 раза за сезон) в пруды негашеной извести из расчета 100 — 150 кг/га. Однако предлагаемый режим обработки также не учитывает реальной потребности в препарате. Ограничением к применению этого способа являются показатели рН в водоеме больше 8,4, а при избытке деструкции в водоеме значения рН бывают выше этих значений, Кроме того, известь предлагается вносить по всей акватории водоема, что для больших нагульн ых прудов методически трудно -вы пол нимо, Известен способ систематического внесения в пруды гипохлорита кальция или хлорной извести, предназначенный для профилактики и лечения незаразного бранхионекроза карпа, заключающийся в ежемесячном (2 — 3 раза в месяц) внесении в пруды, начиная с мая — июня независимо от состояния рыбы гипохлорита кальция из расчета 0,05 — 1,5 г/м или хлорной извести з из расчета 0,1 — 3,0 г/м, Однако этот способ з предназначен для профилактики конкретной болезни и не учитывает реальной потребности экосистемы в количестве препарата, Между тем недостаток препарата снижает его эффективность, а избыток

on ределяет ущерб от снижения самоочистительной способности водоема, от подрыва естественной кормовой базы, дополнительного загрязнения пруда и высокой стоимости препарата. По этим причинам в практическом рыбоводстве указанный способ применяется редко, 5

Принцип действия гипохлорита кальция в кислой среде заключается в бактерицидном действии молекулярного хлора (кальций остается в растворе в качестве ценного для экосистемы элемента). В щелочной среде бактерицидное действие оказывает атомарный кислород, образующий в результате разложения гипохлорита кальция. В условиях преобладания деструкционных процессов вода прудов обладает щелочным рН.

Цель способа — повышение рыбопродуктивности рыбоводного водоема, достигаемое за счет снижения уровня бактериальной деструкции в загрязненном органикой пруду до безопасного уровня. Подавление бактериальной деструкции осуществляется путем внесения гипохлорита кальция.. При этом снижается численность условнопатогенных бактерий, чем достигается эффект профилактики бактериальных заболеваний, снижается бактериальное потребление биогенных элементов, необходимых для развития фитопланктона, уменьшается биологическое потребление кислорода, а в щелочной среде выделяется атомарный кислород, чем достигается эффект профилактики заморных явлений, оптимизируется гидрохимический режим, Предлагаемый способ повышения рыбопродуктивности интенсивно эксплуатируемых рыбоводных прудов предусматривает систематическое внесение в водоем бактерицидных препаратов, например гипохлорита кальция. С апреля по сентябрь включительно необходим еженедельный контроль бактериальной обсемененности воды и ежемесячный — печени рыб. При обострении эпизоотической обстановки пробы рыбы можно отбирать и чаще, При достижении бактериальной обсемененностью показателей воды: сапротрофные бактерии

10000 2000 кое/мл (колониеобразующих единиц в 1 мл); цитохромоксидазоположительн ые грамотрицател ьн ые сап ротрофн ые бактерии 5000 + 1000 кое/мл; аэромонады

3000 500 кое/мл; а показателей бактериальной обсемененности печени рыб: сапротрофные бактерии 26 5 кое/2мм ткани; ДНКазаактивные, сапротрофы от общего числа сапротрофных бактерий 23 7/; и при появлении первых колоний аэромонад в печени рыб, в водоем площадью более 5 га вносится бактерицидный препарат (гипохлорит кальция) из расчета 0,05 — 0,1 г/м .

Препарат вносится по мелководью водоема и вдоль береговой линии полосой 10-метровой ширины. В пруды площадью до 5 ra препарат вносят из расчета 0,5 — 1,5 г/м, з

1729345

Предлагаемый метод внесения бактерицидного препарата позволяет привести в максимальное соответствие режим обработки к потребности в нем..В результате трехлетних исследований экологии сапротрофных и условнопатогенных сапротрофных бактерий в водоемах различного уровня рыбоводной эксплуатации было установлено, что процессы органического эвтрофирования водоема, интенсивность бактериальной деструкции, характеризуемая рядом параметров обсемененности воды и бактериальное инфицирование паренхиматозных органов рыб, характеризуемое рядом параметров бактериальной обсемененности печени, статистически взаимосвязаны. Приведенные значения параметров статистически взаимно соответствуют друг другу и отражают состояние экосистемы,при котором у рыб появляются признаки скрытой формы бактериального заболевания (состояния премуниции). Это состояние характеризуется также ростом вероятности заморов, опасным возрастанием показателей рН, содержания свободного аммиака и др. признаками избыточной бактериальной деструкции в водоеме. При более низких значениях приведенных параметров экосистемы указанных отрицательных явлений не наблюдается или их причины имеют другую этиологию. Доверительный интервал приведенных значений определяется статистической ошибкой и варьированием опытных данных.

Внесение препарата при показателях бактериальной обсемененности ниже приведенныхых подры вает самоочистител ьную способность водоема, снижает естественную кормовую базу и при наличии тенденции к накоплению условнопатогенных бактерий (накопление соответствующего пищевого субстрата) может переориентировать микрофлору к преобладанию последних. В обычных условиях условнопатогенные сапротрофы находятся под прессом других представителей микробиоценоза. Поэтому при определении бактериальной обсемененности воды, кроме показателя общей численности гетеротрофных бактерий, рекомендуется определение численности аэромонад, наиболее обычных представителей условнопатогенной микрофлоры прудовой воды. Численность цитохромо к сида зо положител ьн ых грамотрицательных сапротрофных бактерий — наиболее стабильный показатель, тесно коррелирующий как с общим количеством сапротрофов, так и с количеством аэромонад. Он подвержен методиче5

55 ским ошибкам в определении, чем показатель общего числа сапротрофных бактерий.

Внесение препарата при значениях параметров выше приведенных лишь способствует появлению болезни, замора или иного негативного явления, а бессистемность в обработках может привести к переориентации микробиоценоза в сторону его условнопатогенных представителей. Рекомендуемые показатели бактериальной обсемененности прудовой воды достаточно достоверно и полно характеризуют уровень бактериальной деструкции в водоеме и динамику численности условнопатогенных бактерий в прудовой воде, однако порог бактериального инфицирования паренхиматозных органов рыб может зависеть не только от уровня бактериальной деструкции, но и от ряда других, неучтенных факторов. Так, технологическое травмирование рыб (хэндлинг), попадание в воду или корм токсичных препаратов, лернеоз или другое паразитарное заболевание на фоне ослабления организма рыбы могут приводить к снижению порога бактериальной обсемененности воды, при которой вероятно возникновение вторичной бактериальной инфекции, Автохтонным источником бактериальной инфекции в экосистеме пруда являются условнопатогенные бактерии из состава бактериальных деструкторов. Поэтому внесение препарата при бактериальной обсемененности воды ниже заявляемой и обсемененности печени рыб, достигшей пороговой величины, создаст более благоприятные условия для борьбы организма рыбы, ослабленного заболеванием (токсикоз, паразитарная инвазия и т.д.), чем будет достигнута цель предлагаемого способа, Кроме того, в существующих методиках диагностики бактериальных болезней рыб, включающих непременное выделение из паренхиматозных органов рыбы бактерии-возбудителя, не указывается количество бактерий, выделение которых необходимо для постановки соответствующего диагноза. Между тем, таковые зачастую выделяются из внутренних органов рыб при отсутствии внешних признаков заболевания. Предлагаемые значения показателей бактериальной обсемененности печени прудовых рыб в составе предлагаемого способа могут послужить также уточнением к методике постановки диагноза бактериального заболевания. Поэтому для получения более полной информации рекомендуется ежемесячный контроль бактериальной обсемененности печени рыб.

Наиболее четким здесь является показатель бактериальной обсемененности печени сап1729345

55 ротрофными бактериями, но ввиду возможных ошибок при стерильном вскрытии (занесение бактерий с поверхности кожных покровов, из прорванного кишечника и т.д.) рекомендуется контроль процента ДНКазаактивных сапротрофных бактерий (ДНКазная активность — критерий патогенности бактерий, выделенных из внутренних органов рыб). Наиболее информативным является обнаружение аэромонад в печени рыб, однако при отсутствии единичных колоний этих бактерий в посевах очень велика вероятность ошибки, которую с успехом компенсируют два других указанных показателя.

Период с апреля по сентябрь выбран исходя из особенностей вегетационного сезона в аспектах бактериальной деструкции и аэромонадного инфицирования рыб. Еженедельный контроль воды рекомендуется с учетом динамики сезонных температур, эвтрофирования и обычной динамики численности сапротрофных бактерий.

Ежемесячный контроль бактериальной обсемененности печени рыб определяется также сезонными особенностями динамики этих показателей, Выбранные показатели наиболее тесно и достоверно коррелируют как друг с другом, так и с состоянием экосистемы в целом, Пренебрежение каждым из приведенных показателей будет сопряжено с уменьшением информативности полученных данных, Пренебрежение показателями бактериальной обсемененности печени рыб (особенно в условиях вероятности токсикозов или иных заболеваний) устраняет контроль за реакцией организма рыбы на микробиоценоз бактериальных деструкторов прудовой воды, что может понизить эффективность предлагаемого способа, Результаты бактериологического анализа качества воды, полученные различными методами, различаются, Поэтому несмотря на применение общепринятых методов для воспроизводимости способа необходимо пользоваться именно теми общепринятыми бактериологическими методиками, на основе которых способ был разработан.

Отбор проб воды производится в стерильные 0,5 л бутылки из химически нейтрального стекла под ватномарлевыми пробками. Воду отбирают ближе к водовыпуску пруда у берега или на мелководье, где глубина не менее 50 см, не с подветренной стороны. Посев воды производится стерильной микропипеткой на чашки Петри с плотными агаризованными средами в объеме

0,02 мл — в холодное время, 0,01 мл — в теплое время года и растирается шпателем

Дригальского по поверхности агара. Для определения бактериальной обсемененности

40 печени рыб в пруду методом случайной выборки отбирают по 5 рыб каждого вида.

Асептическое вскрытие и отбор материала паренхиматозных органов осуществляют по общепринятой методике 2 мм печеночной ткани растирают шпателем Дригальского по поверхности соответствующей агаризованной питательной среды. Чашки инкубируют

2 сут в термостате при 26 — 28 С. Общее количество колоний, выросших на эритритагаре отразит численность сапротрофных бактерий в прудовой воде или печени рыб.

Затем чашки эритрит агара с колониями на

40 — 60 с заливают смесью (1:1) растворов 1 Д спиртового альфа-нафтола и 1 -ного водного раствора диэтилпарафенилендиаминсульфата. Количество посиневших колоний даст показатель численности цитохромоксидазоположительных бактерий. Количество посиневших колоний, которые в десятинормальном едком натре образуют слизистые тяжи (в капле при перемешивании капли колониальной массы с каплей раствора), отразит количество цитохромоксидазоположительных грамотрицательных сапротрофных бактерий в прудовой воде, Процент ДНКазаактивных сапротрофов от общего количества сапротрофных бактерий в печени рыб определяют путем посева печени рыб указанным методом на ДНК-содержащий агар. Чашки с выросшими колониями на 7 — 10 мин заливают однонормальной соляной кислотой, Процент колоний, вокруг которых образуется зона просветления помутневшего под действием кислоты агара, от общего числа колоний на чашку даст величину процента ДНКазаактивных сапротрофных бактерий.

Количество аэромонад -в воде и печени рыб определяют путем посева материала на чашки с селективной аэромонадной средой

Риппей-Кабелли. Колонии на этой среде растут хуже, поэтому объем высеваемой на чашки воды можно увеличить до 0,04 мл — в холодное время года, 0,02 мл — в теплое время года. Количество канареечно желтых колоний на фоне голубовато-зеленой среды отразит численность аэромонад в единице объема высеваемого материала.

Агаризованная аэромонадная среда

Риппей-Кабелли готовится следующим образом по прописи (г/л): триптоза 5; трегалоза 5; дрожжевой экстракт 2; хлорид натрия

3; сульфат магния 0,2; хлорид калия 2; хлорное железо 0,1; бромтимоловый синий 0,04, Ингредиенты растворяют при комнатной температуре, рН доводят до 8,010 нормальным едким натром, добавляют 15 г агара и автоклавируют при 1 атм. 15 мин. Затем добавляют 1 мл этанола, смесь охлаждают

1729345

55 до 50 С, добавляют 20 мг ампициллина и

100 мг дезоксихолата натрия, после чего среду разливают в стерильные чашки Петри.

Чашки со средой можно хранить в холодильнике при 4 С до 6 недель.

Пример 1. В эвтрофном нагульном рыбоводном пруду 5 зоны рыбоводства

СССР площадью 45 га, начиная с апреля еженедельно, проводили контроль за численностью сапротрофных бактерий, раз в месяц определяли бактериальную обсемененность печени рыб. При достижении параметрами критических значений вносили гипохлорит кальция в дозе 0,1 гlм в виде маточного раствора вдоль литорали и по мелководью пруда, В конце апреля была проведена 1 обработка, в мае — 2 обработки, в июне-августе — по 4 обработки в месяц.

Печень контрольных рыб в посевах была без аэромонад с выделением единичных колоний сапротрофных бактерий. Заболевания рыб в течение вегетационного сезона не отмечалось, заморных явлений также. Рыбопродуктивность в итоге выращивания составила 1,58 т/га против 1,11 т/га в контрольном водоеме (сходный в рыбохозяйственном отношении пруд при проведении обработок согласно прототипу, т.е. 2 раза в месяц в июне-августе для профилактики незаразного бранхионекроза карпа и заморных явлений). В контрольном водоеме отмечались случаи краснухоподобных заболеваний единичных экземпляров карпа, высокое содержание аммонийного азота в июне и заморные явления в июле-августе.

Пример 2. В эвтрофном нагульном пруду 5 зоны рыбоводства СССР площадью

36 ra, начиная с апреля, еженедельно проводили контроль за численностью сапротрофных бактерий в воде и раз в месяц определяли бактериальную обсемененность печени рыб. С июля по август.численность сапротрофных бактерий составляла в водоеме 15 — 22 тыс.кое/мл, количество цитохромоксидазоположител ьн ых грамотрицательных бактерий 10 — 17 тыс,кое/мл, но число аэромонад не достигало 3000 кое/мл.

Между тем в июле в водоеме отмечалась невысокая зараженность карпа и буффало лернеями (паразитическое ракообразное), в результате чего из печени выделяли от 2 до

4 кое/2мм ткани колонии аэромонад. В этих случаях при проведении обработок руководствовались данными бактериальной обсемененности печени рыб. В итоге график обработок водоема гипохлоритом кальция

5 составил: в конце июня — 1 обработка, в июле — 4 обработки, в августе.— 2 обработки (в первые 2 декады месяца). Язвенного поражения рыб в течение сезона не отмечалось в противоположность предыдущему

10 году, когда на фоне лернеоза были частыми поражения рыб язвенного характера. Рыбопродуктивность в результате выращивания составила 1,42 т/га против 0,87 т/га в предыдущем году.

15 Формула изобретения

Способ повышения рыбопродуктивности рыбоводных водоемов, предусматривающий периодическое внесение в водоем гипохлорита кальция из расчета 0,5 — 1,5

20 г!м, отличающийся тем, что, с целью з поддержания экологического равновесия в водоеме за счет снижения уровня бактериальной деструкции и численности условнопатогенных бактерий, еженедельно

25 отбирают пробы воды и ежемесячно пробы печеночной ткани рыб, оценивают в них общую численность сап ротрофных бактерий, и аэромонад,численность цитохромоксидазоположительных грамотрицательных сапрот30 рофных бактерий, ДНКазаактивных сапротрофных бактерий оценивают в воде и печеночной ткани рыб соответственно, а гипохлорит кальция вносят в водоем при достижении или превышении численности

35 бактерий следующих значений: в воде

Сапротрофные бактерии 10000 2000 кое/мл;

Цитохромоксидазоположи40 тельные грамотрицательные сапротрофные бактерии 5000 «-1000 кое/мл;

Аэромонады 3000 +. 500 кое/мл; в печеночной ткани рыб

45 Сапротрофные бактерии 26 5 кое/2мм ткани;

ДНКазаактивные сапротрофные бактерии от общего числа сапротрофных .

50 бактерий 23 й77;

Аэромонады Единичные колонии