Способ постановки реакции непрямой гемагглютинации для выявления вирусных антигенов
Использование: биотехнология, диагностика вирусных инфекций. Сущность изобретения: использование крахмала в качестве стабилизатора при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) для выявления вирусных антигенов. Исследуемый материал разводят физиологическим раствором, содержащим крахмал (концентрация раствора крахмала 0,004-0,006%), и далее осуществляют РНГА обычным способом. Применение крахмала позволяет существенно упростить и ускорить постановку РНГА без снижения эффективности выявления вирусных антигенов. 3 табл.слс
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
«4
Q0
С)
lC)
IQO гемагглютинации (РНГА).
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4881379/13 (22) 11,11,90 (46) 07.12,92. Бюл, N 45 (71) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ (72) А.А,Барямова, Т.В,Кирющенко, M,È,Ãëóхо в, С. К, Каримов и Ю.К.Третьяков (56) Саятов М.Х, и др. Эффективный стабилизатор для приготовления антительных эритроцитарных диагностикумов к вирусам гриппа А и В. — Вопросы вирусологии, 1986, N 6, с. 674-679.
Корнеева Э.П, и др. Применение реакции непрямой гемагглютинации для экспресс-диагностики вспышек гриппа.—
Вопросы вирусологии, 1977, N 5, с. 628-632.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к вирусологии, а именно к способам разработки эффективных методов, предназначенных для ускоренной диагностики вирусных инфекций.
Известен способ стабилизации эритроцитарных диагностикумов путем применения в качестве стабилизирующего раствора неионного детергента.
Недостатком известного способа является ограниченность области широкого ее применения в практических лабораториях, а также в полевых условиях, Известен также способ стабилизации эритроцитарных диагностикумов путем использования в РНГА бычьего сывороточного альбумина.
Однако известный способ требует дополнительных рабо по подведению рН ста!
Ж „„1780008 А1 (54) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ (57) Использование; биотехнология, диагностика вирусных инфекций, Сущность изобретения: использование крахмала в качестве стабилизатора при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) для выявления вирусных антигенов. Исследуемый материал разводят физиологическим раствором, содержащим крахмал (концентрация раствора крахмала 0,004-0,006%), и далее осуществляют PHГА обычным способом, Применение крахмала позволяет существенно упростить и ускорить постановку РНГА без снижения эффективности выявления вирусных антигенов, 3 табл. билизирующего раствора, кроме того, применяемый в качестве стабилизатора альбумин является дорогостоящим и остродефицитным.
Целью изобретения является упрощение способа постановки реакции непрямой
Указанная цель достигается тем, что согласно способу постановки РНГА, включающему разведение исследуемых антигенов физиологическим раствором со стабилизатором, внесение сенсибилизированных антителами эритроцитов, используют в качестве стабилизатора 0,004 — 0.005—
0,006%-ный крахмал на физиологическом растворе, с последующей инкубацией панелей при 18-22 С.
Пример 1. К 9 порциям по 100 мл физиологического раствора (доведенного
",780008,no:<ипения) добавляют 1.5;?,5; 3: 4; 5; :;; 8:
10: 20 мг крахмала. После того, как раствор осгынет до Г1ределов комнатной температуры, ставя i РНГА по общепринятой методике,; to t, o ë ü ç ó )I <) - образные панели микротитратора Такачи". Панели оставляtoT ipIrI ко:.1натной температуре (18-22 С) до оседания эоитроцитов в контролях. Показ;"i;o.. то .аксимальное количество выявляемого антигена вирусов парагриппа-3 овец::. арбовирусов в исследуе )Oм материале достигается при 0,004-0,005-0,006,— ны . ко,iöBÿòpBöè«х i<рахмала. Г1ри 0.0015;
0,0025; 0.003% ных концентрациях крахмала наб)нодЯет1 я сг1онтаннЯя аггл)отинс)ция
B!)I jTP)i?iIIIiЯР1, ЫХ ДИЯГНОС ГИ КУМОВ, = ИСпо I,зor!BI-I!;е 0,0!: 0,02 и 0,008%-ных конI:,Bíòð;.lIt,;Iè приводило к снижению титра вь1яв )яемого янтигена (табл.1).
1:1:-" тэ, л. 1 B-ltäío, что наиболее высокие
ИТРЫ антИГЕ1 ОВ ПОЛУЧЕНЫ ПРИ МИНИМаЛЬ: сч . «Онцен Грации кояхмала 0,004% и макси::::.я)-ьной концентрации 0,006%
П t) )):": е р 2. Как и в первом примере, к Д0 ",и, физ tî,oi tt:IBñêoão раствора добавля:::-1 по —, мг к, ахмаля. По общепринятой мето„,икг-. с-.явя; РН ГА. Используя <)-образные
:;--i :, .Bi", микротитряторя "Такачи". Результа) )итыва,от oocflt. . инкубации панелей в условиях разных температур. 18-22ОС: 35" С; 36-37" С.
: озуль;яты, представленные в табл. 2, покBçываю)т, lio наибольшая чувствительность Р -ll д пГ)оявляется при инкубации па 1елай Ои ко I! IBTI!011 )емпературе (18-22 С) и —.o: l )ер-.туре,5-6"С). Однако при 3-5 С
:зроv;- е1 реBI<:.IIII) удлиняется по сравне: 1 и,., .", I i H )r! o B U t. i t= Й Il p lri 1 8-2 2 С и а 3 0-4 0 M vi H .
::,с .-Гуществе IHo важно в г)лане грах<данСКОЙ ОборОНЫ I;l)tt Вь.г)ОЛНЕНИИ ЗадаЧ "IO ИН.,l ;êB;t;t внг)усного антигена. При 35-37 С оть1е 1я))to<.i они)кение чувс t вительности ю :1, ) -IЯ =. -4 !1О Г)яде<Я, 11 о и м:=. р 2. Проверка сг)ециф1ичности индикации вирусов 10 предг)агаемому способу. РНГА ставили, Iëñïoëüçóÿ в качестве с ГЯЬ lftelь)Я Гора 0.005%-ный I Овец, арбовирусов в инфицированном материале (кул ьтуряльняя жидкое l ь, мозГОВяя суспензия). АrtTè i ельнь)е зри Гроцитарные диагностикумь1 взаимодейсTRQBBIIM только с гомологи-lIIbIMI) вирусными антигенами и co)n;:.l).11е1„ io но рея)и ;)onBf;Ii!; гетеролсгичными. Пример 4. Проверка специфичности и ill)el му)цесTBB пр«длягяемого способа мо5 55 дификации РНГА. Стабилизирующие растворы готовили обычным и предложенными методами. Приготовление стабилизирующего раствора по обычному методу. Готовят 0,15 Vi одно-и двухзамещенные фосфатные буферные растворы. Затем готовят на них фосфатный раствор рН 7,2 под контролем рН-метра, после чего к 90 мл физиологического раствора добавляют 10 мл фосфатного буферного раствора (рН 7,2) и 10 мг сухого бычьего сывороточного альбумина. Приготовление стабилизирующего раствора по предлагаемому способу. К 100 мл физиологического раствора (доведенного ,Во кипения) добавляют 5 мг крахмала и дают остыть до комнатной температуры. Результаты подготовки ингредиентов реакции показали значительные преимущества во времени, используемых средствах и простоту подготовки ингредиентов реакции по предлагаемому способу. Эффективность выявления вирусного антигена предлагаемым способом не уступала обычному, Г1 р и м е р 5, Предлагаемый способ был использован практическими лабораториями ветеринарной службы в хозяйствах по содержанию мелкого рогатого скота в Талды-Курганской области Казахской ССР. По мнению специалистов предлагаемый способ удобен в применении, экономичен и не требует дефицитных и дорогостоящих препаратов, дополнительного оборудования (рН-метра). а также проведения дополнительных работ по приготовлению забуференного раствора и его подтитровки рН 7,2. Предлагаемый способ легко воспроизводим, эффективен и рентабелен. 1аким образом, преимущество предлагаемого способа постановки РНГА с использованием в качестве стабилизатор", 0,005%-ной концентрации крахмала на физиологическом растворе по сравнению с обычным методом включается в BI Заявляемый способ является техчичеoêèì решением способа постановки реакции непрямой гемагглютинации. поскольку упрощает и повышает результативность и эффективность способа выявления вирусного антигена в инфицированном материале, отвечающих современным требованиям службы гражданской обороны в области индикации вирусов. ®ормула изобретения Способ постановки реакции непрямой гемагглютинации для вь)явления вирусных 1780008 Таблица 1 Продолжение табл.1 П р и м е ч а н и е . Здесь и в последующих таблицах титры даны в обратных величинах. СА — спонтанная агглютинация Таблица 2 00 20 антигенов, предусматривающий разведение исследуемого материала стабилизирующим раствором. добавление сенсибилизированных антителами. эритроцитов, последующую инкубацию и учет результатов, отличающийся тем, что. с целью упрощения способа, в качестве сталибизирующего раствора используют раствор крахмала в концентрации 5 О. 004-0. 006 . 1780008 Таблица 3 Составител ь А. Баря мова Техред М,Моргентал Корректор T.Ïàëèé Редактор Л.Волкова Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 4473 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
