Способ диагностики активности туберкулеза легких

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии. Цель изобретения - повышение точности-способа . У больного производят забор крови, выделяют нейтрофилы, инкубируют в присутствии латекса и с последующим отделением супернатанта и инкубацией с ним нейтрофилов донора, вычисляют активность и интенсивность фагоцитоза и при величине этих показателей ниже 1 диагностируют активную форму туберкулеза. По сравнению с прототипом точность увеличивается на 56%.

(19) (11) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s>)s G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ::7 !В-7 (ЯАМИ (21) 4796431/14 (22) 20.02,90 (46) 23.12.92. Бюл. N. 47 (71) Челябинский государственный медицинский институт (72) Т.А.Коряушкина, Я.И.Нестеровский и И,И.Долгушин (56) Беломестнова Е,Ю. Факторы. клеточного и приорального иммунитета при развитии профессионального фиброза легких и осложнение его туберкулезной инфекцией, 1986. с. 24.

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии и иммунологии, и предназначено для диагностики активности туберкулеза легких.

Известен способ диагностики туберкулеза, включающий забор крови, выделение нейтрофилов, инкубацию их с латексом с последующим определением активности (АФ) и интенсивности (ИФ) фагоцитоэа. При этом, если значения полученных показателей ниже нормы, диагностируют активную форму туберкулеза легких И I, Недостатком известного способа является его невысокая точность.

Цель изобретечия — повышение точности способа диагн стики.

Для достиже(ия поставленной цели чистую популяцию (ейтрофилов крови больного культивирую1 в присутствии полистирольного монодисперсного латекса диаметром 1,7 мкм с последующим выделением супернатанта активированных нейт-. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии. Цель изобретения — повышенйе точноСти способа. У больного производят забор крови, выделяют нейтрофилы, инкубируют в присутствии латекса и с последующим отделением супернатанта и инкубацией с ним нейтрофилов донора, вычисляют активность и интенсивность фагоцитоза и при величине этих показателей ниже 1 диагностируют ак. тивную форму туберкулеза. По сравнению с прототипом точность увеличивается на . 56%. рофилов. Дополнительно выделяют моноциты донора, к которым добавляют суперна- Я тант со взвесью частиц латекса в соотношении 1:20 с последующим определением активности (АФ) и интенсивности фагоцитоза моноцитов по отношению к час-, . 4 тицам латекса и вычислением индекса ин-, ОО тенсивности фагоцитоэа по формулам: (д) ф

Ф ИФ моноцитов доно а в с пе натанте, (р

ИФ моноцитов донора в среде 199 у

АФ моно итов доно а в с пе натанте

АФ моноцитов донора в среде 199 и при значениях этих индексов меньше 1 диагностируют активную форму туберкулеза легких, Следующие примеры иллюстрируют осуществление предлагаемого способа.

Пример 1, Степанов В,П., 27 лет, Поступил в стационар для уточнения активности туберкулезного процесса в легких.

1783435

Патология в легких выявлена впервые при профосмотре. Жалобы на незначительную слабость. Снижение аппетита. При перкуссии и аускультации локальные изменения не отмечены, При многократных микробиологических обследованиях различными методиками микобактерии туберкулеза не выявлены. На обзорной рентгенограмме легких, томограммах левой верхушки 6-7 см в верхней доле левого легкого — одиночные крупные средней интенсивности очаги с относительно четкими контурами, однородной структуры. Заключение: очаговый туберкулез верхней доли левого легкого, фаза инфильтрации.

Анализ к9оови: гемоглобин — 162, СОЭ—

4,л — 5,9 10,п — З,С вЂ” 49,n — 39,м — 9, Проведено исследование в соответствии с предлагаемым способом. Иэ венозной гепаринизированной крови (25 ед. гепарина на 1 мл крови) больного (15 мл) выделили чистую популяцию нейтрофилов путем центрифугирования на двОйном градиенте плотности фиколл-верографин (Д1-1,077, Д2-1,093) по методу Wong-Wilson в течение

40 мин при 1500 об/мин, Взвесь гранулоцитов из кольца, образовавшегося на границе между растворами, разводили средой 199 до концентрации 5 10 клеток (нейтрофи лов) в 1 мл и вносили в нее взвесь частиц монодисперсного полистирольного латекса диаметром 1,7 мкм из расчета 50 частиц на

1 нейтрофил, Пробирку со взвесью помещали в термостат при 37 С на 1 ч для получения супернатанта активированных латексом нейтрофилов, Содержимое пробирки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин для удаления клеток и частиц латекса.

Дополнительно выделяли моноциты донора, для чего мононуклеары, выделенные из периферической крови, центрифугировали на двойной градиенте плотности. Образовавшееся кольцо мононуклеаров

"отсасывали и отм., вали двукратно средой

199, Мононуклеары в концентрации 10 клеток в 1 мл инкубировали в течение 1 ч при

37 С в пробирках - "сапожках", на дне которых находились покровные стекла, Затем клетки, прилипшие к стеклу, отмывали от лимфоцитов средой 199 и использовали для исследования фагоцитарной активности в качестве клеток-мишеней для действия секреторных продуктов нейтрофилов. Контролем служили моноциты, инкубированные в среде 199.

В опытные пробирки - "сапожки" добавляли по 1 мл супернатанта активированных латексом нейтрофилов (CAH). После часоt

АФ199=31, АФсдн=16, И Ф 199=127, И Ф удн=61, 20

35

40 лой и средней величины, Слева во! Н! l меж45 реберье мелкие средней интенсивности

5

15 вой инкубации в опытные и контрольные пробирки добавляли по 0,1 мл взвеси стандартизованных микросфер латекса диаметром 1,7 мкм в соотношении 1:20. Пробирки помещали на 1 ч в термостат, после чего монослой трехкратно отмывали средой 199 и окрашивали по Романовскому-Гимзе и определяли активность (АФ) и интенсивность (ИФ) фагоцитоза латекса моноцитами донора в опыте и контроле: в монослое подсчитывали количество фагоцитирующих клеток на 100, что отражает активность фагоцитоэа, и количество поглощенных частиц латекса в 100 подсчитанных клетках— интенсивность фагоцитоза, Определяли значения индексов активности фагоцитоза (ИАФ) и интенсивности фагоцитоза (ИИФ):

ИИФ = — — 0,48 ИАФ = — =0,31

61 16

127 31

Значения обоих показателей меньше

1,0, что в соответствии с предлагаемым способом свидетельствует об активном туберкулезе легких.

Наблюдение за больным в дальнейшем подтвердило правил ность поставлечного диагноза.

Пример 2, Габдурахманов 3.Г., 36 лет

Поступил на дообследование и лечение. Патология в легких выявлена флюорографически при профосмотре, В легких; перкуторно-легочный звук, аускультативно — дыхание везикулярное, хрипов нет . Рентгенологически на обзорных снимках, томограммах правой верхушки 6-7-8 см..Справа в верхней доле немного численные очаги средней интенсивности, контуры четкие маочаги.

В анализе крови при поступлении: гем.

175, СОЭ вЂ” 13, Л вЂ” 4,0, з — 2, и — 1, с — 53, л—

35,м — 2. Анализ мочи без патологии. Реакция Манту — 7 MM. В анализе мокроты методом люминесцентныM и посева многократно BK не выявлено.

В соответствии с предлагаемым способом АФ моноцитов донора с САН больного составила 29, NQ — 107; АФ моноцитов донора в среде 199 — 41 ИФ моноцитов донора в среде 199 — 132, ИАФ = — — = 0,7 ИИФ = — = 0,8

29 107

41 132

1783435

Значения обоих показателей меньше

1,0, что позволило дйагностировать активный туберкулезный процесс в легких больного.

Формула изобретения

Способ диагностики активности туберкулеза легких, включающий забор крови, выделение клеток крови, инкубацию в при5 сутствии латекса, вычисление показателей активности и интенсивности фагоциноза, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, после инкубации клеток крови выделяют супернатант, инку10 бируют с ним моноциты донора человека с последующим вычислением показателей, активности и интенсивности фагоцитоза и при их величине ниже 1 диагностируют активную форму туберкулеза.

В последующем через 2,5 месяца диагноз уточнен на ЦВКК: очаговый туберкулез в/доли правого легкого, фаза инфильтрации. ВК вЂ” 1 группа диспансерного учета.

Точность предлагаемого способа составляет 96% против 60% по способу-прототипу.

Составитель И,Долгушин

Texpep M.Ìîðãåíòàë Корректор Л,Ливринц

Редактор Т.Козлова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 4512 Тираж Подписное,ВНИИПИ Государственного комитета rto изобретениям и откоытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5