Способ диагностики миастении

 

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Цель изобретения - повышение точности способа. У больного берут кровь и определяют в ней количество пролактина, соматотропного гормона, Т- лимфоцитов и активных Т-лимфоцитов, вычисляют диагностический коэффициент и при его значении большем 2,4 диагностируют миастению. По сравнению с прототипом снижается частота ошибочных диагнозов на 15,12%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕ Н ЮЕ ПАТЕ HTHOE

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 36800/

I" /E8) / "8 ьц ц 3

/@ (:-. „, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4834263/14 (22) 09.04.90 (46) 30.11,92. Бюл. N 44 (71) Харьковский медицинский институт (72) В.Т.Зайцев, А,К.Флорикян, Ю,Э.Журов, П.Е.Нечитайло, Е.M.Êëèìîâà, В,В.Бойко и

А.Е.Лагода (56) Авторское свидетельство СССР

hk 11303233, кл. G 01 N 33/53, 1982. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИАСТЕ НИИ

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, неврологии и грудной хирургии, и может быть использовано для диагностики миастении.

Целью изобретения является повышение точности диагностики.

Способ осуществляют следующим образом: у больного определяют содержание соматотропного гормона (СТГ), пролактина (П), Т-POK общих лимфоцитов (Т-Л") и Т-PQK активных лимфоцитов (aT-Л), рассчитывают . диагностический коэффициент по соотношению произведения количества Т-Л на концентрацию П и на 0,01 к произведению содержания aT-Л на концентрацию СТГ и при величине диагностического коэффициента большем 2,4 диагностируют миастению.

Для определения уровня пролактина крови используют набор HK ("СЕА-1 RESorin"), содержащий стандартный поепарат пролактина, пролактин, меченный J анти1 1 сыворотку. к пролактину, иммуносорбент, 0,05 М фосфатный буферный раствор, твин20. Плазму для тестирования берут в нативном виде или разбавляют фосфатным буферным расгвором. Из основного раствора стандарта пролактина (50 нг/мл) после. Ж 1778704 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Цель изобретения— повышение точности способа. У больного берут кровь и определяют в ней количество пролактина, соматотропного гормона, Тлимфоцитов и активных Т-лимфоцитов, вычисляют диагностический коэффициент и при его значении большем 2,4 диагностируют миастению, По сравнению с прототипом снижается частота ошибочных диагнозов на

15,12%. довательным разведением в фосфатном бу- ферном растворе готовят еще шесть растворов для построения стандартной кривой

20,10,5,2,1 и 0,5 нгlмл. В тест-пробирки вносят 0,1 мл исследуемой плазмы, 0,1 мл буферного раствора, 0,1 мл раствора меченого гормона и 0,1 мл антисыворотки к пролактину. Для контроля связывающей способности готовят "нулевые" пробы (0,2 мл буферного раствора. 0,1 мл меченого горМона и 0,1 мл антисыворотки) и пробы на общую радиоактивность (0,1 мл меченого пролактина). Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение 18 — 20 ч, по окончании инкубации добавляют по 0,5 мл суспензии иммуносорбента, которую при этом непрерывно перемешивают с помощью магнитной мешалки. Пробирки закрепляют во вращающемся штативе и содержимое перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. Пробы центрифугируют 10 мин при 2500, супернатант отсасывают водоструйным насосом. Осадок промывают 2 2,5 мл фосфатного буферного раствора, содержащего 0,5% твина-20, повторно центрифугируют и удаляют супернатант..Радиоактивность осадков и пробы на общую радиоактивность измеряют в стин1778704 тилляционном гамма-счетчике, Связывание меченного гормона в "нулевых" пробах составляет 15 — 30%. Вычисляют процентное отношение радиоактивности проб к радиоактивности нулевой пробы и строят стандартную кривую, по которой затем находят искомое содержание пролактина в пробе и с поправкой на разведение в плазме.

Уровень СТГ определяют при помощи набора, содержащего стандарт соматотропина человека. Соматотропин меченый J

З1 антисыворотку к СТГ, преципитирующую кроличью антисыворотку против у-глобулинов морской свинки, боратный буферный раствор. Плазму гепаринизированной крови разводят буферным раствором в три раза или больше в зависимости от ожидаемого уровня СТГ. Из основного раствора стандарта СТГ готовят последовательным разведением в буфере растворы со следующими концентрациями гормона 5, 2,5, 1,25 и 0,5 нг/мл. B 1 — 2-ю тест-пробирки вносят по 0,1 мл буфера (нулевые пробы), в

3 — 12-ю по 0,1 мл стандартных растворов немеченого гормона, в остальные по 0,1 мл разведенной плазмы. Во все пробирки добавляют по 0,1 мл антисыворотки. Содержимое перемешивают, инкубируют 6 ч при

37 С, после чего по все пробирки вносят по

0,1 мл меченого СТГ. Инкурируют 18 ч при

37 С, Во все пробирки добавляют по 0,1 мл преципитирующей антисыворотки. Пробирки встряхивают и инкубируют 1 ч при 37 С, центрифугируют 10 минут при 2000, супернатант декантируют, Преципитат промывают 0,5 мл буферного раствора, центрифугируют1 и декантируют. Радиоактивность преципитатов измеряют в сцинтилляционном гамма-счетчике, Вычисляют процентное отношение радиоактивности проб к радиоактивности нулевой пробы и по стандартной кривой с поправкой на разведение плазмы находят искомую коКцентрацию СТГ.

Для количественного определения Тлимфоцитов используется тест спонтанного розеткообразования, заключающийся в присоединении эритроцитов барана к лимфоцитам и периферической крови человека.

Для постановки данной реакции лимфоциты выделяют из цельной гепаринизированной крови в градиента плотности верографинфиколла. Смесь готовят, прибавляя 9,68 г. фиколла к 20 мл 76% верографина и 132 мл горячей дистиллированной воды. Полученную из локтевой вены кровь (2 — 3 мл) разводят двукратно раствором Рингера и . наслаивают на 2 мл приготовленного фиколла. Уравновешенные для фракционирования крови центрифугируют 20 мин при

1500об/мин, В результате центрифугирования эритроциты с гранулоцитами оседают на дно, сверху остается лимфоцитарное кольцо и надосадочная жидкость. Надоса5 дочную жидкость сливают, лейкоцитарное кольцо отсасывают шприцем и переносят в другую пробирку. Л.имфоциты отмывают дважды питательной средой и подсчитывают количество клеток Горяева. Для непос10,редственной постановки реакции к 1 мл лимфоцитарной вэвези добавляют 0,1 мл эритроцитов барана, приготовленных следующим образом: к 5 мл питательной среды

199 прибавляют 0,025 мл (1 капля) отмытых

15 эритроцитов барана, инкубируют в термостате при 37 С в течение 5 мин. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин. Готовят нативный препарат под покровным стеклом и подсчитывают Т-РОК активные клетки под

0,01 х 688 х 35

1,86х 16

55

30 световым микроскопом. Инкубируют в холодильнике при температуре 4 С 6 мин. Подсчитывают Т-РОК активные клетки.

Путем вычисления диагностического коэффициента определяют наличие или отсутствие у больного миастении, Диагностика миастении считается достоверной при К 2.4, коэффициент является специфичным для данной патологии.

П ри м е р. Больной M.,28 лет, поступил с жалобами на мышечную слабость, периодически возникающие приступы удушья, Больной анастезирован. Неоднократно обследовался ранее, диагноз установлен не был. Осмотрен невропатологом — заподозрено наличие у больного миастении, рекомендовано дифференцировать с миастеническими синдромами миастению.

При диагностике миастении по содержанию цинка в моче больного диагноз подтвержден не был. Проведено комплексное обследование больного, включающее определение уровия П, СТГ, Т-Л, aT-Л крови, Выявлено, что уровни этих показателей составили, соответственно, 688 мМ Е/л;

1,86 мМЕ/л, 35% 16%.

Согласно формуле изобретения произведен расчет диагностического коэффициента:

Учитывая, что диагностический коэффициент представлял собой величину, превышающую значений 2,4 достоверно диагностирована миастения. В последующем при пневмомедиастинографии и интраоперационно диагноз был подтвержден, Реализация способа позволяет повысить точность диагностики миастении эа

1778704

Составитель В, Зайцев

Техред М.Моргентал Корректор Е. Папп

Редактор

Заказ 4191 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 счет повышения частоты правильно установленных диагнозов на 22,63%, снижения частоты ошибочных диагнозов на 15,12,, снижения частоты неустановленных диагнозов на 7,51;ь. а также проводить дифференциальную диагностику с миастеническими синдромами (например, амиотрофический склероз. рассеянный склероз и др.), Способ рекомендован для широкого клинического внедрения.

Формула изобретения

Способ диагностики миастении, включающий биохимическое исследование биологической жидкости, отличающийся

5 тем, что, с целью повышения точности спо.соба, у больного берут кровь, определяют в ней количество пролактина, соматотропного гормона, содержание Т-лимфоцитов и активных Т-лимфоцитов, вычисляют

10 диагностический коэффициент, и при его величине выше 2,4 диагностируют миастению.