Штамм энтеровируса свиней для контроля иммуногенности вакцины против болезни тешена свиней

 

Использование: вирусология, ветеринария . Сущность изобретения: штамм энтеровирусов свиней, характеризующийся стабильной вирулентностью для поросят, который может быть использован для контроля иммуногенности вакцины против болезни Тешена свиней. Штамм Черниговский-2372 вируса болезни Тешена свиней обладает высокой вирулентностью для свиней в возрасте до 1 года: вызывает 100%-ную гибель на 5-20-е сутки после интрацеребрального заражения с характерной для данного заболевания клиникой и патолого-анатомическими изменениями.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕ СПУБЛИК (я)з С 12 и 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ :- ";;Ц jul,. "-" 1

ЯМ 1 1ИГА.

g® ЩОТЕЫ.Ъ 4 фь.

00 4

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4858710/13 (22) 09.08.90 (46) 15.07.92. Бюл. № 26 (71) Украинский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) В,Ф,Романенко, О.Г.Прусс, В.И,Сорока и Н,В.Бабич (53) 576.8.094.29 (088.8) (56) Жестеров В,И., Сергеев В,А., Коломыцов Л;А., Евсеев В.M. Контроль иммуногенности вакцины против болезни Тешена.—

Ветеринария, 1984, ¹ 4, с,24-26. (54) ШТАММ ЭНТЕРОВИРУСА СВИНЕЙ

ДЛЯ КОНТРОЛЯ ИММУНОГЕННОСТИ ВАКИзобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой новый штамм энтеровирусов свиней, используемый для контроля иммуногенности вакцины против энзоотического энцефаломиелита (болезни Тешена) свиней.

Целью изобретения является штамм энтеровирусов свиней, характеризующийся стабильной вирулентностью для поросят, который может быть использован в качестве контрольного для оценки иммуногенной активности и специфичности вирус-вакцины против болезни Тешена свиней.

Поставленная цель достигается получением штамма "Черниговский-2372"

Entегоvirus Suls — 1, депонированного в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов. регистрационный ¹ 286/5., Ж,„, 1747487 А1

ЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ ТЕШЕНА СВИНЕЙ (57) Использование: вирусология, ветеринария. Сущность изобретения: штамм энтеровирусов свиней, характеризующийся стабильной вирулентностью для поросят, который может быть использован для контроля иммуногенности вакцины против болезни

Тешена свиней. Штамм "Черниговский-2372" вируса болезни Тешена свиней обладает высокой вирулентностью для свиней в возрасте до

1 года; вызывает 100;(,-ную гибель на 5-20-е сутки после интрацеребрального заражения с характерной для данного заболевания клиникой и патолого-анатомическими изменениями.

Исходный штамм выделен из головного мозга подсвинка 10-месячного возраста, вынужденно убитого с характерными для болезни Тешена признаками, Полученный штамм "Черниговский2372" энтеровирусов свиней имеет следующие характеристики, .

Морфологические признаки, Сферическая форма, типичная для энтеровирусов свиней, имеет икосаэдральную симметрию, размер вириона 28 нм.

Антигенные свойства. Штамм "Черниговский-2372" антигенно родственный референтному штамму Konratice Entегоvirus

Suis — 1: в реакции перекрестной нейтрализации вирус в дозе 1000 ТЦДБо/мл нейтрализуется 20 нейтрализующими единицами антисыворотки к референтному штамму

Konratlce; антисыворотка к штамму "Черни. говский-2372" в дозе 20 нейтрализующих

1747487 единиц нейтрализует референтный штамм

Kontratice в дозе 1000 ТЦДмlмл.

Биологические свойства. Штамм "Черниговский-2372" обладает высокой репродуктивной активностью на культуре клеток перевиваемой линии СПЭВ и накапливает ся в них до 5,5 Ig ТЦД о/мл в течение 24 ч при 37 С «-0,5. Обладает бляшкообразующими свойствами на перевиваемых клетках линии СПЭВ. Образует однородные бляшки размером 0,5 — 1 мм.

Физико-химические свойства. Является

РНК-содержащим, репродукция вируса в культуре клеток не подавляется присутствием в поддерживающей среде 100 мкг/мл

5-бром-2-дезоксиуридина и 0,1-1,0 мкгlмл актиномицина Д, устойчив к воздействию хлороформа, эфира, трипсина. Не ингибируегся средами со значениями рН 2-11. Понижает титры на 2-3 Ig ТЦД о после прогревания при 500С в течение 50-60 мин.

Термоустойчив при прогревании 50 С в течение 60 мин в присутствии 1 M хлористого магния.

Стабильность основных свойств штамма при пассировании в культуре клеток

СПЭ — не менее 10 пассажей (срок наблюдения).

Основные условия хранения, В виде

10 -ной мозговой суспензии на растворе

Хенкса штамм хранится при рН 7,2-7,6 и температуре 20-40 С в течейие 6 лет без снижения инфекционной активности (срок наблюдения).

Безвредность для лабораторных животных. Штамм "Черниговский-2372" безвреден для белых мышей, морских свинок и кроликов при внутримышечном, внутривенном, подкожном введениях.

Штамм "Черниговский=2372" вируса энзоотического энцефаломиелита свиней обладает высокой вирулентйостью для свиней в возрасте до 1 года, вызывает 1007ную гибель на 5-20-е сутки после интрацеребрального заражения. Свиньи погибают с характерной для данного заболевания клиникой и патологоанатомическими изменениями.

Инфекционный титр вируса для поросят.

3 мес возраста составляет 10 ЛД о/мл, Штамм "Черниговский-2372" используют в качестве контрольного штамма для оценки иммуногенной активностй вакцинного штамма, матровой расплодки и производственных серий вирус-вакцины против болезни Тешена свиней, Пример 1, Оценку иммуногенности вакцинного штамма вируса энзоотического энцефаломиелита свиней проводят путем

10 кратно (утром и вечером) измеряют темпе20 ратуру тела. Контрольные поросята заболевают на 5-20-е сутки после зараже30

55 определения устойчивости привитых животных к заражению патогенным штаммом вируса. Для этого вакцинный штамм

"Перечинский-642" Entегоvirus Suis — 1 вводят 4 поросятам трехмесячного возраста внутримышечно в область внутренней стороны бедра в обьеме 1 мл. Через 14 дней привитых и 4 контрольных (непривитых) поросят заражают вирулентным штаммом

"Черниговский-2372" с активностью не ниже 3,5 !ц ТЦДьо/мл. Перед использованием гомогенизированную мозговую ткань оттаивают и дОбавляют раствор Хенкса в соотношении 1;10. Суспензию фильтруют через стерильный марлевый фильтр, Поросят заражают интрацеребрально в обьеме 0,4 мл на голову. Наблюдение за поросятами ведут

30 сут, в течение которых ежедневно двуния с клиническими признаками болезни

Тешена; кратковременное, в течение 1-2 дней, повышение температуры тела до 40,541,0 С в продромальный период, расстройство координации движения, слабость, гиперстезия кожи, у отдельных животных рвота; паралич конечностей наступает обычно на 8-12-е сутки, а гибель животных на 10-16-е сутки после заражения.

Привитые поросята устойчивы к вирулентному штамму "Черниговский-2372".

Пример 2. Штамм "Черниговский2372" вируса энзоотического энцефаломиелита свиней используют для контроля иммуногенной активности и специфичности матровой расплодки вакцинного штамма вируса болезни Тешена свиней. С этой целью пяти поросятам трехмесячного возраста вводят внутримышечно в области внутренней стороны бедра двукратно, с интервалом 14 дней, по 1 мл матровой расплодки вируса, Через 14 сут после второго введения всех привитых и двух контрольных поросят заражают вирулентным штаммом вируса болезни Тешена свиней "Черниговс Kèй-2372".

Для этого 107-ную мозговую суспензию на растворе Хенкса, предварительно профильтрованную через стерильный марлевый фильтр, вводят интрацеребрально в объеме 0,4 мл на голову. В течение 30 сут ведут наблюдение за животными с ежедневной двухразовой термометрией. Матровая расплодка вакцинного штамма вируса считается пригодной для серийного изготовления на ее основе вирус-вакцины, если привитые поросята после заражения вирулентным штаммом вируса "Черниговский2372" не заболевают, а контрольные

1747487

Составитель О,Прусс

Техред M.Ìîðãåíòàë

Корректор M.Äåì÷èê

Редактор Т.Лазоренко

Заказ 2473 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 животные заболевают и гибнут с характерными для болезни Тешена признаками.

Пример 3. Штамм "Черниговский2372" вируса энзоотического энцефаломиелита свиней используют при оценке иммуногенной активности и специфичности вирус-вакцины против болезни Тешена свиней. Контроль вакцины, изготовленной биофабрикой, проводят на пяти поросятах трехмесячного возраста, два из которых являются контрольными. Трем поросятам внутримышечно в область внутренней стороны бедра вводят по 1 мл вакцины. Через две недели после второй иммунизации вакцинированных и контрольных поросят заражают интрацеребрально вирулентным штаммом вируса болезни Тешена свиней

"Черниговский-2372" в объеме 0,4 мл на го5 лову. Вакцина считается иммуногенной, если привитые поросята остаются живыми после заражения на протяжении 30 сут, а все контрольные животйые заболевают и гибнут с характерной для болезни.Тешена

10 клиникой.

Формула изобретения

- Штамм энтеровируса свиней ВГНКИ М

286/5 для контроля иммуногенности вакци- . ны против болезни Тешена свиней.