Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения иерсиний

 

Использование: медицинская микробиология , бактериологическая диагностика иерсиний. Сущность изобретения: для повышения дйфференциальнодиагностических свойств в питательную среду для выделения иерсиний вводят в качестве индикатора 1,6%-ный спиртовой раствор бромтимолового синего при следующем соотношении компонентов , г/л: глюкоза 9,0-10,0, мочевина 4,5-5,0, желчь 19,0-20,0, 1,6%-ный спиртовой раствор бромтимолового синего 7,5-8,0, сухой питательный агар 33,0-35,0, вода до 1 л. 2 табл. (Л С

СО103 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (ф>с С 12 fJ 1/20, С 12 Q 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4905234/13 (22) 25.01.91 (46) 30.11.92. Бюл. Р 44 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера и Санитарно-эпидемиологическая станция Петроградского района

r.ËåHèHãðàäà (72) Г.Я.Ценева, ф.Г.Дятлов и В.Г.Мессорош (г56) Методические рекомендации по лабораторной диагностике кишечного иерси ниоза . М., 1979.

Методические рекомендации "Псевдотуберкулез человека (этиология, эпидемиологил, клиника, лабораторная диагностика, лечение и профилактика)".

Владивосток, 1974.

Авторское свидетельство СССР

Y 209650, кл . С 12 (q 1/04, 1966 .

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к бактериологической диагностике иерсиний.

Известна дифференциально-диагностическая среда Серова для выделения . иерсиний энтероколитика и псевдотуберкулеэа (1, 2, 3).

Однако известная среда имеет сле дующие недостатки: выросшие колонии темно-красного цвета (полиморфные по форме и консис" тенции) трудно дифференцируются с другими энтеробактериями, окрашиваются в красный цвет, некоторые компоненты среды отечественной промышленностью не выпускаютсл.

ГОСУДАРСТВ Е H HOF ПАТ ТЕ HTHOE

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР),,50 „„1778182А! (54 ) ДИМЕ Р ЕНЦИЛЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ

ПИТАТЕЛЬНАЯ С P ЕДА ДЛЯ ВЦД ЕЛЕ НИЯ

ИЕРСИНИИ (57) Использование: медицинская микробиология, бактериологическая диагностика иерсиний. Сущность изобретения: для повышения дИфференциальнодиагностических свойств в питательную среду для выделения иерсиний вводят в качестве индикатора 1,6 -ный спиртовой раствор бромтимолового синего при следуюцем соотношении компонентов, г/л: глюкоза 9,0-10,0, мочевина

4,5-5,0, желчь 19,0-20,0, 1,63-ный спиртовой раствор бромтимолового синего 7,5-8,0, сухой питательный агар

33,0-35,0, вода до 1 л. 2 табл.

° В

Цель изобретения - создание среды, обеспечивающей рост колоний иерсиний 4 однородных >to цвету и форме. СО

Сущность изобретения заключается в следующем: в среду, включающую глю- (,ф козу, мочевину и сухой питательный, Я агар, вводят медицинскую желчь, спиртовыо раствор броитинолового синего, ) и водопроводную воду при их соотношении, г/л:

Глюкоза 9,0-10,0

Мочевина 4,5-5,0

Медицинская желчь 19,0-20, 0

1,63-ный спиртовый раствор бромтимолового синего 7,5-8,0

Сухой питательный

1778182 агар 33;0-35,0

Водопроводная вода До 1,0 л

Способ приготовления.

0 0,9 л водопроводной воды растно5 ряют нагреванием сухой питательныи агар и медицинскую желчь, антоклави" руют 20 мин при 0,5 атм. После охлаждения (неэначительного — до 80 С) добавляют глюкозу, мочевину, бромтимоловый синий и водопроводную воду до 1,0 л. Среду перемешивают и разливают в чашки Петри. рН среды 7,8.

Среду хранят при 10 С 7-10 суток.

На среде с указанным составом колонии иерсиний различных видов через

48 ч растут однородными по форме и цвету — голубые или голубые с желтоватым краем на синем фоне среды, сухие, матовые, сдвигающиеся по поверх- ности агара петлей. Они легко дифференцируются визуально от бактерий кишечной группы (не разлагающих мочевину), приобретающих на -:реде с бромтимоловым синим желтую ок раску с ха" рактерной морфологией (выпуклость, сочность).

Среда готовится из отечественных ингредиентов, отличается простотой изготовления, дешевизной (стоимость

1 л в 8 раз дешевле среды Серона).

Результаты испытаний образцов среды с различными количественными соотношениями компонентов представлены в примерах.

Пример 1. Компоненты, составляющие min концентрации в среде (глюкоза - 9,0 г, мочевина — 4,5 г, медицинская желчь - 19,0 г, 1,б3-ный раствор бромтимолового синего7,5 r, сухой питательный агар -, :., 33,0 r, водопроводная вода - до 1л) использовали. для приготовления среды, по способу, описанному выше. В ходе проведенных исследований изучено

42 штамма иерсиний и 9 штаммов других энтеробактерий (2 штамма Shigella sonnei, Sh. fleineri, E. coli, 3 Ба1п>опе11а, 1 штамм Kleb s ie1 1 a

pneumonia), которые параллельно засевали на среду с бромтимоловым си- M ним в дозе 1Оз микробных клеток на каждую чашку в нескольких вариантах,,. иерсинии псевдотуберкулеза и иерсинии энтероколитика - монокультуры и иерсинии в смеси с другими энтеро" бактериями. В результате проведенных исследований установлено, что на предлагаемой среде иерсинии псевдотуберкулеза через 48 ч растут в виде мелких голубых колоний (1-2 мм) с фестончатым краем, выпуклые с приподнятым центром и суховатой матовой поверхностью на синем фоне среды. (Через 24 ч края колоний могут иметь слегка желтоватый оттенок) . Колонии иерсиний энтероколитика через 48 ч крупнее (2-4 мм), выпуклые, сухие с матовым налетом, голубого цвета.

Колонии других энтеробактерий (не разлагающих мочевину — шигелл, сальмонелл, эшерихий и др.) изменяют цвет среды, приобретая желтый цвет, выпуклые, сочные, легко дифференцируются от иерсиний.

Пример 2. Компоненты, составляющие максимальные концентрации в среде (глюкоза - 10,0 r, мочевина

5,0 г, медицинская желчь - 20,0 г, 1,63-ный спиртовый раствор бромтимолоного синего - 8,0 r, сухой питательный агар - 35,0 г, водопроводная вода - до 1,0 л) ° Среду готовили аналогично примеру 1, испытывали культуры бактерий, приведенные в примере 1.

В этой серии опытов при посеве иерсиний псевдотуберкулеза и иерсиний энтероколитика через 48 ч отмечали рост мелких колоний,по форме и цвету заметно не отличающихся от роста, описанного в примере 1. При лосе" ве иерсиний в смеси с энтеробактериями отмечали четкую. дифференциацию колоний иерсиний по цвету, размерам и форме от других энтеробактерий. Проведенные испытания позволили сделать вывод, что укаэанные концентрации

min и "max содержания компонентов в заявляемой среде обеспечивают достижение цели, существенных различий . между ними не установлено. Поэтому приведенные соотношения компонентов в среде являются оптимальными.

В серии опытов испытаны также образцы среды, в которые вводили компоненты, отличающиеся от заявляемого состава тем, что их концентрация была меньше минимальной (< min) и больше максимальной (o max). Среду готовили аналогично примеру 1, испытывали культуры, приведенные в примере 1.

Пример 3. Состав среды с

4пп-и концентрацией компонентов, г:

Глюкоза 7,0

Иочевина 3,0

Медицинская желчь 17,0

1,б3-ный спиртовый раствор бромтимоло1 78182

5,0

35,0

До 1,0 л

Т а б л и ц а 1

Характеристика колоний иерсиний на среде с (min содержанием компонентов при посеве иерсиний в дозе 10 микробных клеток на 1 чашку

Иорфология колоний

Количество колоний форма цвет размер

50 -. 60

1 - 3 мм сероватожелтоватый круглые выпуклые сочные

Табли ца 2

Характеристика колоний иерсиний на среде с> max содержанием компонентов при посеве иерсиний 10 микробных клеток на 1 чашку.

Морфология колоний

Количество колоний

Размер Форма : Цвет

°

Трудно дифференцируются Синий при визуальном просмотре

60 - 65 вого синего

Сухой питательный агар 33,0

Водопроводная вода До 1 0 л

Э 5

На среде с (min концентрацией ком понентов отмечали замедленный рост иерсиний, через 48 ч иерсинии псевдотуберкулеза вырастали в виде мелких точечных колоний (1-1,5 мм) сероватожелтоватого цвета. Колонии иерсиний энтероколитика - крупнее (2-3 мм) и имели тот же цвет (табл.1).

При посеве иерсиний в смешанной культуре (шигеллы, сальмонеллы и др.) иерсинии трудно дифференцируются по цвету.

П р и и е р 4. Состав среды с

>пих содержанием компонентов,г (табл.2):20

Глюкоза 13,0

Иочеви на 8,0

Медицинская желчь 23,0

1,63-ный спиртовый раствор бромтимоло- 26 вого синего 11,0

Сухой питательный агар

Водопроводная вода

Полученные резуль гаты свидетельст-. вуют о том, что при содержании компонентов, указанных в примерах 3 и 4, предлагаемая среда не обладает дифференциально-диагностическими свойствами.

Формула изобретения

Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения иер- . синий, содержащая глюкозу, мочевину, желчь, сухой питательный агар, индикатор и воду, о т л и ч а ю щ а яс я тем, что, с целью повышения дифференциально-диагностических свойств среды, она содержит в качестве индикатора 1,63-ный спиртовой раствор бромтимолового синего при следующем соотношении компонентов, г/л:

Глюкоза 9,0-10,0

Иочевина 4,5-5,0

Желч ь 19,0-20,0

1,63-ный спиртовой раствор бромтимоло-.. вого синего 7,5-8,0

Сухой питательный агар . Вода