Способ определения стимулирующего действия фармпрепаратов на кислородсвязывающую функцию крови

 

Цель изобретения - повышение экономичности и точности способа. Способ заключается в помещении донорской крови в замкнутый контур, содержащий насос, мембранный оксигенатор и оксигемометр измерения в крови оксигемоглобина до и после введения форморепарзта, причем возможно использовать донорскую кровь со сроком хранения более 21 дня.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СЯ Ф

РЕСПУБЛИК

„.SUÄÄ 17 9295 А1 (31)5 С 01 N 33/72

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

П0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ. Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 47291.25/14 (22} 11.08.89 (46) 07.06.92. Бюл. У 21 (71) Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им.С.И.Кирова (72) В.В. Петраш, Л.А.Тиунов, И.С.Изюмцев, E.Â.Êîñòþøîâ, В.В.Костю- шов и А.А.Тяптин (53) 61 5.475(088.8}. (56} Фок Н.В. и др, Биофизика, 1988> и 4, с.622-625. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТИИУЛИРУЮИзобретение относится к медицине, в частности к Фармакологии, и может быть использовано для отбора и оценки воздействия фармакологических препаратов на кислородотрансйортную функцию крови.

Цель изобретения - повышение эко" номичности способа и точности îïðåделения.

Указанная цель достигается тем, что в качестве пробы крови применяют отмытые эритроциты человека, взвешен" ные в изотоническом 0,2 И фосфатном буферном растворе с рН 6,0-6,$ в концентрации 4 ° 10 в 1 л, причем отмы" тые эритроциты получают из донорской крови со сррком хранения более.:

21 дня, а оксигенатор в контуре цир-, кулирующей пробы крови выполняют мембранным.

Описываемый способ осуществляет ся следующим образом.

ЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ФАРИПРЕПАРАТОВ НА КИСЛОРОДСВЯЗЦВАЮЩУЮ ФУНКМИЮ КРОВИ (57) Цель изобретения - повышение . экономичности и точности способа.

Способ заключается в помещении донорской крови в замкнутый контур, содержащий насос, мембранный оксигенатор и оксигемометр измерения в крови оксигемоглобина до и после введения форморепарата, причем возможно использовать донорскую кровь со сроком хранния более 21 дня.

Из флакона с донорской кровью 6олее 21 дня хранения получают отмытые эритроциты по стандартной методике.

Далее эритроцитарнув массу помещают в раствор изотонического 0,2 И фос-.

Фатного буфера с рН 6,0-6,5 в .концентрации 4 ° 10 в 1 л. Полученную взвесь эритроцитов разделяют .на две или более равных порций, например,, по 100 мл. Одну. из порций вводят в замкнутый контур циркуляции, в котором содержатся насос, оксигенатор и оксигемометр. После заполнения цир куляторного контура пробой крови.

;(взнесь эритроцитов в растворе) йз- меряют имеющийся уровень парциальйо" го давления кислорода и оксигемогло- бина. После этого, регулируя скорость вращения насоса, начинают. рециркуляцию пробы крови в контуре и одновременно начинают производить w дачу кислорода в камеру,оксигенато39295

3 17 ра, отделенную от крови полупроница- емой мембраной. За счет регуляции скорости циркуляции пробы крови в контуре и обьема подачи кислорода устанавливают последовательно нарастающие уровни парциального давления кислорода и определяют соответствующие им величины оксигемоглобина, строя таким образом зависимость между этими па.раметрами (кривая диссоциации оксигемоглобина),; После этого контур промывают физиологическим раствором и вновь заполняют второй порцией подготовленной пробы крови, в которую добавляют исследуемый фармакологический препарат в нужной дозировке. Далее повторяют процедуру получения зависимости между парциаль" ным давлением кислорода и содержа- нием оксигемоглобина. После этого сопоставляют зависимости, получен" ные для обеих порций пробы крови, т.е . исходной и с наличием исследуемого фармакологического препарата.

По разнице полученных зависимостей судят о действии данного фармакологического препарата.на кислородсвязывающую функцию крови..Аналогичным образом может осуществляться подбор доз препаратов.

П р и и е р !. Отмытые эритроци» ты из донорской крови 22 дней хранения взвешены в изотоническом 0,2 М фосфатном буферном растворе с рН 6,2 в концентрации 4 ° 10 а 1 л.

Весь обьем взвеси эритроцитов был. разделен на 5 проб по 100 мл. Циркуляторный замкнутый контур состоял из насоса типа AT-2 (перфузионный роликовый насос), гемооксиметра фирмы "НИХОН КОДЕН" Япония и мембранного малопоточного оксигенатора МАГ-01 (экспериментальный образец) с полупроницаемой мембраной Карбоксил- АС.

После заполнения контура первой порцией эритроцитарной взвеси производили последовательные измерения содержания оксигемоглобина при наращи. вании уровня парциального давления кислорода до 300 мм рт.ст. Затем циркуляция была прекращена, контур был промыт физиологическим раствором и вновь заполнен порцией эритроцитарной взвеси с добавлением исследуемого фармакологического препарата> например унитиола в количестве 0,2 мг на 100 мл циркулирующей массы эритро. цитарной взвеси. Далее производили действия, аналогичные предыдущим, по определению кривой диссоциации оксигемоглобина. Пробы были также повторены при дозах унитиола 0,4»

0,61 0,8; 1;0 мг на 100 мл эритро" цитарной взвеси..

В качестве примеров были выбраны также с едующие препараты: дибазол (как препарат,, повышающий резистент.. ность организма), цитохром-С (при-, меняемый в качестве антигипоксанта).

D-пеницилламин (тиолсодержащий антиоксидант) .

Пример 2. Исследования про-. водили согласно предлагаемому способу и способу-прототипу. Оксигенацию крови проводили при постоянном уровне парциального давления кислорода

2О 250 мм рт.ст.

Диабазол вносили в исследуемую пробу в количестве 0,2, 0,4,. 0,6, 0,8 и 1 мг на 100 мл крови. Подобные концентрации достигаются при пар" д энтеральном введении препарата па" циентам. Ни при одной из перечисленных концентраций препарата уровень оксигемоглобина статистически-до стоверно не отличался от исходного (в

16 пробе крови без добавления препара- . та), он колебался в пределах 96-98ь (при способе-прототипе) и 61-663 (при данном способе) без какой-либо заметной тенденции.

Цитохром-С добавляли из расчета

З 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мг на 100 мл пробы крови. Сходные концентрации препарата в крови имеют место при внутривенном его введении в процессе

46 общепринятой методики лечения. Уроч вень оксигемоглобина в.пробах крови при указанных концентрациях цитохрома-С в ходе оксигенации. не поднимался выше исходного на статистически-достоверную величину, он ко-,.

<> лебался в пределах 97-98 ь (при способе-прототипе) и 61-633 (при данном способе).

0-пеницилламин добавляли из расче- та 0,3, 0,6, 0,9, 1,2, 1,5 мг на

® !00 мл пробы крови,,Концентрации такого порядка имеют место при лечении данным препаратом согласно схемам приема, приводимым в фармако" логических справочниках. При спосо" бе-прототипе не удалось внявить статистически-значимых тенденций ввзменениях уровня оксигемоглобина крови в процессе оксигенации. Количество

Составитель В.Иитюшин

Техред А.Кравчук КорректоР Д.Обручар

Редактор Л. Волкова

° \ ФЮ ° а ° В

Заказ 2000 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35 ° Раужская наб. ° д..4/5.

Производственно-издательский комбинат "Патент"., r.Óàãîðîä, ул. Гагарина, 101,.

17)9295 6 оксигемоглобина в этом случае воз- " родсвязывающую функцию крови, вклюрастало от,963 в исходной пробе кро- : чающий введение пробы крови в замви (без препарата) до 983 в пробе с . кнутый контур, содержащий насос, ьк-. концентрацией D-newqvmiawwa 1,2 и сигенатор и оксигемометр, измерение снижалось до 973 в пробе с концент- в крови оксигемоглобина до и после рацией 1,5 мг/100 мл. При применении введения фармпрепарата при заданном предлагаемого способа отмечалось воз- парциальном давлении кислорода, о т"

° растание количества оксигемоглобина л и ч а ю шийся тем, что, с це от 603 в контрольной пробе до 783 в 1© лью повыаения экономичности способа, пробе с концентрацией D -пеницилл- точности определения за счет физиолоамина 0,9 мг/100 мл и снижение до гичности и стандартизации условий, 723 в пробе с концентрацией препа- оксигенатор выполняют мембранным, а рата 1,5 мг/100 мл. в качестве пробы используют суспенф о P м У л а и 3 о б Р е т е н и " >> зию эритроцитов. донорской крови со сроком хранения олее дня.

Способ определениЯ стимУлирУюЩего сроком хранения 6 л е 21 д действия фармпрепаратов на кисло