Способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов
Использование медицина, иммунология , диагностика различных заболеваний и вакцинального процесса. Цель: повышение точности определения антигенсвязывающих лимфоцитов. Сущность изобретения определение антигенсвязывающих лимфоцитов Т, В, Д и О субпопуляций достигается проведением смешанного розеткообразования с реагентами - эритроцитами кур, нагруженными соответствующим антигеном, частицами зимозана, нагруженными комплементом , и эритроцитами барана Лимфоциты , связавшие только эритроциты кур, являются О антигенсвязывающими, связавшие эритроциты кур и барана - Т антигенсвязывающими; связавшие эритроциты кур и частицы зимозана - В антигенсвязывающими , связавшие все три реагента - Д антигенсвязывающими . Ё
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4874655/14 (22) 16.10.90 (46) 30,11.92. Бюл, N. 44 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней и Научно-исследовательский институт глазных болезней (72) Б.В.Каральник, П.Н.Дерябин, Л.А.Прасолова, Ж.Т.Айтбаева, Т.А.Добрица и. Ю.С. Кра морен ко (56) Уоуфсури М.Ю. Антигенсвязывающие лимфоциты, их взаимосвязь с субпопуляциями Т-клеток и значение для иммунодиагностики ревматизма. Дисс. канд. Ташкент, 1986. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИХ ЛИМФОЦИТОВ Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики различных заболеваний и оценки вакцинального процесса. Появление антигенсвязывающих лимфоцитов является одним из признаков иммунного ответа, Известен способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов путем розеткообразования с эритроцитами (обычно бычьими), нагруженными соответствующим антигеном, Способ сопровождается контролем, при котором реакцию проводят с ненагруженными эритроцитами. Способ позволяет определять содержание антигенсвяэывающих лимфоцитов. Недостатк м способа является его неточность, обусловленная невозможностью определения антигенсвязывающих лимфо. цитов отдельнь х субпопуляций и удельного „„Я „„1778705 А1 (57) Использование: медицина, иммунология, диагностика различных заболеваний и вакцинального процесса. Цель: повышение точности определения антигенсвязывающих лимфоцитов. Сущность изобретения; определение антигенсвязывающих лимфоцитов Т, В, Д и О субпопуляций достигается проведением смешанного розеткообразования с реагентами — эритроцитами кур, нагруженными соответствующим антигеном, частицами зимозана, нагруженными комплементом; и эритроцитами барана, Лимфоциты, связавшие только эритроциты кур, являются О антигенсвязывающими; связавшие эритроциты кур и барана — Т антигенсвязывающими; связавшие эритроциты кур и частицы зимозана — В антигенсвязывающими; связавшие все три реагента — Д антигенсвязывающими. содержания антигенсвязывающих клеток в субпопуляциях лимфоцитов. Цель изобретения — повышение точности способа эа счет выявления антигенсвя.зывающих лимфоцитов в Т,В,Д и О субпопуляциях лимфоцитов. Способ осуществляется проведением смешанного розеткообразования, в котором участвуют одновременно эритроциты барана, частицы зимоэана, нагруженные комплементом, и нагруженные соответствующим антигеном эритроциты кур. В контрольном смешанном розеткообразовании вместо сенсибилизированных антигенов применяют несенсибилизированные куриные эритроциты. Лимфоциты, связавшие только сенсибилизированные куриные эритроциты (не менее 3), относятся к нулевым (О) антигенсвязывающим; . связавшие, кроме того, эритроциты барана (не менее 3) 1778705 Процентное содержание (средняя и ее средняя квадратическая ошибка) антигенсвяэывающих лимфоцитов каждой субпопуляции определяли подсчетом 7 сотен лимфоцитов порознь. Антигенсвязывающие лимфоциты данной популяции считали выявленными только в случае достоверного (P<0,05) превышения их содержания над содержанием лимфоцитов той же субпопуля55 — к T-антигенсаязывающим, связавшие не менее 3 сенсибилиэироаанных эритроцитов кур и не менее 3 частиц зимозана — к В-антигенсвязывающим: связавшие не менее 3 бараньих эритроцитоа, 3 частиц зимозана и 5 3 сенсибилизированных эритроцитов кур— двойным (Д) антигенсвязывающим лимфоцитам, Лимфоциты, связавшие не более двух индикаторных частиц-каждого вида (эритроциты барана, эритроциты кур, зима- 10 эан), относят к нулевым, не связывающим . антиген; связавшие только эритроциты барана (не менее 3) — к Т, антиген не связывающим; лимфоциты, связавшие только частицы зимозана (не менее 3), — к В, анти- 15 ген we; лимфоциты, связавшие не менее 3 эритроцитов барана и 3 частиц эимозана, — к Д; антиген не связывающим. Антигенсвязывающие лимфоциты определенных субпопуляций считают выяв- 20 ленными, если их содержание. достоверно превышает содержание клеток тех же субпопуляций, связавших в контрольном смешанном розеткообразовании ненагруженные куриные эритроциты. Удельное со- 25 держание антигенсвязывающих клеток в определенной субпопуляции лимфоцитов определяют по отношению антигенсвязывающих клеток и всех лимфоцитов той же субпопуляции. Распоеделение антигенсвя- 30 зывающих лимфоцитов по субпопуляциям рассчитывают, принимая общее количество антигенсвяэы вающих лимфоцитов за 100 . Пример 1. По предлагаемому способу смешали 0,1 мл взвеси в растворе Хенкса 35 лимфоцитов (2 ° 10 кл/мл) больной Г, с диагб нозом мастит, выделенных из крови во 2 и в 9 дни заболевания, и 0,3 мл смеси, содержащей 0,3 10 эритроцитов барана, 0,08% сен7 сибилизированных частиц зимоэана и 0,3х 40 х10 нагруженных тейхоеаой кислотой золотистого стафилококка (в контроле — ненагруженных) эритроцитоа кур в 1 мл. Смесь выдерживают 5 мин при 37 С, центрифугировали 5 мин при 1500 об/мин и дополни- 45 тельно s течение 1 ч выдерживали при 4 С. Клеточную суспензию наносили на обезжиренное предметное стекло. Готовили мазок. Мазок высушивали на воздухе, фиксировали метилоаым спиртом 15 мин и окрашивали 50 по Романовскому-Гимэа ции, связавших ненагруженные эритроциты кур. При обследовании больной Г. с диагнозом мастит на второй день болезни выявлено 114+014 о Т и 086+034 о 0 антитенсвязывающих лимфоцитов, В и Д антигенсвязывающие лимфоциты не определены. Удельный вес антигенсвязывающих лимфоцитов в T. В, Д и 0 субпопуляциях равен 2,8; О; 0: 2,2 соответственно, а распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по Т, В, Д и 0 субпопуляциям составило 57, О, 0 и 43 соответственно. На 9 день заболевания количество Т антигенсвязывающих лимфоцитов снизилось до 0,43+0,30%, содержание 0 антигенсвязывающих лимфоцитов практически не изменилосьь (0,43+0,20 ), н о появились В антигенсвязывающие лимфоциты (0,57+ 0,20 ), Д антигенсвязывающие лимфоциты не выявлены. Удельный вес антигенсвязывающих лимфоцитов в. Т, В, Д и 0 субпопуляциях оказался равным 8,1; 3,3; О и 2,2 соответственно, а распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по Т, В, Д и 0 субпопуляциям составило соответственно 30, 40, О и 30, Полученные параметры повышают точность определения антигенсвязывающих лимфоцитов и диагностическое значение результатов, По способу-прототипу общее содержание антгенсвязывающих лимфоцитов оказалось тем же, что и сумма антигенсвязывающих лимфоцитов всех субпопуляций по предлагаемому способу, но по способу-прототипу антигенсвязывающие лимфоциты различных субпопуляций, удельное содержание антигенсвяэывающих лимфоцитов в каждой субпопуляции и экстенсивное распределение антигенсвяэывающих лимфоцитов по субпопуляциям определить невозможно, Аналогичные данные получены при обследовании 10 больных маститом, Пример 2, Обследовали больную С. с диагнозом глаукомы открытоугольной 1 стадии, Эритроциты кур нагружены антигеном трабекулярной ткани, вовлекаемой в глауком ный процесс. Предлагаемый и известный способы дали одинаковые значения (17,3 ) содержания антигенсвязывающих лимфоцитов у больной. Но предлагаемый способ, а отличие от известного, позволил, кроме того, определить антигенсвязывающие лимфоциты различных субпопуляций, У обследованной больной 7,3 антигенсвязывающих лимфоцитов являлись Т. 1,0 — В, 87ь — О и 1,0 - Д клетками, Кроме того, предлагаемый способ позволил оценить удельное 1778705 Составитель B. Зайцев Техред M.Ìoðãåíòàë . Корректор С. Патрушева Редактор Заказ 4191 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и.открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 содержание антигенсвязывающих лимфоцитов в каждой субпопуляции: 28, 19, 12 и 100 в Т, В, О и Д субпопуляциях. Обеспечена также воэможность оценить распределение лимфоцитов по субпопуляциям: 42; 6; 46 и 6 антигенсвязывающих лимфоцитов относились соответственно к Т, В, О и Д субпопуляциям. Аналогичные данные получены при обследовании 39 больных первичной глаукомой. Пример 3, При обследовании 10 человек, иммунизированных протейной химической вакциной, обнаружены антигенсвязывающие (к протею) лимфоциты Т, В и О субпопуляций, причем в динамике иммунного ответа с 5 по 17 день после начала вакцинации содержание В антигенсвяэывающих лимфоцитов увеличилось больше {с 0,29 до 0,71,), чем Т антигенсвяэывающих лимфоцитов (с 0,71 до 1,00 j ). Таким образом, предложенный способ дал возможность on ределить антигенсвяэывающие лимфоциты в различных субпопуляциях лимфоцитов, удельное содержание их в каждой из таких субпопуляций и экстенсивное распределение антигенсвяэыващих лимфоцитов по определенным субпопуляциям для уточнения стадии заболевания и иммунного ответа, что существенно важно для уточнения диагноза и оценки срока заболевания, назначения лечения и оценки 5 давности вакцинации. Формула изобретения Способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов путем проведения реакции роэеткообразования лимфоцитов с эритро10 цитами, нагруженными соответствующим антигеном, с последующей регистрацией реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем выявления антигенсвязывающих лимфоци15 Тое в Т, В, Д и О субпопуляциях лимфоцитов, осуществляют смешанное розеткообразование лимфоцитов с эритроцитами барана, частицами эимозана, нагруженными комплементом, и эритроцитами кур, нагружен20 ными антигеном, и при связывании эритроцитов кур и барана определяют Т-антигенсвязывающие лимфоциты, при связывании эритроцитов кур и зимозана— И-антигенсвязывающие лимфоциты, эрит25 роцитов кур, барана и эимозана — Д-антигенсвязывающие лимфоциты, а связывание эритроцитов кур — О-антигенсвязывающие лимфоциты.
