Способ определения сенсибилизации организма к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для определения сенсибилизации к антигенам белковой природы при патологиях желудочно-кишечного тракта. Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения сенсибилизации к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта . Поставленная цель достигается тем, что суспензию лейкоцитов больного вносят в планшет для иммунологических исследований , лунки которого предварительно обработаны специфическим антигеном (опыт) и нейтральным белком (контроль). Инкубируют в течение 10-15 мин при 4 - 6°С и 30-45 мин при 37°С. Далее определяют показатель сенсибилизации организма, как процент сенсибилизированных лейкоцитов в исследуемой суспензии. При показателе сенсибилизации менее 10% констатируют отсутствие сенсибилизации организма к исследуемому антигену; от 11 до 20% - выраженную сенсибилизацию; 31 % и более - сильную сенсибилизацию организма. Для проведения исследования достаточно 0,5 - 1,0 мл гепаринизированной крови. Способ характеризуется высокой точностью результатов и экономичностью. 1 табл. СП С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ .СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s G 01 N 33 /53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4727047/14 (22) 04.08.89 (46) 15.05.92. Бюл. М 18 (71) Донецкий государственный медицинский институт (72) Л,И.Слюсарь, А,А.Сохин, В.Г.Курилова и

К, Г,Селезнев (53) 615.475(088.8) (56) Lesowre P„Bach J,F, Properties of

bi specific cosete-forming ceil s — Ann

Jmmunol(Just. Pasteur), 1976, н.127, р 25-30. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ОРГАНИЗМА К АНТИГЕНАМ

БЕЛКОВОЙ ПРИРОДЫ ПРИ ПАТОЛОГИИ

ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для определения сенсибилизации к антигенам белковой природы при патологиях желудочно-кишечного тракта.

Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения сенсиИзобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения сенсибилизации организма.

Способ осуществляется следующим образом

Многолуночный планшет для иммунологических исследований, изготовленный из материала, обладающего свойством адсорбировать белок на своей поверхности за счет ковалентной связи, обрабатывают специфическим антигеном (опыт) и нейтральным белком (контроль), Адсорбцию проводят путем внесения антигена, разве„„!Ж„„1734019 А1 билизации к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта, Поставленная цель достигается тем, что суспензию лейкоцитов больного вносят в планшет для иммунологических исследований, лунки которого предварительно обработаны специфическим антигеном (опыт) и нейтральным белком (контроль). Инкубируют в течение 10-15 мин при 4 — 6 С и 30 — 45 мин при 37 С. Далее определяют показатель сенсибилизации организма, как процент сенсибилизированных лейкоцитов в исследуемой суспензии, При показателе сенсибилизации менее 10% констатируют отсутствие сенсибилизации организма к исследуемому антигену; от 11 до 20%— выраженную сенсибилизацию; 31% и более — сильную сенсибилизацию организма. Для (/) проведения исследования достаточно 0,5—

1,0 мл гепаринизированной крови. Способ характеризуется высокой точностью результатов и экономичностью. 1 табл.

Ф денного фосфатным буфером (рН 7,2-7,4), до ( концентрации белка 10-100 вкг/мл в объеме °

0,1-0,2 мл и внесением в контролвные лунки аналогичного объема нейтрального белка (для человека — желатин. бычий алвбумин), разведенного до концентрации 0.1-0,5 $. «е

Планшеты инкубируют при 18-22 С в течение 16-18 в стерильных условиях при периодическом встряхивании, затем растворы антигена и нейтрального белка удаляют и лунки планшета трижды промывают фосфатным буфером, После высушивания планшеты готовы к использованию. Срок хранения, при условии соблюдения стерильности не менее 1 года.

1734019

0 — 94

ЧСЛ—

200

4500 = 292,5 (ко );

К;

ЧСЛ

ЧСЛ—

4500 = 22,5 (ко мкл);

В исследуемой крови определяют исходную концентрацию лейкоцитов, Любым известным способом выделяют культуру лейкоцитов и считают количество клеток в суспензии. После тщательного, но осторожного перемешивания вносят в опытную и контрольную пробы по 0,1-0,2 мл клеточной суспензии с концентрацией лейкоцитов

200-600 клеток/мкл. Планшет герметично закрывают и инкубируют в течение 10-15 мин при 4-6 С, а затем 30-45 мин при 37 С, после чего проводят подсчет несвязавшихся лейкоцитов в опыте и контроле и определяют число сенсибилизированных лейкоцитов (ЧСЛ) и показатель сенсибилизации организма (ПС) по формулам — 100, Х вЂ” У

Х вЂ” концентрация лейкоцитов в суспензии, используемой в способе;

У1 — количество свободных (несвязавшихся с энтигеном)лейкоцитов в контрольной пробе;

Уг — количество свободных (несвязавшихся с антигеном) лейкоцитов в контрольной пробе;

К вЂ” концентрация лейкоцитов в цельной крови.

При показателях сенсибилизации (ПС) менее 10% констатируют отсутствие сенсибилизации к изучаемому антигену, от 11 до

20% — слабую сенсибилизацию, от 21 до

30% — выраженную, а при 31% и более— сильную сенсибилизацию организма.

Пример. Больной Б-в, 53 года, поступил в клинику с диагнозом: язвенная болезнь желудка, активная фаза с болевым и диспептическим синдромами, Рентгенологически определили наличие" ниши" по малой кривизне желудка, в РТМЛ с антигенами желудка, печени, тонкого и толстого кишечника были установлены показатели индекса миграции лейкоцитов 0,47;

0,85; 0,90; 0,85 соответственно, Исследование было проведено с тканевыми антигенами желудка, печени, тонкого и толстого кишечника, которые были предварительно адсорбированы в лунках планшета для иммунологических исследований производства Ленинградского завода медицинских полимеров. В качестве нейтрального белка (контроль) использовали желатин для парентерального введения.

Получены следующие результаты:

Учитывая, что для исследования использовалась суспензия лейкоцитов с концентрацией клеток 2,0х10 в 1 мкл.

Сенсибилизация к антигенам желудка;

5 200 — 92 — 200 — 94

ЧСЛ—

4500 = 945 (kM«);

10 100 =

= 39,6 ;

;о

Сенсибилизация к антигенам печени:

200 — 94

100 = 12,3 %;

Сенсибилизация к антигенам тонкого кишечника:

200 — 94

30, 100 = 0,94%, Сенсибилизация к антигенам толстого кишечника;

35 ЧСЛ—

4500 = 112,5 (ко"мкл );

200 — 94

40 100 = 4,7о/

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить у больного Б-ва

45 наличие сильной сенсибилизации к антигенам желудка, слабой сенс билизации к антигенам печени и отсутствие сенсибилизации к антигенам толстого и тонкого кишечника, что соответствует данным клинического течения болезни, а также результатам рентгенологического и иммунологического обследований, Полученные результаты свидетельствуют о высокой точности способа (не менее

95%) и определяют критерии оценки сенсибилизации указанные выше (ПС). Определение абсолютного числа сенсибилизированных лейкоцитов (ЧСЛ) является дополнительным критерием, индивидуальным для каждого больного и позволяет судить о количествен1734019 ной стороне сенсибилизации организма к конкретному антигену, Главными преимуществами предлагаемого способа являются его точность и простота выполнения, а также ускорение способа. что, с целью повышения точности и упрощения способа, в лунки планшет для иммунологического анализа, обрабатываемых специфическим антигеном либо контроль5 ным нейтральным белком, вносят суспензию лейкоцитов, .инкубируют в течение

10-15 мин, при 4- 6 С и 30-45 мин при 37 С и оценивают связывание по показателю сенсибилизации, при этом рассчитывают

10 процент сенсибилизированных лейкоцитов в исследуемой суспензии и при показателе от 11 до 20 констатируют — слабую, от 21 до 30 — выраженную и свыше 30 — сильную сенсибилизацию.

Формула изобретения

Способ определения сенсибилизации организма к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта путем оценки связывания сенсибилизированных лейкоцитов больного со специфическим антигеном, отличающийся тем, 20

30

Составитель Р,Гуменюк

Техред М,Моргентал Корректор О,Кравцова

Редактор Ю. Середа

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1667 Тираж Подписное

BÍÈÈÏÈ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб„4/5