Способ определения состояния макроорганизма

 

Использование: медицина. Сущность изобретения: проводят иммунологическое исследование периферической крови - изолированных лимфоцитов и клеток лейкоконцентрата на модели Е- и ЁАС-розёт ,2 кообразрвания, Н СТ-тёста, микрометода определения ЕК-активности лимфоцитов и их спрсрбнрсти трансформироваться в бластй; при этим ё Yест-с й стемы ftoWonййтельи преледо ваУе Й нЬ аводят белркассоцийрбв а4н;№уй И безбёлковую фракции аутологйчйрй HatWWHoS плазмы и аутойогйчныё эрит рЩй тыГ Дли уточнения клиническргр диагноза (природы воспалительных реакций) и формулирования индивид аль нйгб WpSyHbsia эф фёктйвносУи предполагаемого лечения(определения, какие лекарственные средства ги дозировке способны нЪрмализова ть исходно патологические состояния лимфоцитов) в тест-системы ввбдят пЭЬтйвЬвоспалительные, гормЬйальныё И иУлМунбмбдулирукэщие (медиаторы различных звеньев иммунного ответа) средства. Этот способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследования в автоматическом режиме. Снабжен программой для формулирования текстового и графическо го варианта заключения. 1 з.п. ф-лы. СО С

т.Я2 1782321 АЗ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (яцек G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (госпатснт ссс }, ", " "- "" ", f) 9 (j g g

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Йзобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для изучения различных состояний сложной биологической системы при моделировании широкого спектра патологических процессов аутоиммунных, ойухолевых, инфекционных и т.п-.; а также для диагностических исследований и индивидуального, подбора лекарственных средств путем иммунологического тестирования периферической крови при лечении аутоиммуннь,х, anyxoлевых инфекционных заболеваний. бесплодия или

1 (21) 4907011/14 (22) 16;11.90 (46) 15.12.92. Бюл; ¹ 46 (71) Институт молекулярной биологии и ге- нетики АН УССР и Научно-исследователь - ская лаборатория прикладной логики (72) О.Ф.Сенюк (SU) и.Гергей Томаш (HU) (73) О,Ф.Сенюк (56) Оценка иммунного статуса человека, Ме- тодические рекомендации. Минздрав. M . 1984, Заявка Япойий N 59-25184. кл. 6 01 N

33/54, 15.06.84.

Авторское свидетельство СССР № 1123703, кл, А 61 К 39/00, 15.02.84.

Авторское свидетельство СССР

N 1121004, кл. А 61 К 10/00, 30.10.84. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ

МАКРООРГАНИЗМА (57) Использование: медицина, Сущность. изобретения: проводят иммунологическое исследование периферической крови — изолиро ванных, лимфоцитов и клеток лейкоконцентрата на модели Е- и EA(.-розетст кообразовай ия," Н СТ-теста, микрометода определенися ЕК-активности лимфоцитов и их Способности трансформироваться в бла-Стты; при этотм в тест-ссйсстемы дополнитель- но"" и поСл едовател ьнос вводят белокассоциирбван io и безбелковую фракции аутологичйой наивной"плазмы и аутологйчны)ес эрйтсросцитттыт. Для уточнения: клинического диагноза (природы воспалительных реакций) и формулирования индивидуального "тгрогйоза зффектйвности предполагаемого леченйя (определения, какие лекарственные средства и в какой дозировке способйы нормализовать йсходно . патологические состояния лймфоцитов) в тест -системы вводят йрЬтисвовсоспалительные, гормональные "И" иммуномодулирую- щие (медиаторы различных звеньев иммунного ответа) средства. Этот способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследованйя в автоматическом режиме, снабжен программой для формулирования текстового и графическбго варианта заключения. 1 з,п; ф-лы, с, в процессе йре- и посттрансплантационного мониторинга.

Известны способы тестирования периферической крови для определения иммунного состояния организма. например путем определения содтержания инсулина и исследования динамики его изменения; определения резистентности организма- при инкубировании лейкоцитов с тест-микробной вэвесью в присутствии аутологичной сыворотки; определения иммунореактивности при одновременном проведении двух

1782321 реакций розеткообразования: лимфоцитов с эритроцитами барана в присутствии иммуностимулирующего препарата (левамизола,, спленина и т.д.) и лимфоцитов в присутствии аутоплазмы. 5

Общим недостатком известных способов является проведение одного-двух имму, 4 ологическйх тестов, по которым нельзя объективно оценить сложную иммунную си. стему организма. 10 более информативно исследование проводят при осуществлении двухэтайного способа диагностического определения им. мунного" состояния человека, являющийся способом-прототипом. Первый этап, назы- 15 ваемый.ориентирующим, включает следующие операции: -:: определение относительного и абсолютного количества" .лимфоцйтов; тесты Е- и ЕАС-розеткообразования для определения относительного и 20 абсолютного количества Т- и В-лимфоцйтов" кровй,"определение концентрации сь вороточных иммуноглобулинов основных классов(М, 6, А), определение фагоцитарной " активности лейкоцитов.. 25 . Этот этап может быть осуЩествлей в "" условиях клинической лабораторйй в течение суток.—

Второй этап, называемый аналйтиче-" ским, включает следующие операции . апре- 30 деление субпопуляций регуляторных

Т-лимфоцитов (Т-хелперов, Т-супрессоров); прямой тест определения спонтанйой миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов с использованием в 35

; качестве стимулятора фитогемагглютинина (FGA); оценка функциональных свойств иммунорегуляторных клеток в тестах конканавалин-А-индуцированной супреСсорной актйвности; постановка важных тестов ги- 40 перчувствительности замедленного и немедленного типа на туберкулин, грибковые антигены, DNHB, искомые аллергены; оцен- ка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов в реакции бласттрансформации на 45 "" митогены, антигены, аллогенные клетки; определение В-лимфоцитов, несущих поверх ностные иммуноглобулины разных классов; оценка синтеза йммуноглобулийов в культуре В.-лимфоцитов; йепрямой тест торможе- ния миграции лейкоцитов; оценка активности киллерных клеток (К- и ЕК-лимфоцитов); тесты на оценку наиболее значимых медиаторов иммунной системы, в том числе интерлейкин — продуцирующей активности клеток; определение различных ком- 10 понентов комплемента; оценка различных компонентов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов.

Если первый этап обязательный, то второй этап является рекомендательным, так как отличается значительной трудоемкостью (необходимо специальное оборудование, дефицитные реактивы. большой опыт и высокая квалификация исполнителя) и продолжительностью (общее время 5-7 сут).

Однако несмотря на определение широкого диапазона иммунологических параметров, " - способ-прототип является недостаточно точным. Он объективен исключительно в отношении системы in vitro, так как не учитывает участия гуморальных иклеточных факторов микроокружения в иммунном ответе,. не исследует индивидуального действия иммуннотропных препаратов, применяемых при терапии конкретного патологического процесса. Кроме того, из-за значительной продолжительности процесса — 7 сут, этот способ не обеспечив ает оп ера т ивной диагйостической информ аци й.

Целью изобретения является повышение точности диагностики и эффективности коррекции состояния макроорганизма при одйовремейном ускорении способа.

Для достижения цели в способе опреде-, ления состояния макроорганизма путем иммунологического . v! следования периферической крови, проводят НСТспонтанный и индуцированный тест сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в лейкоконцентрате, определение Е-розеткообразования изолированных лимфоцитов, прединкубированных с теофиллином, опре-. деление естественной клеточной киллерной, активностй изолированных лимфоцитов, реакцию бласттрансформации изолированных лимфоцитов на Т- и В-клеточные митогены, дополнительно йз периферической крови выделяют вугологичные эритроциты и плазму; которую разделяют на белокассоциированную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения HCT-теста и определения

E-розеткообразования йзолированных лимфоцитов, прединкубированных с теофиллином и " " ЕАС-розеткообразования изолирован н ых лимфо цито в последовательно в присутСтвии лейкоконцентрата, белоКассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и в йрисутствии лейко-: концентрата совместно с каждым из иммунотропных препаратов гopMOHG/lbHoro, противовоспалительного и иммуномодулирую щего действия on редел я ют розеткообразованйе изолированных лимфоцитов с аутоэритроцитами и последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоции1782321 рованной и безбелковой фракции аутоплазмы и совместно с каждым из указанных иммунотропных препаратов; определяют естественную клеточную киллерную активность после изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата и белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы проводят реакцию бласттрансформации на Т- и В-клеточные митогены после изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракций аутоплазмы и совместно с каждым из указанных иммунотропных препаратов.

Существенные отличия нового способа в сравнении с известными аналогами заключаются в многоплановом исследовании периферической крови, что обеспечивается изучением поведения в комплексе всех компонентов крови: изолировэHHые лимфоциты, лейкоконцентрат, аутоэритроциты и эутоплазма, дополнительно разделенная на белокассоциированную и безбелковую фракции, а также их различных сочетаний в присутствии лекарственных препаратов.

Благодаря такому разностороннему имму- нологическому исследованию определяют состояние всего макроорганизма, Так, например, предложенная схема позволяет изучить параметры изолированных лимфоцитов с учетом клеточных факторов микроокружения (в лейкоконцентрате), а также с учетом влияния естественных пространственных связей между лимфоцитами, которые могут резко изменять показатели поведения изолированных лимфоцитов, исследуемых в способе-прототипе, Включе- ние в объект исследований безбелковой и белокассоциированной фракции аутоплазмы позволяет определить не только суммарное воздействие гуморальных факторов, как в известных способах, но и разграничить, в какой фракции плазмы находятся агрессивные(патологические) и компейсаторные (защитные) субстанции. Такое вычленение является принципиально важным. так как позволяет, используя современные инструментальные методики экстракорпоральной детоксикации (плазмафарез, гемодиализ, гемосорбция и их сочетания). удалять из макроорганизма вещества, поддерживающие патологический процесс, не ослаблять макросистему одновременным удалением субстанций, нарабатываемых ею для инактивации чужеродной информации, Кроме того, предложенный способ позволяет выявить способности лимфоцитов распознавать аутологичные тканевые антигены, например, экспрессируемые на мембранах собственных эритроцитов. Этот феномен отражает выраженность реакций против перекрестно реагирующих антигенов (например, антигенов андо- и экзогенной микрофлоры и антигенов собственных тканей, и редставлен ных на эритроцитах, на которых в разной степени присутствуют мембраноассоциированные структуры, характерные и для других органов: почек, миокарда, печени, поджелудочной железы, соединительной, нервной ткани и т.д.). Он, как эпизодический, сопровождает большинство инфекционных заболеваний, а в опре5

10 деленном количестве случаев превращается в основное пэтогенетическое звено болезни, что имеет место при аутоиммунных поражениях соединительной и нервной ткани, почек, сердца, суставов и т.д. как следствие

15 стрептококковой инфекции тестов никогда ранее не проводилось, Оно способствует уточнению клинического диагноза, так как демонстрирует поведение лимфоцитов в присутствии различных факторов: — противовоспалительных — блокирующих синтез продуктов арахидоновой кисло25 ты: простагландинов, лейкотрйейов простациклинов, эйкозаноидов и т.д.;

30 — гормональных — аналогов преднизолона, кортизона и т.д,; — иммуномодулирующих — медиаторов различных звеньев иммуннотб ответа: ийтерферонов, интерлейкинов, тимопоэтинов миелопептидов и др

По результатам исследования конкретизируют природу воспалительных реакций или признаки наличия воспалительных медиаторов, формулируют индивидуальные

40 прогнозы эффективности предлагаемого лечения, т.е. уточняют, какйе лекарственные средства и в какой дозировке способны нормализовать исходно патологические состояния лимфоцитов, 45 Предложеннйй способ позволяет про" вести иммунологические исследования периферической крови всего за 4 — 6 ч (по короткой) и за 3 сут (по полной схеме) в отличие от известного способа. где анализы

50 проводят в течение 7 сут. Новый способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследования в автоматическом режиме

Способ иллюстрируется описанием общей схемы и примерами выполнения, представленными в форме карты иммунологических исследований периферической крови с рекомендациями клиницисту специально для конкретного больного.

Изучение действия иммунотропных

20 препаратов в совокупности предложенных

1782321. Способ осуществляется по следующей схеме.

У пациента забирают 15 мл венозной периферической крови, которую стабилизируют 2,7%-ным раствором ЭДТА (трилон В) 5 в соотношении 1:10, Из 10 мл крови в стандартном градиенте плотности фиколл - ветивных клеток используют изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат, определяют отклонение от а в; ! ! — ЕАС-розеткообра зова ние (зксп рессия характерных В-клеточных маркеров); а) изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное содержание рографина (1.076 — 1.078) выделяют пул ЕАС-розеткообразующих клеток): мононуклеарных клеток, из которых инкуба- .. б) в присутствии лейкоконцентрата (опцией на пластиковых поверхностях удаляют 10 ределяют отклонение от а); прилипающие (моноциты, макрофаги) клет- в) в прйсутствии безбелковой фракции ки. Из оставшейся крови (5 мл) отбирают аутоплазмы (определяют отклонение от а и лейкоконцентрат, максимально освобож- б, в качестве эффекторных клеток используденный OT эритроцитов и плазмы (около 2 ют изолированйые лимфоциты и лейкоконмл). Клетки лейкоконцентрата освобождают 15 центрат); от плазмы трехкратным центрифугировани- г) в присутствии белокассоциированной ем и отмыванием физйологическим раствбфракции аутоплазмы (определяют отклонером. Половину обьема полученйой плазмы " ние от а и б, эффекторные клетки — изолиропропускают через фильтры с диаметром йор -. ванные лимфоциты и лейкоконцентрат).

Q,17ммк и, такйм образом, отделяют без- 20 IV — Розеткообразованиесаутологичныбелковую фракцию от белокассоциировай-: ми эритроцитами: ной. --::."::, -::, - .....: :.:; .. а) изолированных лимфоцитов (опредеВ условиях ln vitro традиционными ме- ляют процентное и абсолютное количество); тодами определяют Е- и ЕАС-розеткообра- .. 6) в присутствии безбелковой фракции зование, роэеткообразование с 25 аутоплазмы (эффекторные клетки — изолиаутологичными эритроцитами, Е-розеткооб-: рованные лимфоциты определяют отклонеразование лимфоцитов, после прединкуба-, ние от а);ции с теофиллином: показатели в) в йрисутствии белокассоциированной

HCT-спонтанного и индуцированного теста... фракции аутоплазмы (эффекторнйе клетки— сегментоядерных нейтрофилов и моноци- 30 изолирбванныелимфоциты, определяютоттов; активность естествеййых кйллерных клонениеота). клеток; способноСть лимфоцитов трансфор-:. V — Определение Ё-розеткообразованйя мироватьСя в бЛасты при внеСенйи различ- лимфоцитов лейкоконцейтрата в присутстных митогенов. Все указанные реакции: вии иммунотропных препаратов* (прединпроводят в соответствии с Методйками со- 35 кубация с йрепаратом длится в течение 30 гласно рекомендациям, описанным в сйосо-: мин) при 36,7 С);" бе-прототийе (1). :-:,,: : :: .,:- : — субтерапевтическая (0,1 терапевтйче-! — HCT-спонтанный и индуцированный ской дозы) и терапевтическая доза индоме тест сегментоядерных нейтрофилов и моно- тацина;,,;„„ цитов, учитываемый в лейкоконцентрате 40 — субтерапевтическая (0.1 терапевтиче- . (естественном клеточном, гуморальном и, скойдозы)итерапевтическаядозадексазойрОстранственном микроокружениях). ;: на; !! — E-розеткообразование (экспрессия -" - — субтерапевтическая и терапевтиче характерных Т-клеточных рецепторов): : — ская доза альфа-2-рекомбинайтного интера) изолированных лимфоцитов (опреде- 45 ферона. : ляют процентное и абсолютное содержание,::  — Определение розеткообразования

Е-розеткообразующих клеток);:,;:... лймфоцитов, прединкубированных соглас6) прединкубировайных с теофиллийом но условий этапа V, с аутологйчными эритизолированных лимфоцитов (Т-хелперные и " роцитами.

Т-супрессорйые клетки, определяют их аб- 50 Vll - Определение естественной килсолютные количества и соотношение); .. лерной активности (против аутологичных в) в присутствии лейкоконцентрата (on- опухолевых клеток, при-отсутствйи последределяют отклонение от а); .: -, ... ййх в качестве мишеневых используют клетг) в присутствий безбелковой фракцйи ки перевиваемой линии человеческого аутоплазмы(вкачествеэффекторных клеток 55 миелолейкоза — К-562); используют иэолйрованные лимфоциты и . а) изолированных лимфоцитов; лейкоконцентрат) определяют отклонение. - 6) в присутствии белокассоциированот а и в;.... ... ной фракции аутоплазмы (эффекторные д) в присутствии белокассоцйирован-" клетки — изолированные лимфоциты), опреной фракции аутоплазмы в качестве эффек- деляют отклонение от а);

1782321 модуляции нет модуляции нет.

Т-лимфоциты (E-POi() в лейкоконцентрате: процентное содержание " " -: 15 модуляция аутоплазмой: цельной - 10 модуляции .нет беэ белка 3 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 27 23 дексазоном 20 20 .

А-2-рекомбинантным интерфероном 17 20

При необходимости в схему тестирования могут быть внесены и другйе препараты — субтерапевтических и терапевтиче(различные гормоны: инсулин, глюкагон, " Ских доз индометацина; кортизол; иммуномодуляторй лимфо- и мо- — субтерапевтических и терапевтиченокины; антибиотики, цитостатики; нарко- 5 ских доз дексазона; тические вещества и т.д.) в зависимости от — 1 -2-рекомбинайтного интерферона конкретных задач; .. ; :::: .. s диайазбйе клййически используемых доэ, в) в присутствии безбелковой фракции пересчитанных йа in vitro культивирование:" аутоплазмы (эффекторные клетки — изоли- " 12, 60, 300, 1500, 3000, 7500. 15000 МЕ!мл. рованные лимфоциты), определяют откло- 10 Короткая схема исследования"требует нение от а. . - . .:. минимального времени для воспроизведеVill — Реакция блаСттрансформации ния. В йей отсутствуют методы, требующие лимфоцитов йа Г-клеточный митоген, на- . стерильностииусловийдляработысрадиопример, фитогемагглютинин (FGA, $егча,30 активными метками. Она включает l-VI этамкг/мл) и преимущественно В-клеточный 15 пы. Но ее информативность явно митоген, например, липополиса - харид - недостаточнадляйсследованияопухолевой (1 РЯ, Serva, 100 мкг/мл): ..:;: . болезни, при которой необходимо получеа) изолированных лимфоцитов (учет ин-": нйе объективных данных и"о"характере взадекса стимуляции); ., .,;.;. ::: умных влияний бластомы и б) в присутствии безбелковой фракции 20 макроорганиэма." аутоплазмы (эффекторные клетки — Йэоли- .:: Полная схема более трудоемка и вклюрованные лимфоциты, определяют отклоне- чает все ойисанные этапы. Она позволяет ние от а);: - ..: .. ".:. ::.: .. "., более детально исследовать состояние мак* ...., роорганизма, в том числе опухолевую бов)вприсутствиибелокассоциированйой 25 лезнь. и более йзбирательно подойти к фракции аутоплазмы (эффекторные клетки - - выбору вида и дозй коррегирующих препаизолированнЫелимфоциты, определяют от- " ратов. клоненйе от а): . :. "::: " "- - --.:,"-....:.,: ...:: .."; Короткая схема

r) внесение в тест-системы, кроме"фито- " П р и"м е р 1; 1;1 Результаты иммунологемагглютинина различных иммунотропнйх 30 гического исследовайЙя периферической препаратов: : - ..::.:-;:.: . крови:

ФИО А,: ..: . .: .возраст 60, Ф-ла венозной крови: мон. 7 и .0 с.61 э 4 лф 24 Д. 24,01.90

Общее количество лейкоцитов -7,8 : нор а 4,0-9,0 10-" /л ,Процентное содержание лимфоцитов 24 . 18 381Абсолютное количество лимфоцитов 1.87 " . 0 8-36х10 /л

НСТ-тест: нейтрофилов спонт. 5 индуц„ 9 спонт. < иод„ ц.

° „v моноцитов спонт. 3 индуц. 5 спонт.," (индуц., -"- " . - . ""

Т-лимфоциты (Е-P0K) иэолировайййе на фиколле . с 0 / процентное содержание .- -.:., 21 - - . 40-60 абсолютное количество -::. .:- : 0,39 . : 0,6-2 1х10 /л модуляция аутоплазмой: цельной " 12 беэ белка 6

1782321

8-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолировайные на фиколле: йроцентное содержайие 6 . 20-26% абсолютное количество . 0 11 0,3-0,5х10 /л мбдуляция аутоплазмой:,,:; цельной . 1 - " модуляции йет ,без белка 4 модуляции нет

В-лимфоциты (ЕАС-POl() в лейкоконцентрате: процентное содержание -- 4 модуляция аутоплазмой." .

\ цел ьйой 1: модуляции нет без белка 0 . " модуляции нет

Роэеткообразование лймфоцитов c"àóòîëîãè÷íûéè зритроцитами: процентное содержание,., : . " 0 " . -: . " нет абсолютное количество -"-;. "" . """ 0 " ", . нет модуля ция аутоплазмой:;,;:,.„..--,цельйой - Q " модуляции нет без белка " "" 0 . .: : " модуляции йет модуляция:препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 0 0 дексазоном 0 0

А-2-рекомбинантйым интерфероном ... 0 0

Т" хелперы: Т"супрессоры .: . :.. . 2, 0 2,2:3,3 (теофиллиновый тест)

Э

1.2.Заключение" .. - .-. - ""-- " ::-:- . Безбелковая фракция нативной аутолоПацйентА.Датаисследования24;01.90. "гичной плазмй в присутствии клеточного

У пациента, обслуживаемого системой,: микроокружения усугубляет ситуацию— вторичный иммунодефицит, описываемый уменьшает сниженную способность Т-лимследующими показателями: ... 5 фоцитов лейкоконцентрата учаСтвовать в ЕСпособность изолированййх Т-лимфа- .:, розеткообразовании. цитов образовывать Е-розетки @снижена. Способность йзолированных В-лимфоФакторы клеточного микроокружения :::: цитов образовывать ЕАС-розетки понижеусугубляют сйтуацию — уменьшают снижен- : на. йую активность изолированных Т-лимфоци- 10 - . Факторы клеточного микроокружения тов.:: —. : ;" : . практически не изменяют пойижвнную ак- - .

Белокассоциированйая фракция натйв- тивность изолированных В-лимфоцитов. . ной аутологичной плазмы усугубляет ситуа- .: . Белокассоцийрованная фракция нативцию — уйейьшает пониженную активность : ной аутологичной плазмы усугубляет ситуа- изолйрованных Т-лимфоцитов, 15 цию — уменьшает"поййженную актйвность

Безбелковая фракция аутологичной изолированных В-лимфоцитов. плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает ." Безбелковая фракция натйвной аутолосниженную активность изолировайных Т-:, гйчной плазмьгпрактическй неизменяетполимфоцитов. :: ниженную активность йзолированных

Белокассоциированная фракция натив- 20 В-лимфоцитов. ной аутологичной плазмы в присутствии Белокассоцийрованная фракция йативклеточного микроокружения усугубляет си- ной аутологичной плазмы практически не туацию — уменьшает сниженную способ- изменяет пониженную способйость В-лимность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата фоцитов лейкокойцвнтрата участвовать в участвовать в E-розеткообразовании. 25 ЕАС-розеткообразовании, 13. 1782321 . 14

Безбелковая фракция нативной аутоЛо- Показайо; детоксикационйое лечение, гичной плазмы усугубляет ситуацию - направленное на сйижение концентрации уменьшает сниженную способность В-лим - безбелковых и белокассоциирОванных ймфоцитов лейкоконцентрата участвовать в мунодепрессивны факторов в нативной

ЕАС-розеткообразовании. :... -.: 5 аутоплазме." параллельный курс противоТаким образом. нарушения в иммуно- воспалительной терапии субтерапевтичекомпетентной сфере обусловлейы иммуно-- - скимидозамйййдометацинаи дексазона; депрессивным воздействием на функции - Спустя две недели после окончания лелимфоцитов клеточного и гуморального чения необходимо контрольное исследовамикроокружения; :: - .::..:;:::: ::- : 10 ние. Описание " соответствует

In ltio нарушенные показатели лимфо- - исследованным йараметрам состояния ими4ной функции нофчализуются: удалением мунокомпетентной сферы. факторов белокассоциированной и безбел- ковой фракции аутологичной плазмы, декса- Пример 2; .. . Полная схема зоном, индометацином,: ., 15 2.1. Результаты иммуйологического исс1.3. Рекомендации клиницистам.: ледования периферической крови; модуляции нет модуляции нет модуляции не г модуляции нет

ФИ6 А. . . " .:.:-. .=::::.,:-:":: возраст 60,0 Ф-ла венозной крови: мон 7 и О с 61 з 4..лф 24 Д 24.01.90

Общее количество -лейкоцитов 7-8 : норма 4,6 -.Qf0x10 /л

В

Процентное содержание лнмфоцитов 24 18 " 38 а Абсолютное количество лимфоцитов 1 87 0,8 - 3,6х10 /л

- НСТ-тест нейтрофнлов спонт. 5 ..индуц. 9 . спонт. (нндуц. моноцитов спонт, " 3 - - нндуц, =.:: 5. " .- спонт. < индуц.

T-лнмфоциты (Е-POK), изолированные на фнколле: йроцентное содержание . :."-;:,, .:,:=:;::-:,:::: 21 " 40 - 60% абсолютное количество " :,,:. : :::.:, :.-.::, 0,39 : 0,6 - 2, 1 10 /л

I модуЛяция аутоплаэмой: цельнОЙ ": .;.", :. :::, "":; . 12. без белка", ".::,::. ::::..-, 6 .

- Т-лнмфоцнты (E-POK) в лейкоконцентрате! . процентное содержание ",-:-.,::. ::-,. 15 модуляция аутоплазмой: цельной: .:; .. 1 О модуляцйи нет." без белка:.;, -.: . 3 ..... модуляцйи йет модуляция прейаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах . .нндометацином - 27 : 23 дексазоном 20 : 20

А-2-рекомбинантным интерфероном 17 20

В-ллимфоциты (EAC-РОК), изолированные на Фиколле: процентное содержание " .- --,:, 6 ... 20 - 26% абсолютное количество, ;: " " ".": - 0,11 -: 0,3 .- 0,5 ° 10 /л модуляция аутоплаэмой: цельной -,, . 1 без белка, 4

В-лиифоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание" ::; .::..: . 4 модуляция аутоплазмой: цельной:.: :. 1 .:. модуляции нет без белка "" .. О; . модуляции нет

Розеткообразование лимфоцйтов с аутологйчнымн зритроцитами: процентное содержание - . -:: 0 нет абсолютное количество . О. . нег ъ"

1782321

1б модуляция аутоплазмой; цельной О модуляции нет без белка О модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином О О дексазоном О О

) -2-рекомбинантным интерфероном О О

Т-хелперы: Т-супрессоры 2,0 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) Естественная киллерная активность лимфоцитов:

19,29+0,84 модуляция аутоплазмой: цельной 29 модуляции нет без белка 42 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 10 13 дексазоном 13 16

$-2.рекомбинантным интерфероном1Ед/мл) 12 10 60 12

300 10 1 500 14 300 8 р 7500 О „15000 О)

Ф

Реакция блабттранСформации лимфоцитов:

Уровень спонтанного выше ГСА-индуцированного бластогенеза

РСА-индуц. бластогенез 0,65 3 - 8

Кон-A 1,23 3-8 ьРЯ, . -".- - О 38 3 - 6 модуляция аутоплазмой: цельной спонт, 0,69 модуляции

FGA 1,О модуляции нет

КоН-А . 0,08 модуляции нет

LPS 1,0 модуЛяции нет без белка спонт. 0,97, модуляции нет

" FGA 1,53 модуляции нет

КоН-А 0,02 мбдуляции нет

LPS " " 2,1 . модуляции нет модуляция препаратами в субтера евтйческой и терапевтической дозе : . индометацином 1,4 1,4 > дексазоном I,9 2, l°. -2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл) уровня спонтанного бластогенеза 12 0,86, 60 1,0, 300. 1,0, 1500 1, 1, 3000 1 3, 7500 1 О, 15000 1 3

УСА-ййфуфйрбвайного бластогенеза 12 0,9, 60 0,6, 300 0,6, : .

1500 0,6, 3000 О, .-, 7500 О, 7, 15000 0,5

* сниженйую "актйвность "изолированных T2.2. Заключение лимфоцитой, „" ...:,, Пациент А. Дата исследования 24.01.90. . БелокасСоциированная фракция нативУ йациента, обслуживаемого системой, ной ачтологйчйой плазмь1 в присутствии

-- вторичный иммуйадефицит, "описываемый 5 клеточного мйкроОкружвнйя усугубляет сиследующими показателями; туацию — уменьшает сййженную способСйооообность изолированных Т-лимфо- ность Т-.лимфоцитов лейкоконцентрата . цитов образовывать Е-розетКи понижена. участвовать в Е-розеткообразовании.

Факторы клеточного микроокружения Безбелковая фракция нативной аутолоусугубляют ситуацию — уменьшают снижен- 10 гйчйой плазмы в присутствий клеточного ную активность изолированных Т-лимфоци- микроокружения усугубляет" ситуацию —,, тов, уменьшает сниженную способность Г- лимБелокассоциированная фракция натив- фоцитов лейкоконцентрата участвовать в Еной аутологичной плазмы усугубляет ситуа- розеткообразовании, цию — уменьшает пониженную активность 15 Способность изолированных В-лимфоизолированных T-лимфоцитов. цйтов образовывать EAC -розетки понижеБезбелковая фракция"аутологичной на. плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает

1782321

In vitro нарушенные показатели лимфо10 идной функции нормализуются: удалением факторов белокассоциированной и безбелковой фракции аутологичной плазмы, дексаэоном,индометацином.

2.3. Рекомендации клиницистам, 15 Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных иммунодепрессивных факторов в нативной аутоплазме; параллельный курс противо20 воспалительной терапии субтерапевтическийи дозами индометацийа и дексазона.

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.

25 Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы, П.ример 3. Короткая схема

3,1, Результаты иммунологического иссле30 дования периферической крови: возраст 42

0 с 64 з 0 лф 19 Д 22.11 89 норма 4,0 - 9,0xlol /л

19 18 - 38/

0,91 0,8 " 3,6xlo /л

ФИО Б.

Ф-ла венозной крови мон 17 и общее количество лейкоцитов 4,8 процентное содержание лимфоцитов абсолютное количество лимфоцитов

НСТ-тест: нейтрофилов спонт. 12 инлуц. моноцитов спонт, 9 индуц.

T-лимфоциты (Е-РОК), изолированные процентное содержание абсолютное количество спрнт. с индуц. спонт, < индуц. на фиколле

18

0,16

40 - 6o /.

o,6 - 2,1-10 /л модуляция аутоплазмой модуляции нет модуляции нет цельной, i 0 без белка 0 .т-лимфоцитов (Е-РОl:) в лейкоконцентрате: процентное содержание 36 модуляция аутоплазмой:

0 модуляции нет модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтическои доэах: индометацином 25 23 дексазоном 22

A"-2 рекомбинантным интерфероном 19 34

В"лимфоциты (EAC-РОК), изолированные на фиколле.

28 20 - 26 /

О, 26 О, 3-0, 5 ° 1 09 /л процентное содержание абсолютное количество модуляции аутоплазмой: модуляции нет модуляции нет цельной без белка

В-лимфоциты (ЕЛС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 15

Факторы клеточного микроокружения практически не изменяют пониженную активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает пониженную активность изолированных B-лимфоцитов, Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную активность изолированных

В-лимфоцитов, Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в

ЕАС-розеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию— уменьшает сниженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в

ЕАС-розеткообразовании.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы резко угнетает

Кон-А-индуцированный бластогенез лимфоцитов, снижая его до уровня FGA- u LPS-индуцированного бластогенеза, Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень Е К-активности лимфоцитов.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы резко увеличивает уровень

E К-активности лимфоцитов.

Таким образом, нарушения в иммуно компетентной сфере обусловлены иммунодепрессивным воздействием на функции лимфоцитов факторов клеточного и гуморального микроокружения.

1782321

?0 модуляция аутоплазмой: цельнои без белка

17

25 модуляции нет модуляции нет

Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами: процентное содержание 14 нет абсолютное количество 0,13 нет модуляция а..топлазмой:

24 модуляции нет

26 модуляции нет цельной без белка модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 2 0 дексазоном 0,0 л-2-рекомбинантным интерфероном 1S 6 т-хелперы: Т-супрессоры 0,33 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) 3.2. Заключение

Пациент Б. Дата исследования 22,11,89, У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:

Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки понижена.

Факторы клеточного микроокружения частично компенсируют ситуацию — увеличивают сниженную активность изолированных Т-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов.

Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает сниженную активность изолированных Тлимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию — уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию— уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Ерозеткообразовании.

Способность изолированных В-лимфоцитов образовывать ЕАС-розетки повышена.

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Влимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов, Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в

ЕАС-розеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной.плазмы нормализует способность Влимфоцитов участвовать вЕАС-розеткообразовании.

Отсутствие повышения показателей

НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов "дыхательного взрыва" фагоцитирующих клеток.

Исходно увеличенное розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанного

НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов свидетельствуют в пользу гипотезы о.наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетентной сферы (антигены экзо- или эндогенной микрофлоры, распознавание нормальных и дифференцировочных антигенов аутологичных тканей), причем in vitro способность лимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной аутоплазмы.

Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, лейкотриенами и т.д.), так и

"воспалительными" гормонами (типа преднизолона). ! и vitro нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются: удалением аутоагрессивных и иммуноблокирующих

1782321

22 нейтрофилов спонт, 12 индуц 8 моноцитов спонт 9 индуц

Т-лимфоциты (Е-POK), изолированные на фиколле: процентное содержание 18 абсолютное количество 0,16 модуляция аутоплазмой: цельной 0 без белка 0 спонт г индуц. спонт..(индуц.

40 " 6С /

0,6 - 2,1хl С /л модуляции нет модуляции нет

Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 36 модуляция аутоплаз мой: модуляции нет модуляции нет

-- цельной 0 без белка 2 модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 25 23 дексазоном 22 18

Л-2-рекомбинантнйм интерфероном 19 34

В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле: и роц нтное содержание 28 20 - 26/, абсолютное количество . 0,26 . 0,3 " 0,5 10 /л модуляция аутоплазмой: цельной 0 без белка 2

В-лймФоциты (EAC-P01() в лейкоконцентрате: процентйое содержание 15 модуляция;аутоплазмой: цельной . 17 без белка 2. р модуляции нет модуляции нет3 модуляци и нет модуляции нет эритроцитами: нет нет

Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными йроцейтное"содержание 14 абсолютное количество 0,13 модуляцир1 аутоплазмой: модуляции нет модуляции нет

24

26 цельной без белка факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, дексазоном и интерфероном.

3.3, Рекомендации клиницистам, Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных аутоагрессивных и иммуноблокирующих факторов аутоплазмы: параллельный курс лечения субтерапевтическими дозами деФИС Б. ф-ла венозной крови: мон 17 п 0 общее количество лейкоцитов 4,8 процентное содержание лимфоцитов 13

Абсолютное количество лимфоцитов 0,91

НСТ-тест: ксазона и терапевтическими дозами интерферона.

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.

Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы.

Пример 4. Полная схема

4. 1, Резул ьтаты им мунологичес кого исследования периферической крови; возраст 42 с 64 э 0 лф 19 Л 22.11.89 норма 4,0 - 9,0хlС /л а

18 - 38", 0,8 - 3,6х1С /л

1782321

23

-0 0 ляция прейаратами в субтерапевтической и терайевтицескои дозе: индометацином 2 " 0 - дексазоном

Д-2-рекомбинантным интерфероном 18 . 6

Т-хелперы: Т-супрессоры: : 0,33 : .:.. 2, 2: 3,3 (теофиллиновый тест) - - -:.-... - @

Естественная кйллернаМ" айтивноСть лимфюцйтов: .. - : " 21 модуляция аутоплазмой . цельной, 10 :. модуляции нет без белка . 15 -,:. ...:;; .. модуляЦии нет д . " " 10 д ляция препаратами в субтерапевтической и терайевтической дозе: индометацином 21 15 " "дексазоном 19

) -2-рекомбинантным ийтерфероном (ЕД/мл): 12 20, .... 60 1, 60 21

300 17, 1500 14 ; 3000 10, 7500 18, 1500Q 24) .

1,2. 1+0,83

Реакция бласттрансформации лйм4оцитов.

У н спонтанного ниже FGA-индуцированного бластогенеза ровень с о

FGA-индуц. бластогенез . 1,73

Кон-А - - . О,8Э 3 - 8

LPS -. "- : -,-, . 0,55 3 - 6 модуляция аутоплазмой: цельной спонт. 0,38 : модуляции нет

FGA 1,0 модуляции нет

Кон-А 0,08 -:: модуляции нет

LPS: .: 1,0 " модуляции нет без белка спонт. 0,62 модуляции нет

УСА 1,53 модуляцйи нет

Кон-А 0,02 : модуляции нет

LPS 2,1 - . модуляции нет ду препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 1,4 1,4, . дексазоном 1,9 р-2- рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): уровня спонтанного бластогенеза 12 0,86, 60 10

00 1 0 1500 1 1 3000 1,3, 7500 1,0,: 15000 1,3

FGA-индуцйрованного бластогенеза 12 0,3

300 0,6, 1500 0,6, 3000 0,6, 7500 0,7, 15000 0,5

4.2. Заключение.,, . . . Безбелковая фракция аутологичной

Пациент Б. Дата исследования 22.11.89. плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает

У пациента. обслуживаемого системой, сниженйую активность изолированных Твторичный иммунодефицит, описываемый лимфоцитов; - .,-,. - ==, -.;; " ..-.* следующими показателями: :-:" - : " .Белокассоцййрованная фракция натив-

Способность изолированных Т-лимфа- " ной аутологичной плазмы "Ъ присутствйи" цитов образовывать Е-розеткй понижена, " ." клеточного микроокружения усугу

Факторы клеточного микроокружения туацию - уменьшает сниженную способчастично компенсйруют" сит)ЙТйю - увели- ность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата чивают сниженную актианость изолйрован- участвовать в Е-розеткообразовайий, ных Т-лимфоцитов,, ....... „,,: .„,, Безбелковая фракция нативной аутоло-.: .

Белокассоциировайная фракцйя натив- гичйой плазмы в присутствии клеточного ной аутологичной плазмы усугубляет ситуа- микроокружения усугубляет сйтуацию цию — уменьшает пониженйую активность уменьшает сниженную способность Т-лимизолированных Т-лимфоцитов. фоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е- розеткообразовании.: "

1782321

Способность изолированных В-лимфо- терфероном ЕК-актйвности и способности цитов образовывать ЕАС-розетки йовышЕна. лимфоцитов трансформироваться в бласты

Факторы клеточного микроокружения," под влиянием лектйна, нормализующее воз- инвертируют активность изолированных В-:-- действие на эти показатели противовоспалимфоцитов.. :::- . -Б лительных препаратов свидетельствуют в

Белокассоциированная фракция йатйв- пользу гипотезы о наличии во внутренней ной аутологичной плазмы инвертирувт ак- - среде Организма раздражителя иммунокомтивность изолированных. В-лимфоцитов. ": —. петентнбй сферы (антигены экэо- или эндоБезбелковая фракция нативной аутоло- генной микрофлоры,. распознавание гичной плазмы инвертируетактивностьизо- 1 и нормальных и дифференцир0вочных анти-. лированных В-лимфоцитов. " -" - : генов аутологичных тканей), причем In vitro

Белокассоциированная фракция натив- способность лимфоцитов образовывать роной аутологичной плазмы практически не эеткисаутологичнымиэрйтроцитамиувелиизменяет пониженную способность В-лим- чивается под воздействием обеих фракций фоцитов лейкоконцентрата участвовать в j5 нативнойаутоплазмы.

EAC-розеткообразовании . ::.: Таким образом, иммунное воспаление

Безбелковая фракция нативной аутоло- реализуется; вероятйее всего,"как продуктагичной плазмы нормализует способность В- " ми арахидоновой кислоты (простагландиналимфоцитов - участвовать в ми, лейкокотриенами- и т.д.), так и

EAC-розеткообразовании, .. о "воспалительными" гормонами (типа предБелокассоциированная фракция йатйВ-" - низолона). ной аутологичной плазмы угнетает способ- ln vitro нарушенные показатели лимфоность лимфоцитов участвовать 8 идной функции нормализуются удалением лектининдуцированной реакции бласттран- аутоагрессивных и иммуноблокирующих сформации и увеличивает способность лим- 25 факторов белокассоциированной и безбел) фоцитов отвечать на LPS....:::: ковой фракции нативной аутологичной

Безбелковая фракция нативной аутоло- плазмы, дексазоном и йнтерфероном. .гичной плазмы увеличивает способность 4.3. Рекомендации клиницистам, лимфоцйтов отвечать на митогены бластт- Показано: детоксикационное лечение, рансформацией. направленное на сйижеййб концентрации

Белокассоциированная фракция натив- безбелковых и белокассоциированных аутоной аутологичной плазмы снижает уровень: агреСсивных и иммуноблокирующих фактоЕК-активности лимфоцитов...:. ров- аутоплаэмы; параллельный курс

: . Отсутствие повышения показателей .. леченйя субтерапевтическимй дозами деHCT-теста сегментоядерных нейтрофилов и 3 "ксазона и терапевтическими-дозамиинтермоноцитов (индуцированный Н CT-тест) мо- ферона.

: 35 жет свидетельствовать об истощении фер- - ."- Спустя две неделй после окончания лементов "дыхательного взрыва" чения необходимо контрольное исследовафагоцитирующих клеток.:. нйе.

Исходноувеличенноерозеткообразова- 40 Описание соответстаует исследованние лимфоцитов с аутологичными эритроци- ::: ным параметрам состояния иммунокомп6тами, увеличенные показатели спонтанного- " тентной сферы, HCT-теста сегментоядерных нейтрофилов и: Пример 5. Короткая схема. моноцитов, увеличенный уровень Спонтанного бластогенеза лимфоцитов, отрицатель-: 5.1. Результаты иммУнологическоГО Мбленая регуляция" Л вЂ”. 2- рекомби„>éòíûì - . Дования пеРиферичЕСкОй Крови:

ФИО В, . ...., ... „..возраст 85 ф-ла венозной крови: мон Tg"- и. 0 с 71 - э 2 лф 12 "Д 17.04.90 обцее количество лейкоцитов-: 8,8 норма 4,0 - 9,0 1С /л процентное содержание лимфоцитов 12 " 18 - g8 4

Абсолютное количество лимфоцитов 1,05 . 0,8 - 3,6 1О"/л

HCT-тест:

2 снонт. с индуц. спонт. < индуц. на фиколле:

76

0,8

40 - 60 /

0,6 - 2,1. 10 /л нейтрофилов спонт; 26 индуц. моноцитов спонт. 0 индуц.

Т-лимфоциты (Е- POK), изолированные процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой:

1782321

28 цельной 16 без белка 70

Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание . . 6 модуляция аутоплазмой: цельной : 23 без белка ::::: : ... 35 модуляция препаратами в субтерапевтической и тер зах: индометацином 21 26 дексазойом 15

А-2-рекомбййантным"ин*терФеройом 34 . 4

В-лимфоциты (ЕАС"POK); изолйрованййе на Фйколле процентное "содержание:- 45 абсолютное колйчество "": 0,43 модуляция аутоплазмой: цельной 12 оез белка 37

0-лимфоциты (ЕАС- POK)-в лейкоконцентрате: йроцентное содержанйе " " 19 модуляция аутоплазмой: цельной: . . .. 2 без белка 31

Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эр процейтйое- содержанйе 26 абсолютное количество 0,27

ik модуляция аутоплазмой цельйой . 46 без белка .. . 45 модуляция препаратами в субтерапевтйческой и тер дозе: ийдометацином 10 0 дексазоном 10 .1-2-рекомбинантйым ийтерфероном 8

T-хелперы: Т-супрессоры (-) (теофиллиновый тест) модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет апевтической до18

20 - 26/

0,3-0,5.10 /л модуляции нет модуляции нет

: модуляции нет модуляции нет итроцитами нет

" нет модуляции нет модуляции нет апевтической

2,2:3,3

5.3. Заключение

Пацйент В. Дата исследования 17.04.90.

У пациента, обслуживаемого системой; вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями;

" Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки повышена.

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Тлимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной йлазмы инвертирует активность изолированных Т-лимфоцитов.

Безбелковая фракция аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию— уменьшает высокую активность изолированных Т-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично комг пенсирует ситуацию — увеличивает сниженйую способность Т-лимфоцитов. лейкоконцентрата .. участвовать в

E-розеткообразовании, Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию — увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовайии.

Способность изолированных В-лимфоцитов образовывать ЕАС-розетки повышена, Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Влимфоцитов, Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов.

1782321

29

Ф-ла венозной крови мой 15 и 0 с 71 э 2 лф 12 Д 17.04.90 .общее количество лейкоцитов " 8,8 норма 4,0 - $,0 10 /л процейтное содернаиие лимфоцитов 12 . 18 " 38% ..Абсолютное количество лимфоцитов 1,05 . 0,8 - 3,6 10 /л

НСТ-тест: нейтрофилов спонт. 26 . индуц 6 спонт. с индуц моноцитов, спойт. 0 - индуц, 2 спонт. с индуц

Т-лимфоциты (Е-POK),изолированные на фиколле:

-процентное содермание . . 76 абсолютное количество " О,S

40 - 60", 06-2,110/л модуляция аутоплазмой цельной - 16

0 модуляции нет модуляции нет беэ белка 7

Т-лимфоциты (Е-POI:) в лейкоконцентрате: процентное содержание модуляция аутоплаз мой ц ел ьной без белка модуляции нет модуляции нет

23

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию — уменьшает активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию — уменьшает пониженную способность

В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-роэеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертируют способность Влимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании.

Отсутствие повышения показателей

НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов "дыхательного взрыва" фагоцитирующих клеток, . Сниженные показатели НСТ-теста мо-- ноцитов могут свидетельствовать о ригидности ферментов "дыхательного взрыва" и функциональной несостоятельности фагоцитирующих клеток.

Исходно увеличенное розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показателй спонтанного

НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и извращенное за счет преобладания Т-хелперных клеток соотношение иммунорегуляторных клеток свидетельствуют в пользу гийотезы о наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетен—. тной сферы (антигены экзо- или эндогенной микрофлоры, распознавайие нормальных и" дифференцировочных антигенов аутологичФИО В, ных тканей), причем in vitro способность лимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной

5 аутоплазмы.

Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, .лейкотриейами и т, д,), так и

1С "воспалительными" гормонами (типа преднизолона). а также за счет преобладания

Т-лимфоцитов хелперов.

lit ч1тго нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуютса удалением

15 аутоагрессивйых факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, индометацином, дексазоном и интерфероном.

5.3. Рекомендации клиницистам.

20 Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации беэбелковых и белокассоциированных аутоагрессивных факторов аутоплазмы; парал-

:"лельный курс riðîòéâîéîñttàëèòåëüíoro

25 лечения субтерапевтическими дозами индометацина, дексазона и интерферона.

Спустя две недели после окончанйя лечения необходимо контрольное йсследование.

З0 Описание соответствует исследованным параметрам сосТОАНМА иммунокомпе тейтной сферы.

Пример 6 - :.. Полная схема

6.1. Результаты иммунологйческого исследования периферической крови; возраст 85

1782321

32 модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 21 26 дексэзоном 15 18

/1-2-рекомбинантным интер>!>ероном 34 4

0-лимфоциты (EAC-РОК), изолированные на фиколле:

20 - 26/

0,3 - 0,5 ° 10 /л

0,48 процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой:

12

37 цельной без белка модуляции нет модуляции нет

В-лимфоциты (ЕАС-POI1) в лейкоконцентрате:

1Ý процентное содержание модуляция аутоплазмой:

31 цельной без белка. модуляции нет модуляции нет

Розеткообразование лимФоцитов с аутологичными эритроцитами нет

26

0,27 процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой нет цельной 46 модуляции нет без белка 45 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 1О О дексазоном 10 6

/>-2-рекомбинантным интер>1>вроном 8 24 т-хелперы: т-супрессоры . (-) 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) Естественная киллерная активность лимфоц и то в 3г

19,29+0,8ь модуляция аутоплазмой цельной 2 без белка 288 модуляция препаратами в субтерапевтической и дозе: индометацином 10 5 дексазоном модуляции нет модуляции нет терапевтической

13 10

;1-2-рекомбинантным интерц>вроном (Ей/мл): 12 24, . 60 18, 300 го, 1500 14, 3000 18, 7500 24, 15000 20;

Реакция бласттрансфэрмации лимфэцитов:

Уровень спонтанного ниже PGA-индуцированного бластогенеза

FGA-индуц.бластогенез 3,14 3 - 8

Кон-А 1,35 3-8

1.PS 3,37 3-6 модуляция аутоплазмой: модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 2,7 1,4 т дексазоном 1,25 1,1

/>-2-рекомбинантным интеррероном (Ей/мл): уровня спонтанного бластогенеза 16 0,76, 60 0,69, 300 0,7, 1500 0,5,,3000 0,6, 7500 0,6, 15000 0,5

FGA-индуцированного бластогенеза 12 1,12, 60 1,1

3 О О 2, 1, 1 5 О О 2, 6 ° 3 О 0 О 1, 2 ° 7 5 О 0 О > 7 > 5 О О О О, 4

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных Т-лимфоцитов.

Безбелковая фракция аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию— уменьшает высокую активность изолированных Т-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию — увеличивает снижен- . цельной спонт.

FGA

Кон-А

LPS без белка спонт

FGA

Кон-А

LPS

6.3. Заключение

Пациент В. Дата исследования 17.04.90. у пациента, обслуживаемого системой; вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями;

Способность изолированных Т-лимфоцитов образовь>вать Е-розетки повышена.

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Тлимфоцитов.

1,83

0,55

2,89

2,0

1,65

0,81

2,18

О, 77" модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет

1782321

34 ную способность Т-лимфоцитов лейкокон- внутренней среде организма раздражителя центрата участвовать в Е-розеткообразова- иммунокомпетентной сферы (антигены экнии. зо- или эндогенной микрофлоры, распознаБезбелковая фракция нативной аутоло- вание нормальных и дифференцировочных гичной плазмы в присутствии клеточного антигенов аутологичйых тканей), причем in микроокружения частично компенсирует vitro способность лимфоцитов образовыситуацию — увеличивает сниженную способ- вать розетки с аутологичнымй эритроцитаность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата уча- ми увеличивается под воздействием обеих ствовать в E-розеткообраэовании. фракций нативной аутоплазмы.

Способность изолированных В-лимфо- Таким образом, иммунное воспаление цитов образовывать EAC-розетки повыше- реализуется, вероятнее всего. как продуктана, ми арахидоновой кислоты (простагландинаФакторы клеточного микроокружения ми, лейкотриенами и т.д.), так и инвертируют активность изолированных В- "воспалительными" гормонами (типа предлимфо цито в. низолона), а также за счет преобладания

Белокассоциированная фракция натив-, Т-лимфоцитов хелперов. ной аутологичной плазмы инвертирует ак- in vitro нарушенные показатели лимфотивность изолированных В-лимфоцитов, идной функции нормализуются удалением

Безбелковая фракция нативной аутоло- аутоагрессивных факторов белокассоции- гичной плазмы частично компенсирует ситу- рованной и безбелковой фракции нативной ацию — уменьшает . активность аутологичной плазмы, индометацином, деизолированных В-лимфоцитов, - ксазоном и интерфероном.

Белокассоциированная фракция натив- 6.3, Рекомендации клиницистам, ной эутологичной плазмы усугубляет ситуа- Показано; детоксикационное лечение, цию — уменьшает пониженную способность направленное нэ снижение концентрации

В-лимфоцитов лейкоконцентрата участво- безбелковых и белокассоциированных аутовать в ЕАС-розеткообразовании, . агрессивных факторов аутоплэзмы; пэрал.. Безбелковая фракция нативной аутоло- лельный курс противовоспалительного гичной плазмы инвертирует способность В-: .лечения субтерапевтическими дозами индолимфоцитов лейкоконцентрата участвовать метацинэ, дексазона и интерферона. в ЕАС-роэеткообразовании,: ... Спустя две недели после окончания леБелокассоциированная фракцйя натив- чения необходимо контрольное исследованой аутологичной плазмы увеличивает уро- ние, вень спонтанного и Кон-А-индуцированного Описание соответствует исследованбластогенеза, уменьшает уровень FGA- и ным параметрам состояния иммунокомпеLPS-индуцированного бластогенеэа., тентной сферы.

Безбелковая фракция нативной аутоло- Сопоставление нового способа с èçâåгичной плазмы увеличивает уровень спон- стными аналогами показывает следующие танного бластогенеза, снижает уровень преимущества нового способа:

FGA- u LPS-индуцированного блэстогенеза. 1) использование предложенной компОтсутствие повышения показателей лексной схемы диагностических исследова;НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов ний на основе общепринятых (индуцированный НСТ-тест) может сеиде- иммунологических приемов (определение тельствовать об истощении ферментов "ды- Е- и ЕАС-розеткообразования, НСТ-тест, рехательного взрыва" фагоцитирующих акция бласттрансформации и т.п,) путемдоклеток. полнительного введения всех факторов

Сниженные показатели НСТ-теста мо- микроокружения иммунокомпетентных кленоцитов могут свидетельствовать о ригид- ток (клетки лейкоконцентрата, аутоэритроности ферментов "дыхательного взрыва" и циты, аутоплэзма, разделенная на функциональной несостоятельности фаго- белокассоциированную и безбелковую цитирующих клеток, фракцию) позволяет получить многоаспектИсходно увеличенное розеткообразова- ную информацию о состоянии макрооргание лимфоцитов с аутологичными эритроци- низма, уточнить клинический диагноз и тами, увеличенные показатели спонтанного сформулировать индивидуальный прогноз

НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и эффективности предполагаемого лечения извращенное за счет преобладания Т-хел- по учету реакции розеткообразования изо- перных клеток соотношение иммунорегуля- лированныхлимфоцитов в присутствии проторных клеток, исходно повышенный тивовоспалительных гормональных и уровень ЕК-активности лимфоцитов свиде- иммуномодулирующих препаратов, в отлительствуют в пользу гипотезы о наличии во чие от аналогов (1-4). где исследуют только

1782321

35 митоген, о т л и ч à lo шийся тем, что, с целью повышения точности диагностики и эффективности коррекции состояния макроорганизма. лечения при одновременном ускорении способа, дополнительно из йериферической крови выделяют аутологичные эритроциты и плазму, которую разделяют на белокасСоцийрованную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения НСТ-теста и определения

Е- и ЕДС-розеткообразования изолированных лимфоцитов и прединкубированных с теофиллийом определяют Е- и ЕАС-розеткообразование изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и в присутствии разлийь1х препаратов гормонального, просутствии аутоэритроцитов совместно с раэлич}нймй"Мммунотропными препаратами определяют естественную клеточную килбласттранСформации на Т- и В-клеточный митоген после M30llvtp088HHb1x лимфоцитов, отдельно m изолйрованных лимфоцитов в

2. Способno п,1, отличавщийся гем, что в качестве йммунотропного гормонального препарата используют дексазон, в качестве" и ротивовосйалйтельного индаме, в.,,,:::г %. }1 «4-,я .;,ъя!}}-, }}, } "}

} ,} } 1

Составйтель А;Третьяк

Техред М,Моргентал

Корректор 0,Кравцова ":.

Редактор

Заказ 4292 " "" Тираж :": Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 . 74 3." c .. } 3 изолированные лимфоциты, аутосыворотку, эрйтроциты барана; достигая узконаправленной цели;

2) суммарное время проведенйя всего комплекса"иммуйологических исследований сокращено до 4 — 6 ч — 3 сут (в отлйчие"от прототипа — 7 суток);

3) макСимальйый забор кр}ови«уменьшен . до 10-15 мл, в отличие от прототипа -27 мл: . . 4) постановка множества параллельных проб позволяет манипулировать широким: диапазойом доз исследуемых лекарственных препаратов;

5) обработку результатов и сбСтавление заклачений — рекомендаций осуществляют на компьютере в автоматйзйрованйом «ре-" " жиме.

Способ испытан на культуре клеток 61 здорового человека, 53 больййх сепсисом; . 21 больного аутоиммунными заболеваниями (ревматизм, бронхйальна}я астма, сис- " темная красная волчанка).

Диагностировайнйе" соСтоянйя макро-: ортанизма и рекоМендации по их icoppeêций йблученнйе после компьютерной обработки подтверждаются к}лиййческйми наблюдениями и контрольными л}абораторными исследованиями, - * :

Формула изобретейия

1 Способ.ойределейия состояйия мак-- роорганизма путем иммунологич} еского исследования периферической крови, включающий получение изолйрованных лимфоцитов и лейкоконцентрата из перифе- " рической крови, проведение НСТ- спойтанного -и «индуцированного теста " .сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в лейкоконцентрате, определение Е-розеткообразования изолированных лимфоци- тов, прединкубйроваййых c òåîôè lIINHQM, и

ЕАС-розеткообразования "изолированных лимфоцитов, определение" еСтеСтвенной клеточной кйллерной актив}ности, йроведе- " ние реакции бласттрансформации изолйро- ваййых лимфоцитов на Т- и Я-клеточный тивовоспалител ьного или иммуномодулирующего" ." действия, on редел я ют розеткообразование изолированных лим- . фоцитов и отдельно б присутствий лейко- концентрата, белокассоциированной и безбелковбй "фракции аутоплазмы и в прилерную активность сначала изолированных } лимфоцй}тоs, а потом отдельно в пр}исутст- вии белокассоцийрованной и беэбелковой фракции аутоплазмй, проводят реакцию прйсутствии белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и иммунот-,ро иных-препар"ат ов. тацин, а в качестве йммуномодулятора — ин- : терферон. "