Способ оценки активности аутоиммунного процесса у больных гепатитом

 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для обследования больных хроническим гепатитом. Цель изобретения - повышение точности оценки активности аутоиммунного процесса у больных хроническим холестатическим гепатитом с помощью НСТ-теста с нейтрофилами крови пациента. Суть изобретения в предварительной инкубации нейтрофилов с водно-солевым экстрактом аутологичной печени и по увеличению ''НСТ-активности по сравнению с контролем оценивают активность аутоим.мунного процесса у пациента.-1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧ Е С К ИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 6 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕН1НОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЙ.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

О:

C с

Ic

1( (21) 4653518/14 (22) 22.02.88 (46) 07.12.92. Бюл. ¹ 45 (71) Луганский медицинский институт (72) В,И.Авершин (56) Домэшенко B.Í, — Лавраторное дело, 1982, ¹ 9, с,521 — 523. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ АУТОИММУННОГО ПРОЦЕССА У БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использоИзобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для иммунологического обследованля бальных хроническим гепатитом, Известен способ оценки аутоиммунитета у больных хроническим гепатитом с помощью HC I-теста с нейтрофилами крови.

Целью изобретения является повышение точности оценки аутоиммунных процессов у больных хроническим холестатическим гепатитом.

Указанная цель достигается тем, что перед проведением НСТ-теста .акрофали, выделение из крови пациента инкубируют в гечение 1,5 часов в водно-солевом антигене i аутолагичной печени, Способ осуществляют следующим образом, Кровь в количестве 5 мл получают иэ локтевой вены, кровь помещают в силиконизированную пробирку с тремя каплями гепарина. Взвесь мононуклеарных клеток (моноцитов и лимфоцитов) получают центрифугированием в градиенте плотности фи„„5U„, 178ОООЗ А1 вано для обследования больных хроническим гепатитом, Цель изобретения — повышение точности оценки активности аутоиммунного процесса у больных хроническим холестатическим гепатитом с помощью

НСТ-теста с нейтрафилами крови пациента.

Суть изобретения в предварительной инкубации нейтрофилов с водно-солевым экстрактом аутологичной печени и по увеличению HCT-активности по сравнению с контролем оценивают активность аутоиммунного процесса у пациента, 1 табл. колл-верографина, доводят до концентра, ции 5 х 10В kn/мл средой 199 с добавлением сыворотки AB группы. Полученную взвесь клеток в количестве 1 мл наносят на обезжиренное стекло, в каплю взвеси добавляют водно-солевой антиген ткани аутологичной печени из расчета 40 мкг белка на 1 мл культуральной жидкости. Стекло инкубируют в течение 1,5 ч при 37 С в термостате в атмосфере 5 $ CQz, Неприлипшие после инкубации клетки удаляют следующим образом: переворачивают стекло, делая висячую каплю, оставляют его в таком положении на

20 мин при комнатной температуре, каплю отсасывают фильтравальной бумагой. Стекго дополнительно промывают 1 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида, На полученный монослой макрофагов наносят 0,1 -ный раствор нитротетраэолиевого синего и фасфатный буфер, стекло повторно инкубируют в термостате при 37 С в течение 15 мин. После инкубации стекло высушивают, фиксируют метанолам и орашивают метиленовым зеленым. Пад микроскопам с масляной имерсией подсчитывают 200 фагоцитов. содержащих и несодержащих гранул ы формазанэ, Количественный показатель: процентное содержание фагоцитов, содер>кащих гранулы формаэана.

Водно-солевой антиген ткани аутологичной печени готовится по общепринятой методике: ткань ауталогичной печени, взятой при краевой интраоперационнай или пункционной ее биопсии, размельчают ножницами, промывают проточной водой в течение 24 ч, затем заливают несколько раз стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. Объем ткани измеряют в стерильном мерном цилиндре и определяют уровнем жидкости. Ткань подвергается гомагенизации, к одной ее части добавляют 4 части изатонического раствора натрия хлорида. Полученную однородную смесь отстаивают при температуре 4 С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение

45 мин. Надосадочная жидкость — водно-солевой экстракт ткани печени — является антигеном и содержит 1,5 — 2,0% белка, Исследование способности мононуклеарных фагоцитов к восстановлению нитросинего тетранитротетразолил в среде, содержащей водно-солевой антиген ткани аутологичной печени, произведено у 10 больных хроническим неосла>кненным калькулезным холециститом и у 10 больных хроническим холестатическим гепатитом, обусловленным длительной перомежающейся механической желтухой на фоне халедахолитиаза и стеноза большого дуонденэльнога сосочка. С целью контроля диагностической эффективности разработаннага способа у этих же больных исследована способность к восстановлению нитросинего тетранитротетрэзолия (НСТ) в среде без добавления водно-солеваго антигена ткани аутолагичной пе.ени, способность лимфацитов периферической крови к бласттрансформации под действием лимфацитарного митогена и водно-солевого антигена ткани эутологичной печени, Эти пробы проведены в обеих группах больных да оперативного вмешательства и в 1-е и 7-е сутки послеоперационного периода.

Полученные результаты приведены в таблице, Результаты клиника-иммунолагическо"а обследования больных хроническим гепатитом показывают:

1) Активность кислородзависимого метаболизма макро >агав периферической крови в среде. содержащей антиген ткани

55 эуталогичнай печени, больных хроническим холесlBilA÷åñêèì . епэтитом, обусловленным перемещаюшейся механической желтухой.

2) отмечена достоверная корреляция между высокими показателями бласттрансформации лимфоцитов периферической крови под воздействием водно-солевого антигена ткани аутологичной печени. как индикатора аутоимунных патологических процессов, и возрастанием кислорадзавислмого метаболизма фагацитов в среде, содержащей антиген ткани аутологичной печени у больных хроническим ха "есгатическим гепатитом, 3) те же показатели у больных хроническим колькулезным холециститом в пробах с печеночным антигеном не отличаются па величине и отсутствию динамики от проб без энтигена.

С целью исследования диагнастлческай эффективности способа в гастроэнтерилагическом центре Луганского медицин:,êîãî института и Луганской абластнал кллн .";ческой больницы обследована 76 больных халестатической формой хронического активного гепатита, у 52 из них гепатлт был вызван длительной хронической аб."урацией внепеченочных желчных путей, Оценка полученных результатов показала, что интенсивность увеличения акислительно-восстановительного метаболизма по

НСТ-тесту у макрофагов в присутствии аутаантигена достоверно (р <0,05) саответс-:.вует уровню активности аутоиммунног0 парэ>кения ткани печени. Увеличение Н СТ-активности на 20% от контрольных данных соответствует умеренно выраженной активности аугоиммунного поражения печени, Возрастание НГТ-теста в присутствии аутаантигена HB 30% и более соответствует высокой активности аутаиммунной гепатопатии, Формула изобретени-.

Способ оценки активности аутаиммунного процесса у больных гепатитом с помощью иммунологического исследования н

НСТ-тесте с нейтрофилами крови,о т л и ч аю шийся тем, чта с целью повышения точности оценки аутоиммунитетэ при хроническом халестатическом гепатите. перед проведением НСТ-теста нейтрафилы дополнительно инкубируют "<,5 ч при 37 С с водно-солевым энтигенам аутолагичной печени и при увеличении НСТ-активности íà 20% по сравнению с пробами без антигена диагностируют умеренную активность аутоиммунного процесса, а при увеличении на 30% — высокую активность.

1780003

Составитель И.Башкаев

Техред M.Moðãåíòàë Корректор M,Màêñèìèøèíåö

Редактор B. Кузнецова

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 4432 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5