Питательная среда для культивирования инфузорий тетrанyмеnа рyrifоrмis

 

Изобретение относится к гидробиологии - водной токсикологии, и может быть использовано при культивировании инфузорий Tetrahymena pyriformls. Целью изобретения является стабилизация рН среды и ее удешевление. Питательная среда содержит глюкозу, хлорид натрия, фосфатный буфер, сульфат магния, дрожжевой автолизат и дистиллированную воду. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4833895/13 (22) 05.03.90 (46) 07.03.92. Бюл. М 9 (71) .Научно-исследовательский институт профилактической медицины (72) Г.М.Лахонина и А,Г.Мадоян .(53) 636.39 (088.8) (56) Ускоренная ориентировочная оценка токсичности веществ с использованием в качестве тест-объекта инфузорий тетрахимен; Методические рекомендации. Таллинн, 1988, с. 5-6.

Игнатьев А.Д., Шаблий В.Я. Использование инфузорий тетрахимена пириформис как тест-объекта при биологических исследованиях в сельском хозяйстве: Обзорная информация. М., 1978, с. 11.

Изобретение относится к прикладной биологии и может быть использовано при культивировании инфузорий Tetrahymena

pyrlformis преимущественно при использовании их в качестве тест-объекта в токсилогических исследованиях.

При проведении исследований с использованием инфузорий Tetrahymena

pyrlformls целесообразно использовать две различные питательные среды: для сохранения основной культуры и для выращивания рабочей культуры. Питательную среду для сохранения основной культуры готовят на основе печени или бульонов и применяют для длительного хранения культуры без пересевов (до 3 мес). На этой среде культура развивается медленнее, с меньшим делением клеток и благодаря длительным интервалам между пересевами сохраняется е меньшим риском загрязнения. Питательная среда для выращивания рабочей культуры, Ы, 1717035 А1

tsi)s А 01 К 61/00, С 12 N 1/10//(С 12

N 1/10, С 12 Я 190) (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДАДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ИНФУЗОРИЙ TETRAHYMENA

PYRlF0RMlS (57) Изобретение относится к гидробиоло гии — водной токсикологии, и может быть использовано при культивировании инфузорий Tetrahymena pyriformls. Целью изобретения является стабилизация рН среды и ее удешевление. Питательная среда содержит глюкозу, хлорид натрия, фосфатный буфер, сульфат магния, дрожжевой автолизат и дистиллированную воду. 2 табл. которую используют непосредственно при проведении исследований, например токсилогических, должна об спечивать интенсивный прирост биомассы и стабильность рН при внесении в нее исследуемых химических веществ, быть простой в приготовлении и доступной по составу компонентов.

Известна глюкозная среда для культивирования инфузорий Tetrahymena pyrlformls, содержащая 0,10 г дрожжевого экстракта, 1,5 r глюкозы и 0,10 r хлорида натрия на 100 мл воды.

Недостатками данной среды являются колебания рН в процессе роста инфузорий и при внесении в нее исследуемых химических веществ, содержание в ней дефицитного и дорогостоящего препарата— дрожжевого экстракта, а также обедненный состав по количеству факторов роста, что не позволяет обеспечить интенсивный прирост биомассы.

1717035

25

Известна также аминопептидная среда, которая на 100 мл содержит 13 мл аминопептида, 0,2 r дрожжевого экстракта и бидистилированную воду.

Недостатками аминопептидной среды являются включение в ее состав дефицитных и дорогостоящих препаратов — дрожжевого экстракта и аминопептида, а также нестабильность рН.

Наиболее близкой к предлагаемой является пептонная среда, содержащая на 100 мл среды 2 г пептона, О 5 rглюкозы,,О 1 г дрожжевого экстракта, 0,1 г хлорида натрия и воду.

Недостаток известной среды обусловлен значительным колебанием рН среды при внесении в нее исследуемых химических веществ. Все культуры, и в частности

Tetrahymena pyridormls, во время роста проявляют тенденцию к изменению рН среды

Если. основной частью питательной среды является пептон, то в результате деэаминирования аминокислот образуется щелочь и рН среды увеличивается. При внесении в культуру химических веществ с различным рН с целю определения их токсического воздействия на инфузории, нестабильность величины рН питательной среды ведет к существенным погрешностям в результатах определений. Кроме того, глюкоза-пептонная среда содержит дефицитный и дорогостоящий препарат — дрожжевой экстракт.

Цель изобретения — стабилизация рН среды и ее удешевление.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для культивирования инфузорий Tetrahymena pyrlformis содержит глюкозу, хлорид натрия, дистиллированную воду, дрожжевой автолиэат, фосфатный буфер и сульфат магния в указанных соотношениях.

Фосфаты поддерживают рН среды, кро. ме того, клетка инфузории использует их как источник фосфора и калия. Неорганические фосфаты служат для обеспечения роста микроорганизмов и играют большую роль в клеточном метаболизме, Ионы калия выполняют функцию каферментов и принимают участие в формировании структуры РНК в клетке. Магний является элементом минерального питания. Функцией ионов магния в метаболизме клеток инфузорий является, в основном, активация различных ферментов, помимо этого, ионы магния играют важную роль в регуляции степени агрегации рибосомных частиц.

Ионы магния также необходимы для под-. держания осмотического давления, электроэаряженности и регулирования рН. Сера, входящая в состав сульфата магния, служит источником энергии, потребление ее идет на синтез аминокислот. Таким образом, гидрофосфат натрия, дигидрофосфат калия и сульфат магния, кроме поддержания рН среды, принимают активное участие в росте клетки инфузорий и придают питательной среде новые свойства. Замена пептона и дрожжевого экстракта на дрожжевой автолизат в качестве добавки природного происхождения позволяет увеличить выход биомассы по сравнению с известной питательной средой, уменьшить себестоимость наращивания биомассы и обеспечить доступной питательной среды по составу компонентов, так как дрожжевой автолизат получают из обычных пекарских дрожжей.

Для экспериментальной проверки предлагаемого состава были подготовлены

17 смесей компонентов, на основании которых был выбран оптимальный состав питательной среды (табл. 1). Смеси получали простым смешением фосфатного буфера, глюкозы, хлорида натрия и дистиллированной воды, автоклавированием их в течение

30 мин при 0,5 атм и добавлением непосредственно перед употреблением стерильного

20%-ного раствора сульфата магния и стерильного дрожжевого автолизата, Дрожжевой автолизат получали из пекарских дрожжей следующим образом: к 13,5 r пекарских дрожжей добавляли 50 мл дистиллированной воды и кипятили в течение 30 мин, после чего полученную смесь охлаждали и оставляли при +4 С на 4 — 6 сут, затем при помощи центрифуги при 3000 об/мин в течение 30 мин отделяли осадок и надосадочную жидкость стерилизовали автоклавированием при 0,5 атм в течение 30 мин.

В качестве контроля использовали аминопептидную среду, в которой, как следует из табл. 1, происходит более интенсивный прирост биомассы инфузорий Tetrhymena

pyriformis по сравнению с другими известными средами. Из табл. 1 следует, что максимальный выход биомассы наблюдается при внесении в питательную среду(на 100 мл)

20,00-25,00 мл дрожжевого автолиэата и

0,04-0,05 г сульфата магния. Фосфатный буфер типа Зеренсена взят в соотношении, необходимом для получения среды с рН

7,1.

В табл. 2 представлены данные по себестоимости наращивания биомассы инфузорий Tetrahymena pyrlfornls в известных и, предлагаемой питательных средах. Предлагаемая питательная среда позволяет снизить себестоимость наращивания биомассы в 15,8 раз по сравнению с аминопептидной, в 2,8 раза по сравнению с глюкоэной и в 5,8 раз Ilo сравнению с пептонной средами.

1717035 с целью стабилизации рН среды и ее удешевления, она содержит дополнительно фосфатный буфер — гидрофосфат натрия и дигидрофосфат калия и сульфат магния, а в качестве добавки природного происхо)кдения используют дрожжевой автолизат при следующем соотношении компонентов (на

100 мл среды), г:

Гидрофосфат натрия 0,35-0,36

Дигидрофосфат к )лия 0,18-0,19

Сульфат магния 0,04-0,05

Глюкоза 1,00-1,05

Хлорид натрия 0,10-0,11

Дрожжевой автолизат 20,00-25.00

Дистиллированная вода Остальное

Изобретение обеспечивает стабилизацию рН среды в процессе роста инфузорий и внесении в культуру исследуемых веществ и удешевление среды исходя из себестоимости наращивания биомассы за счет ис- . 5 пользования доступных и дешевых компонентов и повышения интенсивности роста культуры.

Формула изобретения 10

Питательная среда для культивирова-. ния инфузорий Tetrahymena pyrlformls; содержащая глюкозу, хлорид натрия, добавки

- природного происхождения и дистиллированную воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, 15

Таблица 1

Сопериайие компойейтое, г ° йа 100 мп среды

Питательная среда

NaC1 дроюгеевой дмимопеп- Лровиевой Пелтон автоли- 1тид (мл) .экстракт зат (мл) КНзРОч MOSOy Глюкоза

1 з

Оыкод биомассы, 2 к контролю

ПаеНРО, 100

0,20

0,10

0,10

92,0

2,00

0,50

Таблица 2

Составитель М, Лахонина

Техред M.Moðlåíòàë Корректор M. Кучерявая

Редактор А. Огар

Заказ 823 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб.,4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Предлагаемая

2

4

6

8

ll

12

13

14

16

17

Глюкозная дминопептидная (контроль7

Пептонная

0,35

0,35

0,35

0,35

0.35

0,35

О>35

0,35

0,35

0,34

0,36

0,355

0,35

0,35

0,35

0,35

0,35

О ° 18

0,18

0,18

0,18

0,18

0,18

0,18

0,18

0,18

О,.1 8

0,18

0,18

0,19

0,185

0,18

0,18

0,18

О,04

0,04

0,04

0,04

0,00

0,035

0,04

0.045

0,05

0,04

0,04

0,04

О, 04

0,04

0,04

О,Оч

0,04

1,00

1,00

1,00

1,00

1,00

1 ° 00

1,00

1,00

1,00 . 1,00

1,00

1.,00

1,00

1,00

1,05

1,00

1,00

1,50

0,10

0,10

0,10

0,10

0,10

0,10

0,10

0,10

0,10

0,10 0,10

0,10

0,10

0,10

0,11

0,105

0,10

22,5

2О

138,0

174,5

173,8

160, О

127,3

133,0

174,5

172,0

170,5

144,0

174,0

174,0

173,8

174,0

174,5

174,3

174,3

78,7