Способ выделения супероксиддисмутазы
Использование: биотехнология и медицинская промышленность. Рекомендован в настоящее время за рубежом для лечения патологии суставов, дисплозии легких. Сущность изобретения: выделение супероксиддисмутазы из биомассы продуцента Sacharomyces cerevislae, осуществляют разрушение клеток замораживанием - оттаиванием, экстракцией 0,04 - 0,06 моль/л калий фосфатным буферным раствором, pH 7,7 - 7,9 при соотношении влажного мицелия и экстрагента 1: 3, при 7 - 10oС в течение 20 - 24 ч, перед удалением отработанной клеточной массы суспензию подкисляют до pH 4,4, после чего удаление проводят центрифугированием, ионообменную хроматографию супернатанта проводят на карбоксильном катионите КМТ с последующим концентрированием элюатов методом ультрафильтрации, гель-фильтрацию полученного концентрата проводят на сефадексе G-75 с последующей лиофилизацией целевого продукта. 1 табл.
Изобретение относится к микробиологической и медицинской отраслях промышленности, в частности к способам выделения фермента медицинского назначения, который рекомендован в настоящее время за рубежом для лечения патологии суставов, дисплозии легких и др. Целью изобретения является упрощение способа выделения СОД. П р и м е р. Полученную влажную биомассу продуцента Sacharomyces cerevisiae замораживали при -24оС и размораживали в комнатных условиях, после чего экстрагировали 0,05 моль/л калийфосфатным буферным раствором, рН 7,8, в течение 24 ч при 7оС. По окончании процесса суспензию подкисляли концентрированной уксусной кислотой до рН 4,4. Снижение рН ведет к инактивации фермента, при рН более 4,4 снижается выход фермента на стадии ионообменной хроматографии. Отработанную клеточную биомассу удаляли центрифугированием. Получали экстракт, который в дальнейшем последовательно очищали сначала с помощью ионообменной хроматографии на КМТ, затем гель-фильтрацией на сефадексе G-75. Полученные активные фракции лиофилизировали. Исследования по выбору оптимальных условий выделения представлены в таблице. Как видно из таблицы, несоблюдение хотя бы одного из условий способа по изобретению ведет либо к уменьшению активности в экстракте, либо не увеличивается содержание целевого продукта, но увеличивается продолжительность технологического процесса. Использование способа по изобретению позволит исключить использование органического растворителя, сократить количество стадий выделения, повысить производительность труда за счет повышения скорости процесса на стадии ионообменной хроматографии.
Формула изобретения
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ, включающий разрушение клеток продуцента Sacharomyces cerevisiae, экстракцию и центрифугирование, ультрафильтрацию, ионообменную хроматографию полученного супернатанта, гель-фильтрацию и лиофильную сушку целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, разрушение клеток проводят замораживанием - оттаиванием, экстракцию осуществляют 0,01 0,06 моль/л калийфосфатным буферным раствором с pH 7,7 7,9 при соотношении 1 3 и температуре 7 - 10oС в течение 20 24 ч, полученную суспензию подкисляют до pH 4,4 и центрифугируют, после чего проводят ионообменную хроматографию на карбоксильном катионите КМТ, полученный элюат подвергают ультрафильтрации, а затем проводят гель-фильтрацию на сефадексе G -75.РИСУНКИ
Рисунок 1
